藏藥三味寬筋藤湯散急性毒性試驗(yàn)及抗炎鎮(zhèn)痛作用的研究

黃銳 扎西東智 李琴 讓堅(jiān) 譚正懷 蒲清榮

【摘 要】 目的：評價(jià)藏藥三味寬筋藤湯散急性毒性以及抗炎鎮(zhèn)痛的作用。方法：小鼠40只，雌雄各半，實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水16 h，分別灌胃三味寬筋藤湯散最大濃度（1.15636 g原生藥/mL），最大體積（0.4 mL/10 g），一天灌胃給藥2次，間隔6 h，對照組灌胃等體積0.5% CMC，觀察并記錄動物在給藥后14d內(nèi)的中毒表現(xiàn)及死亡情況;以冰醋酸致小鼠腹腔通透性增加模型觀察三味寬筋藤湯散的抗炎作用，以小鼠熱板法和醋酸致小鼠扭體反應(yīng)評價(jià)三味寬筋藤湯散的鎮(zhèn)痛作用。結(jié)果：小鼠在灌胃給藥后14 d內(nèi)未出現(xiàn)明顯的毒性表現(xiàn)，期間亦未出現(xiàn)動物死亡，解剖觀察其主要臟器亦無明顯異常發(fā)現(xiàn);三味寬筋藤湯散3.0 g原生藥/kg、1.0 g原生藥/kg對醋酸致小鼠腹腔通透性升高具有一定的抑制作用，也有減少醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的趨勢，但對熱板法致小鼠疼痛反應(yīng)無明顯影響。結(jié)論：測得小鼠一次性口服三味寬筋藤湯散的最大耐受量為34.2 g原生藥/kg，該劑量為臨床擬用劑量（6.0 g/d，0.1 g/kg）的342倍，提示藏藥三味寬筋藤湯散臨床用藥是比較安全的，同時(shí)具有一定的抗炎、鎮(zhèn)痛作用。

【關(guān)鍵詞】 三味寬筋藤湯散;急性毒性;最大耐受量;抗炎;鎮(zhèn)痛;小鼠

【中圖分類號】R29? ?【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A? ? 【文章編號】1007-8517（2020）9-0015-05

Study on the Acute Toxicity Test，Anti Inflammation and Analgesic Effect of Tibetan

Medicine Sanwei Kuanjinteng Decoction Powder

HUANG Rui1 TASHI Dongzhi2 LI Qin2 RANG Jian2 TAN Zhenghuai3 PU Qingrong1*

1.The Affiliated TCM Hospital of Southwest Medical University，Luzhou 646000，China;

2. Aba prefecture Tibetan medicine hospital，Maerkang 513229，China;

3. Sichuan Academy of Chinese Medicine Sciences，Chengdu 610041，China

Abstract：ObjectiveTo evaluate the acute toxicity，anti-inflammatory and analgesic effects of the Tibetan medicine Sanwei kuanjinteng Decoction powder.Methods Forty mice，half male and half female，were fasted for 16 hours before the experiment. The maximum concentration （1.15636 g / mL） and the maximum volume （0.4 ml / 10 g） of Sanwei kuanjinteng Decoction powder were respectively administered by gavage twice a day，with an interval of 6 hours. The volume of 0.5% CMC in the control group was administered by gavage. The poisoning performance and death of the animals within 14 days after the administration were observed and recorded. To observe the anti-inflammatory effect of Sanwei kuanjinteng Decoction powder by the model of increasing abdominal permeability induced by glacial acetic acid in mice and evaluation of analgesic effect of Sanwei kuanjinteng Decoction powder by hot plate method and writhing reaction induced by acetic acid in mice. Results There was no significant toxicity in the mice within 14 days after gavage，and no animal death occurred during the period. No significant abnormality was found in the main organs observed by anatomy. Sanwei kuanjinteng Decoction powder （3.0 g / kg，1.0 g / kg） has a certain inhibitory effect on the increase of abdominal permeability induced by acetic acid in mice， and also has a tendency to reduce the writhing response induced by acetic acid in mice，but has no significant effect on the pain response induced by hot plate method in mice. Conclusion The Tibetan medicine Sanwei kuanjinteng Decoction powder is safe in clinical use and has certain anti-inflammatory and analgesic effects.

Keywords：Sanwei Kuanjinteng Decoction Powder;Acute Toxicity;Maximum Tolerance Dose;Anti-inflammatory;Analgesic;Mice

藏藥三味寬筋藤湯散，藏文音譯為“勒哲松湯”，由寬筋藤、渣馴膏、訶子肉三味藏藥組成[1]，劑型為湯散劑，具有祛風(fēng)除痹、消腫止痛、干黃水的作用。用于關(guān)節(jié)急慢性紅腫、脹痛、伸屈不利、四肢僵硬，痛風(fēng)、痹證[2]。痛風(fēng)是由于嘌呤代謝紊亂，血尿酸增高導(dǎo)致尿酸結(jié)晶沉積在關(guān)節(jié)及皮下組織而致的一種疾病。臨床上以高尿酸血癥、特征性急性關(guān)節(jié)炎反復(fù)發(fā)作、痛風(fēng)結(jié)石形成為特點(diǎn)[3]。痛風(fēng)急性發(fā)作期的藥物治療主要是抗炎鎮(zhèn)痛，臨床上常用秋水仙堿、非甾體抗炎藥和其他鎮(zhèn)痛藥，雖然療效較好，但也有相應(yīng)的毒副作用，如胃腸道不適、肝細(xì)胞損害、過敏反應(yīng)等[4]。近年來，藏醫(yī)藥發(fā)展迅速，對防治痛風(fēng)有獨(dú)特的療效和特色的治療方法，三味寬筋藤湯散原方載于藏醫(yī)藥圣典《四部醫(yī)典》，文中明確提出三味寬筋藤湯散可防治痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎，且在阿壩州藏醫(yī)醫(yī)院臨床應(yīng)用中日服用藥材量極小，療效佳，副作用小。目前未見藏藥三味寬筋藤湯散毒性和藥效的相關(guān)報(bào)道，故本試驗(yàn)對藏藥三味寬筋藤湯散進(jìn)行急性和抗炎鎮(zhèn)痛作用的研究，為進(jìn)一步的開發(fā)成醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑和臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 試驗(yàn)材料和儀器

1.1 試驗(yàn)藥物 三味寬筋藤湯散（由阿壩州藏醫(yī)醫(yī)院配制，批號：20190428），棕黃色粉末，1 g粉末相當(dāng)于1 g原生藥，用前用0.5% CMC-Na溶液配制成相應(yīng)濃度混懸液備用，本實(shí)驗(yàn)劑量按原生藥g/kg計(jì)算。醋酸潑尼松，5 mg/片（浙江仙琚制藥股份有限公司，批號：170621）;阿司匹林腸溶片，100 mg/片（Bayer HealthCare Manufacturing S.r.l.，批號：BJ46000）;鹽酸嗎啡緩釋片，10 mg/片（太極集團(tuán)西南藥業(yè)股份有限公司，批號：17110006）。

1.2 試驗(yàn)試劑 羧甲基纖維素鈉（CMC-Na，批號2014102701，成都市科龍化工試劑廠）;生理氯化鈉溶液（批號L218021808，四川科倫藥業(yè)股份有限公司）;伊文思藍(lán)（批號F20020913，中國醫(yī)藥（集團(tuán)）上?；瘜W(xué)試劑公司）;冰醋酸（批號20130726，成都長聯(lián)化工試劑有限公司）。

1.3 試驗(yàn)動物 KM種小鼠，SPF級，由四川省中醫(yī)藥科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供，生產(chǎn)合格證為SCXK（川）2018-19。小鼠寄養(yǎng)于四川省中醫(yī)藥科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心屏障系統(tǒng)，使用許可證號SYXK（川）2018-100。分籠飼養(yǎng)，自由攝食、飲水，定期更換墊料，室溫22～25 ℃，濕度50 %±5 %，明暗各12 h。

1.4 儀器 JA1003A電子天平（上海精天電子儀器有限公司）;TGL-16臺式高速冷凍離心機(jī)（長沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司）;Varioskan Flash全波長多功能酶標(biāo)儀（美國Thermo公司）;RB-200型智能熱板儀（成都泰盟科技有限公司）。

2 方法

2.1 急性毒性試驗(yàn)[5-6] 由預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知藏藥三味寬筋藤湯散其急性毒性作用較弱，故對其做最大耐受量測定。取18～22 g的KM小鼠40只，雌雄各半，實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水16 h，按體重隨機(jī)將動物分為對照組、藏藥三味寬筋藤湯散組。藏藥三味寬筋藤湯散以最大濃度（0.4275 g原生藥/mL），最大體積（0.4 mL/10 g）一天灌胃小鼠2次，間隔6 h，使其日用劑量達(dá)到34.2原生藥g/kg，對照組灌胃等體積0.5% CMC。觀察并記錄動物在給藥后14d內(nèi)的中毒表現(xiàn)及死亡情況，于給藥前、給藥后第7d、第14d稱體重，試驗(yàn)結(jié)束后處死小鼠取心、肝、脾、肺、腎稱濕重并計(jì)算臟器指數(shù)。臟器指數(shù)=臟器重量（mg）/小鼠體重（g）×10。

2.2 三味寬筋藤湯散對小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響 SPF級KM種小鼠，♂，18 ～22 g，適應(yīng)性喂養(yǎng)后按體重隨機(jī)分為4組，分別為模型組、醋酸潑尼松10 mg/kg、三味寬筋藤湯散3.0原生藥g/kg、1.0原生藥g/kg。每日灌胃1次，連續(xù)7d，末次給藥后1h尾靜脈注射1%伊文思藍(lán)生理鹽水溶液（0.1 mL/10g），10 min后腹腔注射1%冰醋酸生理鹽水溶液0.1 mL/10g，30 min后處死小鼠，腹腔注射生理鹽水4 mL/10g，輕揉腹部后剪開腹腔取出腹水，離心，于590 nm測定OD值[7]。

2.3 鎮(zhèn)痛試驗(yàn)

2.3.1 三味寬筋藤湯散對冰醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響 SPF級KM小鼠，♀♂各半，18～22 g。適應(yīng)性喂養(yǎng)后按體重隨機(jī)分為4組，分別為模型組、阿司匹林100 mg/kg，三味寬筋藤湯散3.0原生藥g/kg，三味寬筋藤湯散1.0原生藥g/kg，每日灌胃1次，連續(xù)7 d，末次給藥30 min后i.p.0.7%冰醋酸溶液0.1 mL/10g，隨即記錄小鼠的扭體次數(shù)，連續(xù)記錄15 min[8]。

2.3.2 三味寬筋藤湯散對小鼠熱刺激疼痛反應(yīng)的影響 SPF級KM小鼠，♀，18～22 g。適應(yīng)性喂養(yǎng)后進(jìn)行篩選，以痛閾值>5 s且<30 s為合格，記錄痛閾值。5 min后再次測定痛閾值，以兩次平均值作為正常痛閾值，據(jù)此將小鼠分為對照組、鹽酸嗎啡組10 mg/kg、三味寬筋藤湯散3.0原生藥g/kg，三味寬筋藤湯散1.0原生藥g/kg，每日灌胃1次，連續(xù)7 d，鹽酸嗎啡僅在第7 d給藥1次。末次給藥后0.5 h、1 h、2 h測定小鼠藥后痛閾值[9]。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件采用spss12.0所有數(shù)據(jù)用均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示。計(jì)量資料采用方差分析，組間差異采用Student T檢驗(yàn)。

3 結(jié)果

3.1 急性毒性

3.1.1 藏藥三味寬筋藤湯散對小鼠體重影響 小鼠在灌胃給予藏藥三味寬筋藤湯散34.2原生藥g/kg后14 d內(nèi)，未發(fā)現(xiàn)小鼠死亡，亦未見其他異常反應(yīng)。藏藥三味寬筋藤湯散組總體體重與對照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;但藏藥三味寬筋藤湯散雌性小鼠體重在給藥后7 d、14 d輕于對照組，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，藏藥三味寬筋藤湯散雄性小鼠體重與對照組比較無顯著性差異，結(jié)果見表1。

3.1.2 藏藥三味寬筋藤湯散對小鼠臟器影響? 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)處死動物，解剖肉眼檢查各組小鼠主要臟器均未發(fā)現(xiàn)肉眼可見異常，三味寬筋藤湯散34.2原生藥g/kg對小鼠心、肝、肺、腎等主要臟器指數(shù)均無明顯影響，與對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;但可增加雄性小鼠脾臟指數(shù)，與對照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果見表2。

3.2 三味寬筋藤湯散對小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響 三味寬筋藤湯散對醋酸致小鼠腹腔通透性升高具有一定的抑制作用，但作用較弱，與模型組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果見表3。[FL）]

3.3 鎮(zhèn)痛試驗(yàn)

3.3.1 三味寬筋藤湯散對冰醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響 三味寬筋藤湯散可減少醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的次數(shù)，但與模型組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果見表4。

3.3.2 三味寬筋藤湯散對小鼠熱刺激疼痛反應(yīng)的影響 三味寬筋藤湯散對熱刺激小鼠痛閾值無明顯影響，與模型組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果見表5。

3 討論

痛風(fēng)（Gout）是由于嘌呤類物質(zhì)在體內(nèi)代謝紊亂，導(dǎo)致血液中尿酸水平升高，或（和）尿酸排泄減少而導(dǎo)致尿酸鹽結(jié)晶沉積于關(guān)節(jié)液和組織的炎癥性疾病[9]。痛風(fēng)的典型臨床表現(xiàn)是高尿酸血癥、急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、慢性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)石、關(guān)節(jié)畸形、腎實(shí)質(zhì)性病變等。痛風(fēng)急性發(fā)作期的藥物治療主要是抗炎鎮(zhèn)痛，臨床上常用秋水仙堿、非甾體抗炎藥和其他鎮(zhèn)痛藥。對于間歇期和慢性期的治療主要是降尿酸治療，使尿酸持續(xù)達(dá)到正常水平，治療藥物分為抑制尿酸生成藥（別嘌呤醇、非布司他等）、促進(jìn)尿酸排泄藥（丙磺舒、苯溴馬隆等）和尿酸酶（拉布立酶、培格洛替酶等）[10-11]。

藏藥三味寬筋藤湯散功效為祛風(fēng)除痹、消腫止痛、干黃水，臨床用于治療關(guān)節(jié)急慢性紅腫、脹痛、伸屈不利、四肢僵硬、痛風(fēng)及痹證等。原方載于藏醫(yī)藥經(jīng)典著作《四部醫(yī)典》，在阿壩州藏醫(yī)醫(yī)院常用于痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎，療效佳;且該方每日用量僅6 g，廉價(jià)有效，給患者帶來的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)較小，有較大的開發(fā)價(jià)值，因此課題組成員對藏藥三味寬筋藤的急性毒性試驗(yàn)以及抗炎鎮(zhèn)痛作用進(jìn)行研究。

本試驗(yàn)研究測得小鼠一次性口服藏藥三味寬筋藤湯散的最大耐受量為34.2 g原生藥/kg，該劑量為臨床擬用劑量（6.0 g/d，0.1 g/kg）的342倍，提示藏藥三味寬筋藤湯散臨床用藥是比較安全的。同時(shí)具有一定抑制醋酸致小鼠腹腔通透性升高的作用，也有減少醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的趨勢，提示三味寬筋藤湯散具有一定的鎮(zhèn)痛、抗炎作用。

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（收稿日期：2020-01-14 編輯：劉 斌）