單硝酸異山梨酯擇時(shí)微孔滲透泵片的制備及含量測(cè)定

鄒 青 全海燕 李 平

湖南環(huán)境生物職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖南衡陽 421000

單硝酸異山梨酯（isosorbide mononitrate） 化學(xué)名 1，4：3，6-二脫水-D-山梨醇-5-硝酸酯，為新一代硝酸酯類抗心絞痛用藥，特別適用于冠心病、心絞痛患者的防治，是目前硝酸酯類藥物中較有前途的品種之一[1-3]。最新的研究結(jié)果顯示[4]：心腦血管疾病的高死亡率在一定程度上是因?yàn)槿藗儧]有意識(shí)到疾病背后隱藏的時(shí)辰節(jié)律性[5]。研究發(fā)現(xiàn)，凌晨6 ～ 13點(diǎn)之間心血管疾病的發(fā)病率比其他時(shí)段高30% ～ 40%[6]。目前單硝酸異山梨酯的制劑主要為口服制劑和透皮吸收制劑，開發(fā)研究的重點(diǎn)集中在緩控釋制劑上[7]。單硝酸異山梨酯普通片劑目前在國(guó)內(nèi)外應(yīng)用較廣，但在實(shí)際使用中由于存在著服藥間隔和服藥劑量掌握不嚴(yán)格兩個(gè)主要問題致使60%以上的患者由于產(chǎn)生耐受性而未得到最佳療效。而單硝酸異山梨酯緩釋片明顯改善了藥物濃度波動(dòng)大的問題，降低了藥物的耐受性。但該制劑僅改善了普通制劑波動(dòng)較大的現(xiàn)狀，并沒有考慮到心絞痛疾病的時(shí)辰節(jié)律性[8]，并不能提供心血管疾病所需要的脈沖釋藥曲線。本研究根據(jù)藥物的性質(zhì)、心絞痛疾病的發(fā)病特點(diǎn)及時(shí)辰藥理學(xué)的指導(dǎo)，擬采用單層滲透泵技術(shù)，在片芯外分別包HPMC隔離衣膜和控釋衣膜（含致孔劑，無需打孔）制備一種具有4h時(shí)滯的新型單硝酸異山梨酯擇時(shí)釋放微孔滲透泵控釋片[9-10]——可防治晨發(fā)性心絞痛，并采用高效液相色譜法建立了該制劑的含量測(cè)定方法[11]，為該新劑型的研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器

LC-10AP高效液相色譜儀（日本島津分析儀器公司）；N-2000雙通道色譜工作站（浙江大學(xué)智能信息工程研究所）；SPD-10Avp紫外檢測(cè)器（日本島津分析儀器公司）；BS110S型電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；KQ3200B型超聲清洗器（昆山超聲儀器有限公司）；BY300A小型包衣鍋（上海黃海藥檢儀器廠）；TDP型單沖壓片機(jī)（上海天祥、健臺(tái)制藥機(jī)械有限公司）；RCZ-8A智能溶出實(shí)驗(yàn)儀（天津大學(xué)無線電廠）。

1.2 試藥

單硝酸異山梨酯對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：100705-200902）；單硝酸異山梨酯（山東方明藥業(yè)有限公司，批號(hào)：20120916）；可壓性淀粉（上?？房蛋录夹g(shù)有限公司）；葡萄糖（中國(guó)惠興生化試劑有限公司）；Opadry CA（上?？房蛋录夹g(shù)有限公司）；PVPK30（上?？房蛋录夹g(shù)有限公司）；PEG-400（廣東汕頭市西隴化工廠）；HPMC（上?？房蛋录夹g(shù)有限公司）；丙酮（南京化學(xué)試劑有限公司）；甲醇（色譜純，南京化學(xué)試劑有限公司）；乙醇（分析純，南京化學(xué)試劑有限公司）；單硝酸異山梨酯擇時(shí)微孔滲透泵片（自制，批號(hào)：20191020，20191025，20191031，規(guī)格 40mg），其他試劑均為分析純。

1.3 方法[12-13]

1.3.1 片芯的制備 將單硝酸異山梨酯與適量葡萄糖（滲透壓促進(jìn)劑）、適量可壓性淀粉混勻，以5%PVPK30乙醇溶液為粘合劑制成軟材，用20目篩制粒，40℃恒溫箱充分干燥后，用18目篩整粒，然后加入適量滑石粉，混合均勻后壓片，制成片芯。硬度應(yīng)控制在60 ～ 80N。

1.3.2 隔離衣包衣液配制 稱取HPMC適量，在攪拌過程中緩慢加入到90%的乙醇溶液中，使分散均勻。

1.3.3 控釋衣包衣液配制 稱取Opadry CA適量，在攪拌過程中加入到90∶10（v/v）的丙酮水溶液中，按比例稱取適量PEG400緩慢溶解到上述丙酮水溶液中，使混合均勻。

1.3.4 包衣工藝 片芯在40～50℃（片床溫度）下包隔離衣，流速5mL/min，至片芯達(dá)到預(yù)定增重后，40℃下烘干6 ～ 8h，經(jīng)檢驗(yàn)合格后在40～50℃（片床溫度）下包控釋衣，流速4mL/min，至控釋衣膜增重達(dá)到預(yù)定要求后40℃下烘干6～8h。

2 含量測(cè)定結(jié)果[14]

2.1 色譜條件

色譜柱：Beckman ODS （ 4.6mm×25cm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇∶水=40∶60（v/v）；流速：1mL/min；柱溫：35℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：219nm；進(jìn)樣量：20μL。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取單硝酸異山梨酯40mg，置于100mL容量瓶，加適量流動(dòng)相振搖溶解后，稀釋并定容至刻度，搖勻，配制成濃度為0.4mg/mL的單硝酸異山梨酯對(duì)照品溶液1。精密量5mL對(duì)照品溶液1置于50mL容量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，即得到濃度為0.04mg/mL的單硝酸異山梨酯對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取單硝酸異山梨酯擇時(shí)微孔滲透泵片10片，精密稱定，除去包衣膜，精密稱定，研細(xì)，精密稱取粉末適量（約相當(dāng)于單硝酸異山梨酯40mg的細(xì)粉），置于100mL容量瓶，加流動(dòng)相適量，振搖使之溶解，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，過濾。精密量取續(xù)濾液5mL，置于50mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得單硝酸異山梨酯供試品溶液。

2.4 陰性樣品溶液的制備

取處方量輔料，按“1.3”項(xiàng)下的方法制備不含單硝酸異山梨酯的空白擇時(shí)微孔滲透泵片，并按“2.3”項(xiàng)下的步驟同法制備，即制得陰性樣品溶液。

2.5 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

取上述對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液，按照“2.1”色譜條件，分別取20μL進(jìn)樣測(cè)定，色譜圖見圖1，結(jié)果表明，在上述色譜條件下，其他成分不干擾單硝酸異山梨酯的HPLC測(cè)定。

圖1 HPLC色譜圖

2.6 線性關(guān)系試驗(yàn)

精密稱取單硝酸異山梨酯對(duì)照品50mg置100mL容量瓶中，加適量流動(dòng)相溶解，稀釋至刻度，作為儲(chǔ)備液（500μg/mL）。精密量取儲(chǔ)備液5、3、1.5、1、0.5mL，置 50mL 容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度得到 50、30、15、10、5μg/mL 的單硝酸異山梨酯對(duì)照品溶液。按照“2.1”色譜條件，取20μL進(jìn)樣測(cè)定，用濃度與峰面積進(jìn)行線性回歸。結(jié)果表明，單硝酸異山梨酯濃度（C）與其峰面積（A）在5.0～50μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為A=4930C-606.18（r=0.9999，n=5）。

2.7 精密度試驗(yàn)

取“2.2”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，按照“2.1”色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積，計(jì)算單硝酸異山梨酯峰面積的RSD為0.92%（n=5）。

2.8 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.2”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液及“2.3”項(xiàng)下的供試品溶液，放置 0、2、4、6、8、12h 后，按照“2.1”色譜條件，測(cè)定單硝酸異山梨酯面積，以峰面積考察穩(wěn)定性。結(jié)果表明，對(duì)照品溶液和供試品溶液中單硝酸異山梨酯峰面積的RSD分別為0.78%，0.96%（n=5）。表明單硝酸異山梨酯對(duì)照品溶液和供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn)

取單硝酸異山梨酯擇時(shí)微孔滲透泵片樣品，除去包衣膜，精密稱定，研細(xì)，分別精密稱取6份粉末適量（約相當(dāng)于單硝酸異山梨酯40mg的細(xì)粉），按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按照“2.1”色譜條件，取20μL進(jìn)樣，測(cè)定峰面積；另取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，同法測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算。樣品中單硝酸異山梨酯的平均標(biāo)示量為98.8%，RSD為0.91%（n=6）。

2.10 回收率試驗(yàn)

精密稱取單硝酸異山梨酯對(duì)照品32，40，48mg（80%、100%、120%）各三份，置于50mL容量瓶中，按處方比例加入輔料，加入流動(dòng)相適量，振搖溶解，稀釋至刻度，搖勻。用0.45μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液稀釋至適當(dāng)濃度并進(jìn)樣，另取“2.2”項(xiàng)下單硝酸異山梨酯對(duì)照品溶液作為對(duì)照，計(jì)算回收率，得到平均回收率為99.19%，RSD為0.41%（n=9）。

2.11 樣品含量測(cè)定

取單硝酸異山梨酯擇時(shí)微孔滲透泵片樣品3批，按“2.3”項(xiàng)進(jìn)行制備，按照“2.1”項(xiàng)下條件進(jìn)樣，記錄數(shù)據(jù)。另取“2.2”項(xiàng)下單硝酸異山梨酯對(duì)照品溶液，以峰面積計(jì)算單硝酸異山梨酯的含量。結(jié)果見表1，3個(gè)批號(hào)的樣品含量均符合規(guī)定。

表1 單硝酸異山梨酯擇時(shí)微孔滲透泵片的含量測(cè)定結(jié)果（%，n=3）

2.12 單硝酸異山梨酯擇時(shí)微孔滲透泵片的體外釋放曲線

取上述3批自制單硝酸異山梨酯擇時(shí)微孔滲透泵片，按照《中國(guó)藥典》2015年版四部通則0931溶出度與釋放度測(cè)定法[15]，采用轉(zhuǎn)籃法，以pH6.8的磷酸鹽緩沖液為釋放介質(zhì)，轉(zhuǎn)籃轉(zhuǎn)速為100r/min，溫度為（37.0±0.5）℃，比較三個(gè)批次的釋放度差異，結(jié)果見圖2。

圖2 單硝酸異山梨酯擇時(shí)微孔滲透泵片的體外釋放曲線

由圖2結(jié)果可知，三批單硝酸異山梨酯擇時(shí)微孔滲透泵片體外釋放曲線批間重復(fù)性良好。三批樣品在前4h幾乎不釋放，4～16h內(nèi)基本達(dá)到零級(jí)釋放，釋藥持續(xù)12h。本制劑日服一次，不僅可減少患者服藥次數(shù)，且通過緩慢恒速釋放藥物，使血藥濃度保持平穩(wěn)，且具有約4h時(shí)滯，與心絞痛發(fā)作的生物節(jié)律相符合，適于心絞痛的時(shí)辰給藥治療。

3 討論

本研究制備的單硝酸異山梨酯擇時(shí)微孔滲透泵片與現(xiàn)有制劑相比不僅具有血藥濃度波動(dòng)小，給藥次數(shù)少，藥效持久，還具有符合心腦血管疾病的時(shí)辰節(jié)律性的特點(diǎn)。自制片通過隔離衣和控釋衣的共同溶蝕控制藥物釋放的時(shí)滯，待隔離衣緩慢溶蝕后，基本通過控釋衣控制藥物的釋放，并達(dá)到零級(jí)釋放，從而具有擇時(shí)和控釋的雙重效果。其還具有傳統(tǒng)滲透泵制劑藥物的釋放行為，不受環(huán)境pH值、食物以及胃腸蠕動(dòng)等因素的影響[16-17]。

目前在美國(guó)上市的鹽酸維拉帕米滲透泵片（商品名為Covera-HS），是首個(gè)上市的脈沖制劑[18]。它是依據(jù)滲透泵技術(shù)制備的擇時(shí)釋藥制劑，含有雙層膜結(jié)構(gòu)，內(nèi)層為羥丙甲纖維素（HPMC）隔離衣膜，外層為醋酸纖維素控釋衣膜，在靠近藥物層的控釋衣膜上有釋藥小孔。其為雙層片芯外包雙層膜的制劑，需要激光打孔，而本研究制備的單硝酸異山梨酯擇時(shí)釋時(shí)微孔滲透泵片為單層片，控釋衣膜的釋藥孔由致孔劑遇水形成的大量微孔組成[19-20]。因此，相比已經(jīng)上市的擇時(shí)釋藥制劑，本研究的擇時(shí)釋藥制劑不僅制備簡(jiǎn)單，且無需激光打孔，降低了生產(chǎn)成本。