乳腺癌患者組織中PROX1的表達(dá)水平及與預(yù)后的相關(guān)性分析

李 聰 李 翠 楊美嬌

中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院大連醫(yī)院病理科，遼寧大連 116600

乳腺癌是威脅女性健康的主要惡性腫瘤之一，患者經(jīng)手術(shù)治療后，生存率仍不理想。目前認(rèn)為復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是影響乳腺癌患者預(yù)后的重要因素，但目前關(guān)于復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的相關(guān)因素暫不明確，臨床需要更為可靠的指標(biāo)以評估患者預(yù)后[1]。Prospero相關(guān)同源異形盒蛋白1（PROX1）是一種調(diào)節(jié)蛋白，作為同源域轉(zhuǎn)錄因子家族成員，其在多器官及組織發(fā)育過程中發(fā)揮著關(guān)鍵性調(diào)節(jié)作用，并參與淋巴管生成[2-3]。有文獻(xiàn)指出，PROX1參與腫瘤細(xì)胞的分化、增殖、遷移、凋亡及侵襲，但其與患者預(yù)后的關(guān)系暫不明確[4-5]。鑒于此，本研究回顧性分析70例乳腺癌患者臨床資料，進(jìn)一步探討PROX1表達(dá)水平及其與預(yù)后的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院大連醫(yī)院2016年1月～2018年12月收治的70例乳腺癌患者的臨床資料，年齡35～78歲，平均（57.8±6.4）歲；病程2～5年，平均（3.64±1.19）年；身體質(zhì)量指數(shù)（BMI）18.7～ 25.9kg/m2，平均BMI（23.02±1.07）kg/m2；分化程度：低分化 33 例，中分化21例，高分化16例；TNM分期：Ⅰ期19例，Ⅱ期31例，Ⅲ期20例；分子分型：LuminalA型39例，LuminalB型31例；腫瘤直徑：35例為＜2cm，26例為2～5cm，9例為＞5cm。

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn)

（1）納入標(biāo)準(zhǔn)：①均為初次發(fā)??；②均實(shí)施手術(shù)治療，經(jīng)術(shù)后病理學(xué)檢查確診為乳腺癌；③臨床資料完整。（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并凝血功能異常者；②合并嚴(yán)重器官功能衰竭者；③中途退出或轉(zhuǎn)院者。

1.3 方法

術(shù)中采集患者乳腺癌組織，制成石蠟標(biāo)本，切片，制成組織芯片，采用免疫組化染色法檢測乳腺癌及癌旁組織中的PROX1表達(dá)水平，具體操作如下：二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化，微波抗原修復(fù)，加入3%過氧化氫溶液，反應(yīng)30min，加入山羊血清，封閉10min，一抗采用上海羽朵生物科技有限公司生產(chǎn)的鼠抗人PROX1單克隆抗體，于4℃下過夜，二抗采用上海碧云天生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的辣根過氧化物酶標(biāo)記山羊抗小鼠IgG，反應(yīng)30min。二氨基聯(lián)苯胺顯色，蘇木精復(fù)染，脫水、透明、封片，于顯微鏡下觀察，用已知陽性玻片作為陽性對照組，用磷酸鹽緩沖液作為陰性對照組。鏡下隨機(jī)選擇5個(gè)高倍視野，計(jì)算陽性細(xì)胞數(shù)，陽性細(xì)胞數(shù)＞25%判定為陽性。隨機(jī)選擇3個(gè)高倍視野，采用北航CM2000B多功能真彩色病理圖像分析系統(tǒng)對視野進(jìn)行灰度測量，計(jì)算平均灰度值。用半定量評分法[6]評估染色情況：陽性細(xì)胞比例評分：＜5%（0分）、5% ～ 25%（1分）、26% ～ 50%（2分）、51%～75%（3分）、＞75%（4分）；陽性程度評分：無染色（0分）、淺黃色（1分）、棕黃色（2分）、棕褐色（3分）；將兩者評分相乘，若乘積＞4判定為高表達(dá)，乘積≤4判定為低表達(dá)。

1.4 觀察指標(biāo)

（1）隨訪1年，比較PROX1低表達(dá)和高表達(dá)患者的分化程度、TNM分期及預(yù)后。（2）比較預(yù)后良好組與預(yù)后較差組的PROX1陽性率及平均灰度值。（3）評估兩組患者預(yù)后，分析PROX1表達(dá)水平與預(yù)后的相關(guān)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS24.0處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，采用χ2檢驗(yàn)，PROX1表達(dá)水平對預(yù)后的影響采用線性回歸分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PROX1表達(dá)水平

隨訪結(jié)果顯示，70例乳腺癌患者中，有40例未復(fù)發(fā)，有26例復(fù)發(fā)，有4例死亡。將40例未復(fù)發(fā)患者劃分為預(yù)后良好，將30例復(fù)發(fā)和死亡患者劃分為預(yù)后較差；PROX1高表達(dá)患者中，中分化和高分化患者占比較高，TNM分期Ⅲ期患者占比較高，預(yù)后較差患者占比較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 PROX1在不同分化程度及TNM分期中的表達(dá)水平[n（%）]

2.2 預(yù)后良好組與預(yù)后較差組的PROX1陽性率及平均灰度值比較

預(yù)后良好組的PROX1陽性率及平均灰度值均低于預(yù)后較差組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 預(yù)后良好組與預(yù)后較差組的PROX1陽性率及平均灰度值比較（x ± s）

2.3 PROX1表達(dá)水平與預(yù)后的相關(guān)性

經(jīng)線性回歸分析發(fā)現(xiàn)PROX1表達(dá)水平與預(yù)后的線性回歸方程：Y=0.783+0.483X，結(jié)果顯示，PROX1表達(dá)水平可影響預(yù)后（P＜0.05）。見表3。

表3 PROX1表達(dá)水平與預(yù)后的線性回歸檢驗(yàn)結(jié)果

3 討論

近年來，乳腺癌的早期診治水平得到提升，治愈率提高。但乳腺癌發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，其分子機(jī)制尚未得到全面合理的闡述，患者早期即可發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，造成治療后預(yù)后不佳，因此臨床評估乳腺癌患者預(yù)后不能僅依據(jù)疾病分期或淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，還需選擇更為可靠的評估指標(biāo)[7]。PROX1在淋巴管發(fā)育中起到一定作用，是高度保守的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，其在胚胎形成中發(fā)揮著重要作用，并參與肝臟、眼、胰腺、神經(jīng)系統(tǒng)、心臟及淋巴管等組織器官的生長發(fā)育[8-9]。在細(xì)胞中，PROX1參與神經(jīng)干細(xì)胞及中間前體細(xì)胞的平衡調(diào)節(jié)，并與淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)育、成熟密切相關(guān)，可反饋淋巴分化。而近年來的有關(guān)研究還發(fā)現(xiàn)，PROX1與惡性腫瘤細(xì)胞分化、增殖、侵襲有關(guān)，參與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過程，其在膽囊癌、膽管癌、子宮內(nèi)膜癌、結(jié)腸癌、胃癌、膠質(zhì)瘤中均呈現(xiàn)高表達(dá)[10-13]。

目前有關(guān)PROX1在乳腺癌組織中的表達(dá)水平暫無較多文獻(xiàn)報(bào)道，其高表達(dá)可能與乳腺癌淋巴轉(zhuǎn)移、分化程度及TNM分期密切相關(guān)，提示PROX1參與乳腺癌惡性化過程。但目前對于PROX1的具體作用機(jī)制尚未明確，其與患者預(yù)后的關(guān)系有待進(jìn)一步探討。本研究結(jié)果顯示，PROX1高表達(dá)患者中，中分化和高分化患者占比較高，TNM分期Ⅲ期患者占比較高，預(yù)后較差患者占比較高，預(yù)后良好組的PROX1陽性率及平均灰度值均低于預(yù)后較差組，經(jīng)線性回歸分析發(fā)現(xiàn)，PROX1表達(dá)水平與預(yù)后的線性回歸方程：Y=0.783+0.483X，結(jié)果顯示，乳腺癌組織中PROX1水平呈高表達(dá)，PROX1陽性率及平均灰度值與乳腺癌患者預(yù)后密切相關(guān)，可通過檢測上述指標(biāo)，制定針對性治療方案，評估患者預(yù)后。究其原因在于，PROX1在腫瘤進(jìn)展中具有多種作用機(jī)制：（1）可標(biāo)記腫瘤干細(xì)胞，其表達(dá)水平升高可反饋腫瘤干細(xì)胞數(shù)量增加，癌細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)加??；（2）可調(diào)控上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，并可調(diào)節(jié)細(xì)胞的極性、黏附，促使癌癥病情進(jìn)展；（3）調(diào)節(jié)淋巴管生成，促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移[14-15]。總而言之，PROX1具有促癌作用，其與癌癥進(jìn)展密切相關(guān)，對患者預(yù)后有較大影響，可作為評估乳腺癌患者預(yù)后的重要指標(biāo)。本研究選取例數(shù)較少，隨訪時(shí)間過短，且未對PROX1與患者年齡、病程、分子分型與腫瘤大小的相關(guān)性進(jìn)行探討，結(jié)論具有一定局限性，應(yīng)擴(kuò)大研究例數(shù)，延長隨訪時(shí)間，增加研究指標(biāo)，以進(jìn)一步分析乳腺癌患者組織中PROX1的表法水平與患者預(yù)后的相關(guān)性。

綜上所述，乳腺癌組織中PROX1水平呈高表達(dá)，PROX1陽性率及平均灰度值與乳腺癌患者預(yù)后密切相關(guān)，可通過檢測上述指標(biāo)，制定針對性治療方案，評估患者預(yù)后。