連續(xù)射精對(duì)精液質(zhì)量的影響及其在輔助生殖技術(shù)中的應(yīng)用

張國(guó)忠　鄭杰　胡艷梅　伍學(xué)一　謝萍　楊宗富

摘要：目的? 世界衛(wèi)生組織建議在診斷性精液分析前需禁欲2～7 d以獲得最佳的精液標(biāo)本，但涉及不育男性時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)的禁欲時(shí)間仍存在爭(zhēng)議，目前大多研究仍支持以2～7 d為標(biāo)準(zhǔn)。隨著連續(xù)射精采集精液標(biāo)本這一方法的出現(xiàn)，短時(shí)禁欲也可提供質(zhì)量良好的精液標(biāo)本，解決了臨床操作過(guò)程中出現(xiàn)的特殊情況，使更多的不孕不育夫婦受益。本文主要就連續(xù)射精的精液采集方法對(duì)精液質(zhì)量的影響機(jī)制以及在輔助生殖技術(shù)中的臨床應(yīng)用作一綜述，旨在為輔助生殖技術(shù)的應(yīng)用提供幫助。

關(guān)鍵詞：連續(xù)射精;精液質(zhì)量;輔助生殖技術(shù)

中圖分類(lèi)號(hào)：R711.6? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2020.14.012

文章編號(hào)：1006-1959（2020）14-0036-04

Effect of Continuous Ejaculation on Semen Quality and its Application

in Assisted Reproductive Technology

ZHANG Guo-zhong，ZHENG Jie，HU Yan-mei，WU Xue-yi，XIE Ping，YANG Zong-fu

（Reproductive Medicine Center，Panzhihua City Maternal and Child Health Hospital，Panzhihua 617000，Sichuan，China）

Abstract：The World Health Organization recommends that abstinence be required for 2 to 7 d before diagnostic semen analysis to obtain the best semen specimens.However，when infertile men are involved，the standard abstinence time is still controversial，and most studies still support 2 to 7 d as standard.With the emergence of the method of continuous ejaculation collection of semen specimens，short-term abstinence can also provide good quality semen specimens，which solves the special circumstances that occur in the course of clinical operations and benefits more infertile couples.This article mainly reviews the effect mechanism of continuous ejaculation semen collection method on semen quality and clinical application in assisted reproductive technology，aiming to provide assistance for the application of assisted reproductive technology.

Key words：Continuous ejaculation;Semen quality;Assisted reproductive technology

人工授精（IUI）、體外受精（IVF）及其衍生技術(shù)被廣泛應(yīng)用于不孕不育患者治療中，使用常規(guī)輔助生殖技術(shù)助孕治療時(shí)需要男方提供足夠數(shù)量的前向運(yùn)動(dòng)精子。但在實(shí)踐中經(jīng)常發(fā)生特殊情況，例如部分男性在取卵日因?yàn)楦鞣N原因如心理緊張或操作不當(dāng)致使首段精液外射或取精杯掉地精液外溢等情況發(fā)生，導(dǎo)致收集的精液中精子的數(shù)量或質(zhì)量不足以滿(mǎn)足女方卵子體外授精的需要;或者進(jìn)行IUI手術(shù)當(dāng)日，部分少弱精患者因身體狀態(tài)不佳，采集的精液中的精子活力和濃度偏低，導(dǎo)致經(jīng)優(yōu)化處理后回收的前向運(yùn)動(dòng)精子總數(shù)低于10×106條，導(dǎo)致胞質(zhì)內(nèi)單精子注射（ICSI）的周期數(shù)增加，特別是經(jīng)皮附睪穿刺抽吸術(shù)（PESA）/睪丸穿刺抽吸術(shù)（TESE）的周期數(shù)增加。研究報(bào)道，對(duì)于精液質(zhì)量差或沒(méi)有檢測(cè)到活動(dòng)精子的男性患者，在第一次射精后連續(xù)采集精液標(biāo)本，可以獲得活力更好的精液標(biāo)本[1，2]。使用連續(xù)射精的方法，可避免使用更精細(xì)的精子制備技術(shù)和不必要的ICSI周期數(shù)。本文就連續(xù)射精對(duì)精液質(zhì)量的影響、連續(xù)射精對(duì)精液質(zhì)量產(chǎn)生影響的可能機(jī)制及連續(xù)射精在輔助生殖技術(shù)中的應(yīng)用作一綜述。

1連續(xù)射精對(duì)精液質(zhì)量的影響

人們普遍認(rèn)為精子數(shù)量與性交頻率呈負(fù)相關(guān)，精液的質(zhì)量隨著射精頻率的增加而有所下降。事實(shí)上，延長(zhǎng)禁欲時(shí)間會(huì)增加精液標(biāo)本的參數(shù)（包括精子總數(shù)、濃度、體積）和影響精子質(zhì)量的指標(biāo)（包括精子DNA碎片率、精液中活性氧、精液pH），降低精液標(biāo)本的活力和形態(tài)[3，4]。Shi X等[5]研究表明，禁欲時(shí)間與精子濃度、精子總數(shù)、總活力和精子DNA碎片率參數(shù)顯著相關(guān)，與精子存活率和頂體反應(yīng)（AR）無(wú)關(guān)，延長(zhǎng)禁欲時(shí)間不會(huì)影響精子存活率和受精能力。因此，可通過(guò)縮短禁欲時(shí)間獲取高質(zhì)量的精液標(biāo)本[6]。禁欲時(shí)間對(duì)精液標(biāo)本正常的患者和少精子癥患者的影響不同，更長(zhǎng)時(shí)間的禁欲并不能改善少精子癥患者精液標(biāo)本參數(shù)[7]。射精頻率也是影響精液標(biāo)本參數(shù)的因素之一，對(duì)于精液正常的男性，增加射精頻率會(huì)降低精液活力和濃度;而對(duì)于少弱精子癥患者，第2次連續(xù)射精能夠改善精子質(zhì)量，提高精液濃度[8]。在體外受精-胚胎移植（IVF-ET）實(shí)踐中，在取卵日經(jīng)常發(fā)現(xiàn)獲得的精液標(biāo)本濃度低或其他意外情況發(fā)生，從而導(dǎo)致整個(gè)治療周期取消，或更改助孕策略，如由IVF改為ICSI。研究發(fā)現(xiàn)，在禁欲2 h后，連續(xù)射精獲得的精液標(biāo)本的精子濃度和前向運(yùn)動(dòng)精子總數(shù)較低，但快速前向運(yùn)動(dòng)精子的百分比高于禁欲4～7 d后獲得的精液標(biāo)本[9]。鄒暉等[10]對(duì)193例間隔24 h連續(xù)兩次射精獲得精液標(biāo)本分析發(fā)現(xiàn)，第2次獲得的精液標(biāo)本的精液體積、濃度和優(yōu)化處理后精子總數(shù)均呈下降趨勢(shì)，但精子活力得到了改善。Welliver C等[11]研究令20例正常男性禁欲3～5 d后，連續(xù)20天進(jìn)行射精，分析第1、3、7、14天收集的精液標(biāo)本，發(fā)現(xiàn)連續(xù)射精后精子總數(shù)、精液量和精子濃度都較第1天減少。

精液常規(guī)檢查是評(píng)估不孕不育男性患者的常規(guī)方法，為保證精液檢查結(jié)果的可靠性，要求取精前男性禁欲2～7 d，因?yàn)樵?～10 d內(nèi)精液的體積、濃度和精子總數(shù)隨著禁欲持續(xù)時(shí)間的增加而增加[12]。在一項(xiàng)研究中每隔2 h連續(xù)4次射精獲取精液標(biāo)本評(píng)估精液常規(guī)參數(shù)，結(jié)果顯示直到第3次獲得的精液標(biāo)本的部分精液參數(shù)才下降到WHO 2010最低標(biāo)準(zhǔn)以下，而細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）則隨著連續(xù)取精次數(shù)增加而呈下降的趨勢(shì)[13]。處于生育年齡的不育男性隨著禁欲天數(shù)的增加，圓細(xì)胞數(shù)呈上升趨勢(shì)[14]，少、弱精子癥患者的精子活力隨禁欲時(shí)間增加而降低[15]。Bahadur G等[1]的關(guān)于少精子癥男性連續(xù)射精的研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)禁欲時(shí)間短至40 min時(shí)，精子的活力、前向運(yùn)動(dòng)比例和精子形態(tài)反而得到改善。Said AH等[16]研究顯示，在取卵日前24 h內(nèi)連續(xù)收集3次射精精液標(biāo)本，前向運(yùn)動(dòng)精子總數(shù)顯著增加，但精液量逐漸減少，并且后面兩次采集的精液標(biāo)本的精子總數(shù)和活力均明顯高于第1次采集的精液標(biāo)本。Manna C等[17]研究中，建議對(duì)接受輔助生殖助孕技術(shù)的患者，特別是少弱畸精子綜合征（OTA）患者，應(yīng)在1 h內(nèi)連續(xù)取精，收集第2次射精的精液標(biāo)本進(jìn)行助孕操作。

2連續(xù)射精對(duì)精液質(zhì)量產(chǎn)生影響的可能機(jī)制

連續(xù)射精對(duì)精液質(zhì)量產(chǎn)生影響的因素較多。研究發(fā)現(xiàn)，除精子生成減少以外，還有許多因素可能導(dǎo)致嚴(yán)重的OTA，例如由于部分男性生殖道梗阻導(dǎo)致精子在轉(zhuǎn)移過(guò)程中受損，或者因白細(xì)胞增多癥、精索靜脈曲張、泌尿生殖道感染和慢性炎癥等病理狀況誘導(dǎo)ROS的產(chǎn)生，導(dǎo)致精子失去活力[18，19]。關(guān)于連續(xù)射精能夠提高精子的濃度和活力的原因有兩種可能：①有報(bào)道認(rèn)為成年男性平均有2億條精子儲(chǔ)存在附睪中，其中一半儲(chǔ)存在附睪的頭部和體部，其余的儲(chǔ)存在尾部。在某些情況下，第1次射精可能不會(huì)完全排空附睪尾部的精子，可能需要1次以上的射精才能將附睪尾部的精子從輸精管中排出;②當(dāng)出現(xiàn)連續(xù)射精的需求時(shí)，精子通過(guò)附睪的速度會(huì)加快，從而導(dǎo)致獲得精液標(biāo)本中精子濃度的增加。因?yàn)榈?組精子在附睪尾部存在的時(shí)間更長(zhǎng)，影響了它的整體活動(dòng)能力。第2組精子（連續(xù)射精獲得）通過(guò)附睪尾部的速度更快，使其運(yùn)動(dòng)潛力增加[20]。另有結(jié)果表明，第2次射精在第1次射精后幾個(gè)小時(shí)收集，產(chǎn)生的精子具有更大的功能特征[21]。分析其原因可能為精子在附睪尾部老化較快，而隨后射出的精子在體內(nèi)儲(chǔ)存的時(shí)間更短，因此質(zhì)量更高。這與一項(xiàng)評(píng)價(jià)大西洋寬吻海豚連續(xù)射精的精液標(biāo)本特性的研究結(jié)果基本一致[22]。有研究發(fā)現(xiàn)大約50%的附睪尾部的精子可用于射精，因此短時(shí)禁欲后收集的精液標(biāo)本其濃度和總精子數(shù)量的減少可能是由于人類(lèi)的精子儲(chǔ)存能力較低及間隔時(shí)間太短，精子不能及時(shí)從附睪的近端部分轉(zhuǎn)移到尾部和輸精管[23]。動(dòng)物研究表明，來(lái)自近端尾部的精子具有最高的活力，并且受精潛能高于遠(yuǎn)端尾部精子[24]。對(duì)鞭毛鞭打的修飾、精子實(shí)現(xiàn)運(yùn)動(dòng)和受精能力所必需的許多變化均發(fā)生在附睪精子成熟期間，并且附睪分泌物和精子之間存在復(fù)雜的相互作用[25]。禁欲時(shí)間的長(zhǎng)短可能影響精子在附睪中的儲(chǔ)存和轉(zhuǎn)移時(shí)間，間接影響復(fù)雜的修飾過(guò)程和相互作用，從而影響精子的運(yùn)動(dòng)能力[11]。

3連續(xù)射精在輔助生殖技術(shù)中的應(yīng)用

男性因素不育癥是一個(gè)通用術(shù)語(yǔ)，描述了無(wú)法受孕的夫妻中發(fā)現(xiàn)與男性有關(guān)的影響因素。這個(gè)問(wèn)題可能與少精子癥、弱精子癥或畸形精子癥有關(guān)[26]。許多有男性不育癥的夫婦并非絕對(duì)不育，而是低生育能力。對(duì)于這些夫妻來(lái)說(shuō)，簡(jiǎn)單的輔助生殖技術(shù)即可助孕。對(duì)于低生育力的患者，與選擇程序更復(fù)雜和價(jià)格更昂貴的助孕技術(shù)相比，選擇侵入性少和治療費(fèi)用更便宜的助孕技術(shù)具有最佳的成本效益。正常情況下，男性患者在接受輔助生殖助孕技術(shù)取精前，需禁欲2～7 d。IUI被廣泛應(yīng)用于治療精液異常的男性因素不育患者，而前向運(yùn)動(dòng)精子總數(shù)（TMS）是預(yù)測(cè)IUI成功的最重要的精子參數(shù)[27]。TMS有參考值下限，是否低于其參考值就推薦體外受精一直備受爭(zhēng)議。Erin B等[28]研究表明當(dāng)優(yōu)化處理后TMS低于2×106條精子時(shí)進(jìn)行IUI助孕，其成功率非常低。在IVF-ET取卵當(dāng)日，獲得的精液質(zhì)量不合格（與之前的情況相比），甚至無(wú)活動(dòng)精子，其可能增加IVF助孕時(shí)精子優(yōu)化處理技術(shù)的難度或只能改行ICSI，而擬行ICSI時(shí)只能在有限的精液標(biāo)本中選擇精子（當(dāng)精液中只能發(fā)現(xiàn)少量運(yùn)動(dòng)精子時(shí)）。連續(xù)取精獲取精液標(biāo)本的方法可以改善許多精液參數(shù)（精子濃度、活力和形態(tài)），這可能對(duì)不育夫婦的助孕有益，特別是接受輔助生殖技術(shù)助孕的夫婦[29]。

一項(xiàng)研究在IUI手術(shù)日，當(dāng)患者第1次取精獲得的精液標(biāo)本符合以下任意兩項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)時(shí)：①精子濃度<5×106條/ml、精子總數(shù)<10×106條、精子活率<30%和前向運(yùn)動(dòng)精子總數(shù)小于4×106條，要求患者在間隔時(shí)間不超過(guò)60 min內(nèi)連續(xù)取精，結(jié)果顯示連續(xù)取精可以顯著改善患者的精子濃度、TMSC和精子活力[20]。因此，連續(xù)射精的策略應(yīng)用于宮腔內(nèi)人工授精（IUI）可能克服運(yùn)動(dòng)精子數(shù)量的限制。尤其對(duì)于患有少精子癥的男性患者使用連續(xù)射精的助孕策略，與妻子一起接受IUI助孕治療時(shí)，可能會(huì)縮小與正常男性的精液差異。Bahadur G等[2]研究將連續(xù)射精的方法應(yīng)用于第1次取精時(shí)前向運(yùn)動(dòng)精子總數(shù)≤10×106條的患有少精癥的低生育男性，從而增加其獲得的前向運(yùn)動(dòng)精子，連續(xù)射精的時(shí)間間隔為30 min，將獲得的精液標(biāo)本一次性應(yīng)用于IUI手術(shù)中，結(jié)果發(fā)現(xiàn)少精子癥和正常男性之間的IUI妊娠率相似，并初步證明應(yīng)用“連續(xù)射精”于IUI手術(shù)中是克服男性因素障礙的一種有效方法。劉彩霞等[30]研究表明隨著禁欲時(shí)間延長(zhǎng)，IUI妊娠率呈下降趨勢(shì)，禁欲時(shí)間為1 d時(shí)的IUI妊娠率最高。短時(shí)禁欲后，獲取精液標(biāo)本用于輔助生殖技術(shù)中，胚胎植入率、臨床妊娠率以及體外受精治療的活產(chǎn)率明顯提高[31]。另外，男性禁欲2～7 d是否適用于輔助生殖助孕技術(shù)中仍然存在爭(zhēng)議[13]。Tonguc E等[32]研究報(bào)道，男方短時(shí)禁欲取精經(jīng)輔助生殖技術(shù)助孕后，其成功率降低，研究受到精子數(shù)量少的限制。若每間隔24 h射精一次，連續(xù)4 d，再禁欲12 h后采集精液標(biāo)本，使用密度梯度離心進(jìn)行精子制備，可顯著增加ICSI周期的妊娠率[33]。沈梓琪等[34]研究認(rèn)為短時(shí)禁欲（1～3 h）行IVF-ET治療與常規(guī)禁欲相比，顯著改善了部分精液標(biāo)本的質(zhì)量及參數(shù)，以及全胚冷凍周期的種植率、臨床妊娠率以及活產(chǎn)率。另有研究將少精子癥、弱精子癥合并少精子癥患者在取卵日前24 h內(nèi)連續(xù)3次射精獲取的精液標(biāo)本一次性用于IVF助孕治療中，發(fā)現(xiàn)對(duì)受精率和胚胎發(fā)育并無(wú)影響[16]。何連利等[35]研究中將接受IVF-ET助孕治療的精液質(zhì)量正常的患者分為2～3 d、4～5 d、6～7 d及>7 d不同禁欲時(shí)間采集的精液標(biāo)本，發(fā)現(xiàn)其對(duì)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)和臨床結(jié)局無(wú)顯著影響，并建議臨床工作中無(wú)須刻意安排患者排精時(shí)間，減輕患者緊張情緒。翟丹梅等[36]認(rèn)為取卵日連續(xù)2次取精能夠收集到更多數(shù)量和活動(dòng)力更好的精子，用于輔助生殖技術(shù)助孕治療后也可獲得高于30%的臨床妊娠率，同時(shí)減少不必要的ICSI周期數(shù)。在一項(xiàng)接受植入前非整倍體遺傳學(xué)檢測(cè)（PGT-A）周期治療中，發(fā)現(xiàn)縮短禁欲時(shí)間可以獲得高質(zhì)量的精子，并降低囊胚的非整倍體率[37]。連續(xù)取精的方法還可用于改善癌癥患者的精液質(zhì)量，保護(hù)其生育能力[38]。

4總結(jié)

在實(shí)施輔助生殖助孕技術(shù)時(shí)，男性禁欲時(shí)間主要參考世界衛(wèi)生組織對(duì)診斷性精液分析前建議的2～7 d，尚無(wú)明確的行業(yè)規(guī)范或標(biāo)準(zhǔn)。采用連續(xù)射精的方法可以解決輔助生殖技術(shù)過(guò)程中的意外情況，并且短時(shí)禁欲并不影響獲取精液標(biāo)本的質(zhì)量，第2次取精可以改善精液標(biāo)本的精子濃度、TMSC和精子活力等精子參數(shù)，甚至改善輔助生殖助孕技術(shù)的臨床結(jié)局。但是更多的研究?jī)H僅局限于短時(shí)禁欲對(duì)精液標(biāo)本參數(shù)的影響，對(duì)患者臨床結(jié)局、DNA碎片率和氧化應(yīng)激等方面的影響的研究報(bào)道較少。另外，使用第2次連續(xù)射精的方法可以使胚胎學(xué)家執(zhí)行更多的標(biāo)準(zhǔn)IVF而不是ICSI，不用再擔(dān)心ICSI技術(shù)是否會(huì)對(duì)子代產(chǎn)生不利影響。期待臨床進(jìn)一步研究連續(xù)取精對(duì)獲得精液標(biāo)本的精子的結(jié)構(gòu)和功能等方面的影響及影響機(jī)制。

參考文獻(xiàn)：

[1]Bahadur G，Almossawi O，Zaid RZ，et al.Semen characteristics in consecutive ejaculates with short abstinence in subfertile males[J].Reprod Biomed Online，2016，32（3）：323-328.

[2]Bahadur G，Almossawi O，IIlahibuccus A，et al.Factors resulting in Pregnancies in Stimulated Intrauterine Insemination Cycles and the Use of Consecutive Ejaculations Within a Small Clinic Environment[J].J Obstet Gynaecol India，2016，66（Suppl 1）：513-520.

[3]Moghaddam FS，Hosseini H，Mohammadi S，et al.Effect of Abstinence Time on Semen Parameters among Male Patients Referring to Urology Clinic[J].JPRI，2019，31（3）：1-7.

[4]Comar VA，Petersen CG，Mauri AL，et al.Influence of the abstinence period on human sperm quality：analysis of 2，458 semen samples[J].JBRA Assisted Reproduction 2017，21（4）：306-312.

[5]Shi X，Chan CPS，Waters T，et al.Lifestyle and demographic factors associated with human semen quality and sperm function[J].Syst Biol Reprod Med，2018，64（5）：358-367.

[6]Ayad BM，Horst GVD，Plessis SSD.Short abstinence：A potential strategy for the improvement of sperm quality[J].Middle East Fertility Society Journal，2018（11）：238-246.

[7]Keihani S，Craig JR，Zhang C，et al.Impacts of Abstinence Time on Semen Parameters in a Large Population Based Cohort of Subfertile Men[J].Urology，2017（108）：90-95.

[8]劉永杰，吳靜，張帆，等.短時(shí)兩次取精精子質(zhì)量的差異性分析[J].中華男科學(xué)雜志，2019，25（11）：1045-1047.

[9]Alipour H，van der Horst G，Christiansen OB，et al.Improved sperm kinematics in semen samples collected after 2 h versus 4-7 days of ejaculation abstinence[J].Hum Reprod，2017，32（7）：1364-1372.

[10]鄒暉，李娟，符免艾，等.193例間隔24h連續(xù)兩次射精前后精液參數(shù)的比較[J].海南醫(yī)學(xué)，2015，26（16）：2403-2404.

[11]Welliver C，Benson AD，F(xiàn)rederick L，et al.Analysis of semen parameters during 2 weeks of daily ejaculation：a major in humans study[J].Transl Androl Urol，2016，5（5）：749-755.

[12]Jorgensen N，Joensen UN，Jensen TK，et al.Human semen quality in the new millennium：a prospective cross-sectional population based study of 4867 men[J].BMJ Open，2012（2）：e000990.

[13]Mayorga-Torres JM，Agarwal A，Roychoudhury S，et al.Can a Short Term of Repeated Ejaculations Affect Seminal Parameters[J].J Reprod Infertil，2016，17（3）：177-183.

[14]賈紅軍，溫子娜，盧奮堅(jiān)，等.同一年齡段男性禁欲時(shí)間對(duì)精液質(zhì)量的影響[J].生殖醫(yī)學(xué)雜志，2018，27（11）：1146-1148.

[15]朱俊，吳瓊.禁欲時(shí)間對(duì)少、弱精癥患者精液質(zhì)量的影響[J].湖北科技學(xué)院學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2018，32（4）：319-320.

[16]Said AH，Reed ML.Increased count，motility，and total motile sperm cells collected across three consecutive ejaculations within 24 h of oocyte retrieval：implications for management of men presenting with low numbers of motile sperm for assisted reproduction[J].Assist Reprod Genet，2015，32（7）：1049-1055.

[17]Manna C，Barbagallo F，Manzo R，et al.Sperm Parameters before and after Swim-Up of a Second Ejaculate after a Short Period of Abstinence[J].J Clin Med，2020，9（4）：E1029.

[18]Aitken RJ，Gibb Z，Baker MA，et al.Causes and consequences of oxidative stress in spermatozoa[J].Reprod Fertil Dev，2016，28（1-2）：1-10.

[19]Bui AD，Sharma R，Henkel R，et al.Reactive oxygen species impact onv sperm DNA and its role in male infertility[J].Andrologia，2018，50（8）：e13012.

[20]Ortiz A，Ortiz R，Soto E，et al.Evidence for obtaining a second successive semen sample for intrauterine insemination in selected patients：results from 32 consecutive cases[J].Clin Exp Reprod Med，2016，43（2）：102-105.

[21]Ayad BM，Horst GV，Plessis SSD.Revisiting The Relationship between The Ejaculatory Abstinence Period and Semen Characteristics[J].Int J Fertil Steril，2018，11（4）：238-246.

[22]van der Horst G，Medger K，Steckler D，et al.Bottlenose dolphin（Tursiops truncatus）sperm revisited：Motility，morphology and ultrastructure of fresh sperm of consecutive ejaculates[J].Anim Reprod Sci，2018（195）：309-320.

[23]Sullivan R，Mieusset R.The human epididymis：its function in sperm maturation[J].Hum Reprod Update，2016，22（5）：574-587.

[24]Moore HD，Akhondi MA.Fertilizing capacity of rat spermatozoa is related to a decline in straight-line velocity measured by continuous computer-aided sperm analysis：epididymis rat spermatozoa from the proximal cauda have a greater fertilizing capacity in vitro than those from the distal cauda or vas deference[J].J Androl，1996，17（1）：50-60.

[25]Zhou W，De Iuliis GN，Dun MD，et al.Characteristics of the Epididymal Luminal Environment Responsible for Sperm Maturation and Storage[J].Front Endocrinol（Lausanne），2018（9）：59.

[26]Cooper T，Castilla JA.WHO Laboratory Manual for the Examination and Processing of Human Semen[C]//9th International Congress of Andrology.Blackwell Publishing Ltd，2006.

[27]邢鵬，付琳琳，于曉光，等.處理后精子參數(shù)對(duì)AIH臨床妊娠率的影響研究[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2019，35（23）：3596-3598.

[28]Mankus EB，Holden AE，Seeker PM，et al.Prewash total motile count is a poor predictor of live birth in intrauterine insemination cycles[J].Fertil Steril，2019，111（4）：708-713.

[29]Ragheba AM，Ibrahima RM，Elbatanouny AM，et al.Role of sequential semen samples in infertile men candidates for assisted reproduction：A prospective study[J].African Journal of Urology，2018（24）：363–367.

[30]劉彩霞，張仁禮，韓冬，等.禁欲時(shí)間對(duì)精液參數(shù)及宮腔內(nèi)人工授精妊娠率的影響[J].中山大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)科學(xué)版），2014，35（5）：758-762.

[31]Shen ZQ，Shi B，Wang TR，et al.Characterization of the sperm proteome and reproductive outcomes with in vitro，fertilization after a reduction in male ejaculatory abstinence period[J].Mol Cell Proteomics，2019，18（Suppl 1）：S109-S117.

[32]Tonguc E，Var T，Onalan G，et al.Comparison of the effectiveness of single versus double intrauterine insemination with three different timing regimens[J].Fertil Steril，2010，94（4）：1267-1270.

[33]Sánchez-Martín P，Sánchez-Martín F，González-Martínez M，et al.Increased pregnancy after reduced male abstinence[J].Syst Biol Reprod Med，2013，59（5）：256-260.

[34]沈梓琪.射精禁欲時(shí)間縮短對(duì)精子蛋白質(zhì)組和體外受精胚胎移植結(jié)局的影響[D].中國(guó)醫(yī)科大學(xué)，2018.

[35]何連利，刁英，楊名慧，等.不同禁欲時(shí)間采集精液對(duì)IVF-ET實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)及臨床結(jié)局的影響[J].中國(guó)婦幼保健，2015，30（6）：909-912.

[36]翟丹梅，李慕軍，江莉，等.取卵日連續(xù)2次取精在輔助生殖技術(shù)中的應(yīng)用效果[J].中華男科學(xué)雜志，2011，17（5）：418-421.

[37]Scarselli F，Cursio E，Muzzì S，et al.How 1 h of abstinence improves sperm quality and increases embryo euploidy rate after PGT-A：a study on 106 sibling biopsied blastocysts[J].J Assist Reprod Genet，2019，36（8）：1591-1597.

[38]Kim SK，Lee JM，Jee BC，et al.Semen quality of consecutive ejaculates from cancer patients for fertility preservation[J].Fertil Steril，2014，102（4）：1124-1129，e3.

收稿日期：2020-04-16;修回日期：2020-04-26

編輯/成森

作者簡(jiǎn)介：張國(guó)忠（1990.7-），男，云南楚雄人，碩士，技師，主要從事胚胎實(shí)驗(yàn)室技術(shù)研究