血管生成素樣蛋白8與冠心病患病及嚴(yán)重程度的相關(guān)性

武 悅，馬 賓，劉進(jìn)軍，李 靜，佘劍雄，耿 旭，宣 玲

(蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 1.心血管內(nèi)科；2.醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科；3.急診內(nèi)科，安徽 蚌埠 233004)

CHD是心血管疾病最常見的形式之一，其主要病理過程是動(dòng)脈粥樣硬化，有證據(jù)表明，血脂異常及糖耐量異常與心血管病的發(fā)病密切相關(guān)[1]。盡管再灌注及藥物可有效治療CHD，但其仍是我國國民患病死亡的主要原因，且呈上升趨勢[2]。因此，CHD的早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療對改善患者的遠(yuǎn)期預(yù)后和生活質(zhì)量具有重要的臨床價(jià)值，故而尋找與冠心病發(fā)病相關(guān)的危險(xiǎn)因素、有意義的預(yù)測標(biāo)志物以及有效的防治措施，成為目前研究者們的關(guān)注和探討的重點(diǎn)。ANGPTL8是最新發(fā)現(xiàn)的一種營養(yǎng)依賴型脂肪生成因子，是餐后脂肪酸運(yùn)輸和儲(chǔ)存到脂肪組織的潛在中介，通過與脂蛋白脂肪酶(Lipoprotein lipase，LPL)結(jié)合，參與調(diào)節(jié)TG代謝[3-4]。另外，Niki等的研究表明ANGPTL8水平與頸動(dòng)脈壁厚度呈正相關(guān)[5]。然而，近年來相關(guān)研究表明血漿ANGPTL8水平與脂代謝及葡萄糖代謝之間的關(guān)系仍存在爭議，關(guān)于血漿AMGPTL8水平與冠心病的相關(guān)仍較少。因此本研究旨在進(jìn)一步探索血漿ANGPTL8與脂代謝的相關(guān)性，了解其與冠心病患病及嚴(yán)重程度的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 研究對象回顧性分析2018年10月至2019年4月間就診于蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科并接受冠狀動(dòng)脈造影的患者。根據(jù)中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管病學(xué)分會(huì)修訂的2007冠心病診斷與治療指南[6]將研究對象分組，對照組(control，CON)為冠脈管腔未見明顯狹窄的患者，共40例，年齡50～80歲，平均年齡(63.30±8.41)歲；CHD組共145例，年齡46～81歲，平均年齡(65.11±9.06)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：主訴為胸痛入院，完善相關(guān)輔助檢查，排除手術(shù)禁忌癥后，行冠狀動(dòng)脈造影術(shù)者。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)往有心肌梗死病史，或有冠狀動(dòng)脈介入治療史或冠狀動(dòng)脈旁路移植手術(shù)史；(2)其他心血管疾病，如心功能不全、心臟瓣膜病、心肌炎等；(3)肝腎功能不全；(4)惡性腫瘤；(5)近期有創(chuàng)傷或手術(shù)病史；(6)近期有妊娠或哺乳史。

1.2 冠心病的診斷標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)美國心臟病協(xié)會(huì)的診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]，心外膜下冠狀動(dòng)脈包括：左主干(left main coronary artery，LM)、左前降支(left anterior descending branch，LAD)、左回旋支(left circumflex，LCX)、右冠狀動(dòng)脈(right coronary artery，RCA)，其中任何一支血管的狹窄程度≥50%均可診斷為CHD。本研究經(jīng)蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)同意批準(zhǔn)，所有研究對象在入選前均已告知并簽署之情同意書，本次研究遵從赫爾辛基宣言。

1.3 資料收集及指標(biāo)測定記錄研究對象的一般資料和重要既往史，包括性別、年齡、高血壓、糖尿病等病史。留取研究對象空腹8h的靜脈血標(biāo)本5mL并在室溫下靜置30min，以3000r/min的速度將血漿離心15min，收集上清分裝于500μL EP管中，于-80°C超低溫冰箱中冷藏，避免反復(fù)凍融，保證同批次檢測。按照蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)科標(biāo)準(zhǔn)，對FBG、FIB、TC、TG、HDL、低密度脂蛋白(Low density lipoprotein，LDL)、低密度脂蛋白膽固醇(Low density lipoprotein cholesterin，LDL-C)、CRP水平等進(jìn)行測定。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血漿中ANGPTL8濃度，ELISA試劑盒由武漢伊艾博科技有限公司提供，批內(nèi)及批間變異系數(shù)分別<5%和<10%，檢驗(yàn)過程嚴(yán)格按試劑盒和儀器操作說明書進(jìn)行。

1.4 狹窄程度評(píng)價(jià)住院期間經(jīng)橈動(dòng)脈或股動(dòng)脈行冠狀動(dòng)脈造影術(shù)，將冠狀動(dòng)脈管腔狹窄≥50%或LM狹窄i>50%診斷為CHD。將LM、LAD、LCX和RCA定義為主要冠狀動(dòng)脈。根據(jù)1984年美國心臟協(xié)會(huì)規(guī)定的冠狀動(dòng)脈血管圖像分段評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)和Gensini評(píng)分系統(tǒng)對每支血管狹窄程度進(jìn)行定量分析[8]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 23.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，兩組間比較行t檢驗(yàn)，多組均數(shù)比較采用單因素方差分析，計(jì)數(shù)資料采用頻數(shù)和百分比(n，%)表示，行卡方檢驗(yàn)。各變量間相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析和多元線性回歸分析及多因素logistic回歸分析。以性別、年齡、糖尿病患病率、血漿ANGPTL8濃度等相關(guān)因素為自變量，是否患有冠心病為因變量，評(píng)價(jià)CHD發(fā)病的危險(xiǎn)因素。以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般臨床資料與生化指標(biāo)CHD組與CON組在年齡(P=0.252)、性別(P=0.860)、FIB(P=0.060)、TC(P=0.255)、LDL(P=0.061)、LDL-C(P=0.074)等方面差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；CHD組高血壓病患病率(P=0.045)、糖尿病患病率(P=0.001)、FBG(P=0.005)、TG(P=0.023)、CRP(P=0.021)、血漿ANGPTL8濃度(P=0.000)等均高于CON組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，CHD組HDL(P=0.002)低于CON組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1。兩組間血漿ANGPTL8濃度的比較見圖1。

圖1 組間ANGPTL8水平的比較

表1 各組一般資料及臨床指標(biāo)的比較

2.2 血清ANGPTL8與一般資料及臨床指標(biāo)的相關(guān)性分析多種臨床指標(biāo)與血漿ANGPTL8表達(dá)顯著相關(guān)，其中Gensini評(píng)分、性別、年齡、糖尿病患病率、TG、LDL、LDL-C、CRP等與血漿ANGPTL8濃度呈正相關(guān)(r值分別為0.835、0.190、0.356、0.199、0.204、0.198、0.169、0.225，P<0.05)，HDL與血漿ANGPTL8濃度呈負(fù)相關(guān)(r值為-0.241，P<0.05)見表2。血漿ANGPTL8濃度與Gensini評(píng)分的相關(guān)性見圖2。

表2 ANGPTL8與各觀察指標(biāo)的相關(guān)性分析

圖2 ANGPTL8水平與Gensini評(píng)分的相關(guān)性

2.3 血清ANGPTL8濃度與Gensini評(píng)分的多元線性回歸分析以Gensini評(píng)分為因變量，以ANGPTL8濃度、性別、年齡、高血壓病患病率、糖尿病患病率、FBG、FIB、TC、TG、等作為自變量，進(jìn)行多元線性回歸分析。結(jié)果表明，HDL、ANGPTL8與Gensini評(píng)分有線性回歸關(guān)系，且獨(dú)立于年齡、性別、FBG等影響因素之外，見表3。

表3 血清ANGPTL8水平與Gensini評(píng)分的多元線性回歸分析

2.4 多因素Logistic回歸分析以性別、年齡、糖尿病患病率、FIB、TG、HDL、LDL-c、ANGPTL8濃度為自變量，以是否患有CHD為因變量，結(jié)果示，性別與CHD發(fā)病相關(guān)聯(lián)，男性更易患病；HDL與CHD發(fā)病呈負(fù)相關(guān)；FIB及ANGPTL8濃度與CHD發(fā)病呈正相關(guān)，見表4。

表4 冠心病相關(guān)預(yù)測因素的多因素logistic回歸分析

3 討論

ANGPTL8是ANGPTLS家族的非典型成員，缺乏N端卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域和C端纖維蛋白原結(jié)構(gòu)域，又名GM6484、RIFL、lipasin和betatrophin，ANGPTL8主要表達(dá)在肝臟以及脂肪組織[9]，在本研究中，血漿ANGPTL8水平在冠心病患者中較無冠心病患者顯著升高，且與冠心病的嚴(yán)重程度相關(guān)，該嚴(yán)重程度體現(xiàn)在Gensini評(píng)分(即狹窄血管及節(jié)段)，另外，血漿ANGPTL8水平與TG及糖尿病患病率存在正相關(guān)。

血脂異常是動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病(Cardiovascular disease，CVD)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[10]。近年來，基于全基因組關(guān)聯(lián)研究提示ANGPTL8在脂質(zhì)代謝中起了重要作用[11]。除此之外，Wang Y等人提出[12]，ANGPTL8敲除的小鼠在飼喂?fàn)顟B(tài)下TG水平較低，但在禁食狀態(tài)下并未降低。一項(xiàng)前瞻性隊(duì)列研究顯示，240名韓國兒童空腹ANGPTL8水平與空腹TG水平呈正相關(guān)[13]。本研究得出，CHD組TG明顯高于對照組，且與ANGPTL8濃度呈正相關(guān)，而LDL明顯低于CON組，且與ANGPTL8呈負(fù)相關(guān)，這表明ANGPTL8可能通過作用于TG或者HDL影響血脂代謝，從而參與CHD的發(fā)病。

CHD往往會(huì)伴隨糖尿病、脂代謝紊亂等合并出現(xiàn)，其中較常見的是CHD合并糖尿病。糖尿病患者并發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化的具體機(jī)制尚不完全清楚，因此，識(shí)別與2型糖尿病并發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)的新型生物標(biāo)志物及其潛在機(jī)制至關(guān)重要。許多國外研究均提示，ANGPTL8具有顯著的促進(jìn)胰島β細(xì)胞增殖的功能，例如Kugelberg E[14]和Lickert H[15]研究報(bào)道，ANGPTL8與2型糖尿病發(fā)展中的兩個(gè)重要過程——胰島素抵抗和脂質(zhì)代謝相關(guān)，也可以調(diào)節(jié)胰島素抵抗環(huán)境下β細(xì)胞的復(fù)制。Chen X等提出[16]，健康正常人體內(nèi)ANGPTL8的水平是無差異的，但空腹血糖異常及糖耐量受損的患者血漿ANGPTL8水平有明顯差異。然而，Hassan[17]等提出，2型糖尿病患者與正常受試者間的ANGPTL8濃度無明顯差異。考慮到ANGPTL8對胰島β細(xì)胞增殖有顯著的促進(jìn)作用，而糖尿病又是冠心病的等危癥[18]，所以不能排除ANGPTL8與CHD的發(fā)生發(fā)展有密切聯(lián)系，故仍需要進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究驗(yàn)證，冠心病與ANGPTL8水平間的聯(lián)系是否通過影響糖代謝起作用。我們的研究發(fā)現(xiàn)，CHD組糖尿病患病率及空腹血糖均明顯高于對照組，且與血漿ANGPTL8濃度呈正相關(guān)，提示血漿ANGPTL8濃度與糖代謝存在密切關(guān)系，而血漿ANGPTL8可能通過影響糖代謝從而參與冠心病發(fā)病。

大量研究發(fā)現(xiàn)動(dòng)脈粥樣硬化除了脂質(zhì)沉積說法外，血清炎癥因子在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展過程中起著極為重要的作用[19]。CRP是一種時(shí)相性的反應(yīng)蛋白，可以對炎癥狀況進(jìn)行及時(shí)反映[20]。CRP的含量和冠心病患者的冠狀動(dòng)脈病變相關(guān)嚴(yán)重程度存在一定關(guān)系[21]。同國內(nèi)外研究現(xiàn)狀一致，本研究結(jié)果也顯示，冠心病組患者CRP濃度較對照組明顯升高，且與血漿ANGPTL8濃度呈正相關(guān)。相關(guān)原因可能是，CRP參與患者粥樣硬化斑塊的形成及發(fā)展過程，早期動(dòng)脈硬化斑塊中存在CRP聚集現(xiàn)象，于新生內(nèi)膜的近中膜部位比較顯著，CRP對內(nèi)皮損傷具有促進(jìn)作用[22]；另外它還會(huì)抑制主動(dòng)脈內(nèi)皮質(zhì)細(xì)胞中的纖溶酶原激活物的活性，促進(jìn)血小板黏附，進(jìn)而加重動(dòng)脈粥樣硬化的狹窄程度，導(dǎo)致病變加重[23]。一項(xiàng)針對代謝綜合征受試者的臨床研究發(fā)現(xiàn)，血漿ANGPTL8與典型炎癥標(biāo)志物高CRP呈正相關(guān)[24]。本研究結(jié)果亦提示CRP與血漿ANGPTL8濃度呈正相關(guān)，故考慮血漿ANGPTL8水平與冠心病發(fā)病關(guān)系可能通過炎性因素起作用，該結(jié)論有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證明。

FIB參與凝血過程，除可直接引起血黏度增高外，還可誘導(dǎo)紅細(xì)胞及血小板聚集，降低血液流動(dòng)性，影響血流對血管壁的切流速度，刺激血管平滑肌細(xì)胞增生，進(jìn)一步加重動(dòng)脈硬化和血栓程度。SouadKotbi等[25]發(fā)現(xiàn)，血漿FIB水平與冠心病的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。本研究結(jié)果與其他報(bào)道一致，冠心病患者入院時(shí)血漿FIB濃度高于對照組，多因素logistic回歸分析結(jié)果顯示，入院時(shí)血漿FIB濃度與冠心病患病呈獨(dú)立的正關(guān)聯(lián)，血漿ANGPTL8濃度一樣，可作為冠心病患病的獨(dú)立預(yù)測因素，同時(shí)血漿ANGPTL8水平與冠心病發(fā)病及冠脈病變嚴(yán)重程度的關(guān)系可能。

4 結(jié)論

冠心病組血漿ANGPTL8水平較正常對照組顯著升高，與Gensini評(píng)分呈正相關(guān)，提示血漿ANGPTL8濃度可能是冠心病患者冠脈病變嚴(yán)重程度的重要預(yù)測因素，且血漿纖維蛋白原濃度及血漿ANGPTL8水平可作為冠心病發(fā)病的獨(dú)立預(yù)測因素，臨床上可用于冠心病的早期發(fā)現(xiàn)與診斷，為冠心病的防治提供了新的研究方向。