凹脈金花茶沖劑抗氧化活性研究*

程金生，李舒雅,2，萬維宏,2，范文明

(1 韶關學院英東食品學院，廣東 韶關 512005；2 佛山市瓊露健康科技有限公司，廣東 佛山 528000)

金花茶(CamelliaChrysantha)屬山茶科山茶屬植物，因胡先嘯博士的鑒定而得名[1]。是國家一級保護植物之一[2]。近年來一些研究者發(fā)現(xiàn)金花茶富含許多對人體有益處的功效成分，如氨基酸、維生素、茶多酚類、齊墩果酸、黃酮類物質(zhì)，以及多種微量元素[4-6]。凹脈金花茶(CamelliaimpressinervisChang et S. Y. Liang)是金花茶代表性品種之一。盡管目前市場上已經(jīng)出現(xiàn)少量凹脈金花茶深加工產(chǎn)品，但具有保健功能的凹脈金花茶保健食品越來越被當代消費者青睞，且市場對快捷、方便的金花茶保健產(chǎn)品需求越打越大。隨著近年來食品科技的不斷進步，融入了新科技、方便型的保健食品將愈來愈成為主流。沖劑類產(chǎn)品體積小，且攜帶、食用方便，符合現(xiàn)代人尤其是年輕消費者對保健食品的需求。但甚少見凹脈金花茶沖劑的相關報道。本研究通過對防城港凹脈金花茶的葉和花中有效物質(zhì)的提取和分離純化，純度高，無溶劑殘留，符合食品或醫(yī)藥產(chǎn)品規(guī)范。所制凹脈金花茶抗氧化沖劑口感酸甜適中，老少皆宜，攜帶方便，可方便不同人群飲用，是一種抗氧化保健價值較高的純天然沖劑。為凹脈金花茶深加工提供新思路，符合當前食品安全及健康養(yǎng)生理念。所開發(fā)產(chǎn)品具有較好的產(chǎn)業(yè)應用前景，并進一步提高凹脈金花茶附加值。

如今社會環(huán)境污染日益嚴重，大量的揮發(fā)性有機污染物，汽車尾氣和工業(yè)廢氣令人們體內(nèi)自由基積累越來越多。且在工作、生活中，人們長期處于電視屏幕、手機、電腦、打印機等現(xiàn)代化設備輻射中，加速人體細胞的氧化。另外一方面，一些人群吸煙、酗酒、或者運動過度、壓力過大以及食用一些加工過度精細食品，過度攝入油脂類食品也極易導致皮膚糖化導致暗沉、松弛皺紋等老化現(xiàn)象，人體相應的臟器及血管也因為上述生活中過量自由基的沉積而導致衰老或功能衰弱，連帶引發(fā)高血壓等心腦血管疾病。開發(fā)凹脈金花茶天然抗氧化食品或藥品具有重要社會意義[7-9]。

1 實 驗

1.1 主要儀器

101A-3電熱恒溫鼓風干燥箱，上海索域試驗設備有限公司；ME104T電子天平，賽多利斯科學儀器(北京)有限公司；DFY-400C高速多功能粉碎機，上海利聞科學儀器有限公司；FSJ-501超細微粉粉碎機，上海有建電子科技有限公司；Agilent6890-5973氣相色譜聯(lián)用，蘇州安捷倫精密機械有限公司；UV2400紫外分光光度計，北京世紀科信科學儀器有限公司；KQ3200E超聲波清洗器，昆明市超聲儀器有限公司；HH-6恒溫水浴鍋，上海一科儀器有限公司；IKA RV8 V旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，艾卡(廣州)儀器設備有限公司。

1.2 主要試劑

防城港凹脈金花茶，南寧市田園之香食品店；微晶纖維素(市售食品級)，陜西晨明生物科技有限公司；阿拉伯膠(市售食品級)，泰安市鼎力膠業(yè)有限公司；甘露醇(市售食品級)，河南樂泰食品有限公司；可溶性淀粉(市售食品級)，上海麥克林生化科技有限公司；檸檬酸(市售食品級)，大自然生物集團有限公司；沒食子酸標準品(分析純)，佛山市瓊露健康科技有限公司；硅膠(HF254)，上?？道噬锟萍加邢薰?；大孔樹脂(XAD-200)，上海摩速科學器材有限公司；乙醚、乙醇等溶劑等均為分析純，阿拉丁化學試劑有限公司。

1.3 主要研究方法

1.3.1 茶多酚浸提、濃縮和純化

超聲波輔助浸提技術提取凹脈金花茶得凹脈金花茶多酚粗提物，超聲波浸提的頻率為180 W，浸提溫度為70 ℃，浸提20 min。將所得凹脈金花茶浸提液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑得茶多酚粗提液。隨后以進一步采用大孔樹脂對茶多酚進行純化。首先用95%的乙醇浸泡樹脂24 h，用去離子水漂洗至無醇味后，茶多酚的粗提液過柱處理(2.5 BV/h的流速)，待粗提液出口處濃度為進口處濃度的十分之一時，停止操作。從而使大孔樹脂達到飽和狀態(tài)，最后設置有濃度梯度乙醇洗脫達到純化的效過，其濃度分別為10%和30%，過柱流速為2.5 BV/h。得到茶多酚純化液。

1.3.2 凹脈金花茶沖劑制備

圖1 凹脈金花茶沖劑典型制備工藝

為了使所制的沖劑有良好的凹脈金花茶風味、口感效果和更佳的顆粒組織狀態(tài)，需要添加可溶性淀粉、微晶纖維素崩解劑和阿拉伯膠黏合劑和檸檬酸來作為填充劑進行調(diào)配，另外添加健康的非糖物質(zhì)，如甘露醇和木糖醇作為甜味劑，調(diào)整沖劑的口感，避免澀味的不良影響。經(jīng)探索，本工作最優(yōu)化比例為：凹脈金花茶茶多酚濃縮液40%、微晶纖維素5%、阿拉伯膠18%、可溶性淀粉1.5%、甘露醇15%、木糖醇15%、檸檬酸0.5%。沖劑顆粒成品的質(zhì)量應達到肉眼可見時顆粒飽滿、干燥、不結塊、大小均一(理論上顆粒的細度應通過20～40目篩)，色澤一致為淡黃色；所得沖劑用適量溫水溶解，要求無焦屑等雜質(zhì)。將按比例制得的凹脈金花茶沖劑顆粒干燥并滅菌后，按10 g/包分裝。

1.3.3 標準曲線的繪制

由凹脈金花茶所分離純化后的茶多酚含量按照“GB/T 31740.2-2015《茶制品》第2部分：茶多酚的方法”進行測定，選擇沒食子酸為校正標準定量茶多酚，該過程中，福林酚試劑可將茶多酚的羥基氧化為藍色(最大吸收波長為765 nm)。

1.3.4 凹脈金花茶沖劑抗氧化能力測試(以羥基自由基(·OH)的清除試驗為例)

1.3.4.1 實驗原理

羥基自由基具有較強破壞性的活性氧。本工作采用芬頓體系產(chǎn)生的羥基自由基與抗氧化劑反應，根據(jù)反應體系對光的吸收范圍內(nèi)來測定吸光度，其數(shù)值的變化可反映出抗氧化劑的性能強弱，從而得知·OH被清除的情況。

1.3.4.2 實驗方法

配置pH=7.4的磷酸緩沖溶液(a液)、9 mmol/L的鄰二氮菲溶液(b液)、9 mmol/L的FeSO4溶液(c液)、8.8 mmol/L的H2O2溶液(d液)和5種濃度分別為0.25 mg/mL、0.5 mg/mL、0.75 mg/mL、1 mg/mL、1.5 mg/mL的抗壞血酸溶液，以及凹脈金花茶待測液。先往試管里加入a液2 mL，b液1 mL，充分混勻，加入c液1 mL，立即混勻，分別加入1 mL上述濃度梯度的抗壞血酸溶液和凹脈金花茶抗氧化待測液，混勻，繼續(xù)加入d液，最后用去離子水補充到10 mL(Ax)。同時做一管樣品空白試驗(A0)。另再做一組不加H2O2溶液，加入上訴試劑后直接加去離子水補充至刻度線10 mL(Ax0)。放置在37 ℃的恒溫水浴中恒溫1 h，在波長為510 nm處測出各吸光值計算，實驗重復2次，羥基自由基的清除率按下式計算：

2 結果與討論

2.1 凹脈金花茶沖劑對羥基自由基的清除能力

由圖2可以看出，抗壞血酸溶液和所制備的凹脈金花茶沖劑對羥基自由的清除率與溶液的濃度呈正相關關系，清除率會隨著濃度的增大而升高，雖然圖中顯示的凹脈金花茶沖劑的清除率稍低于抗壞血酸溶液的清除率，但其濃度在0.5～1.0 mg/mL時，線性良好。當濃度到了1.5 mg/mL時，凹脈金花茶沖劑、抗壞血酸清除率均達到了峰值。可以證明，凹脈金花茶沖劑對羥基自由基有較好的清除能力，且濃度在1.5 mg/mL時有最高清除率(62.52%)。

2.2 凹脈金花茶沖劑對DPPH·自由基的清除能力

圖3 凹脈金花茶沖劑對DPPH·自由基的清除能力

由圖3可以看出，隨著抗壞血酸濃度的提高，凹脈金花茶沖劑清除DPPH·自由基的清除率不斷提高，由此可見凹脈金花茶抗氧化沖劑對其的清除程度和沖劑濃度呈線性關系，并且通過計算，得出凹脈金花茶沖劑在較低濃度下對DPPH·已有較強的清除能力。當濃度為1.0 mg/mL時，凹脈金花茶沖劑對該自由基的清除率達到最高，超過80%。

2.3 對超氧陰離子自由基的清除能力

圖4 凹脈金花茶沖劑對超氧陰離子自由基的清除能力

由圖4可以看出，凹脈金花茶沖劑和抗壞血酸在一定程度上具有清除鄰苯三酚超氧離子的能力，且隨著它們濃度的增加，對自由基的清除能力也隨之提升。在等濃度時，在0～0.1 mg/mL濃度區(qū)間時，凹脈金花茶劑的清除能力強于抗壞血酸，而在0.1～0.3 mg/mL濃度區(qū)間時，抗壞血酸對鄰苯三酚超氧離子的清除率則高于凹脈金花茶沖劑。需注意的是，兩者在濃度在高于0.1 mg/mL后，清除能力都隨著濃度的增大而大幅度增強。顯示本工作所開發(fā)的凹脈金花茶沖劑對超氧離子有較好的清除能力。

3 結 論