鄭州市新生兒非衍生化法氨基酸和?；鈮A參考區(qū)間的制定

王雪俠，黨晨瀅

(鄭州市婦幼保健院 檢驗(yàn)科，河南 鄭州 453001)

新生兒遺傳代謝病一般是由遺傳物質(zhì)或者致病基因發(fā)生改變引起的，這類疾病通常具有先天性、終身性和家族性的特點(diǎn)，且種類繁多，臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣，發(fā)病輕重不一，無特異性[1]。雖然單一病種發(fā)病率較低，但是總體發(fā)病率較高，有報(bào)道新生兒遺傳代謝病的患病率在千分之五以上。部分遺傳代謝病患兒若未得到及時(shí)有效的診治，?？芍職?，嚴(yán)重者危及生命。遺傳代謝病的確診和分型常需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)室結(jié)果來進(jìn)行，這些檢查包括特異的代謝物測(cè)定、酶活性測(cè)定、生化指標(biāo)測(cè)定和基因突變檢測(cè)。遺傳代謝病通過早期檢測(cè)、干預(yù)可以避免或減少嚴(yán)重并發(fā)癥及神經(jīng)系統(tǒng)的損害，串聯(lián)質(zhì)譜法可以同時(shí)進(jìn)行幾十種氨基酸和肉堿的檢測(cè)。有研究表明串聯(lián)質(zhì)譜法在新生兒期進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)遺傳代謝病的早期診斷和預(yù)防有著舉足輕重的作用[2]。本研究的目的在于探討制定符合鄭州市新生兒人群的氨基酸和?；鈮A參考區(qū)間，以使篩查更科學(xué)合理。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象選取2016年8月至2019年9月在鄭州市行政區(qū)域內(nèi)出生的新生兒[3]，其監(jiān)護(hù)人自愿參加新生兒遺傳代謝病檢測(cè)且簽署新生兒遺傳代謝病篩查知情同意書。各助產(chǎn)機(jī)構(gòu)采血人員嚴(yán)格按照《新生兒遺傳代謝病篩查血片采集技術(shù)規(guī)范》采集足跟血，采血時(shí)間要求為出生72 h后，7 d內(nèi)，并充分哺乳8次以上，對(duì)于各種原因延遲采血者，采血時(shí)間不超過出生后20 d[4]。足跟血制成干血斑，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)冷鏈遞送至實(shí)驗(yàn)室，不符合要求的血片予以退回，合格血片收入實(shí)驗(yàn)室。本研究的檢測(cè)項(xiàng)目包括11種氨基酸、31種肉堿，數(shù)據(jù)均來自日常工作，符合相關(guān)規(guī)定。本研究無任何利益沖突。

1.2 儀器與試劑廣州市豐華生物工程有限公司FH6000MD三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜分析系統(tǒng)，豐華DBS220X全自動(dòng)打孔儀，豐華恒溫微量振蕩器，超聲波清洗儀，豐華非衍生化多種氨基酸、?；鈮A測(cè)定試劑盒[5]。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1標(biāo)本采集 所有標(biāo)本均制成血斑，室溫下晾干(4～6 h)。

1.3.2樣品處理 使用自動(dòng)打孔器將質(zhì)控和標(biāo)本打孔，直徑約為3.0 mm，依次放入U(xiǎn)型底微孔板中，每孔加入已配制好的萃取液100 μL，封板，在30 ℃，700 r·min-1的條件下振蕩45 min，然后靜置5 min，揭去封板膜，每孔轉(zhuǎn)移65 μL至對(duì)應(yīng)位置的V型板內(nèi)，用鋁箔封板覆蓋，上機(jī)[6]。采用全掃描采集模式，通過IRC-Pro軟件計(jì)算各分析物濃度，整理成Excel表格供分析。

2 結(jié)果

2.1 正態(tài)性檢驗(yàn)經(jīng)單樣本Kolmogorov-Smirnov檢驗(yàn)判斷資料的正態(tài)性，結(jié)果顯示11種氨基酸和31種肉堿為非正態(tài)分布[7]。

2.2 鄭州市新生兒11種氨基酸和31種肉堿的參考范圍本次研究數(shù)據(jù)為非正態(tài)分布，為了兼顧假陽性和假陰性，選取雙側(cè)95%人群所在范圍作為正常參考范圍，以百分位數(shù)(P2.5，P97.5)表示，統(tǒng)計(jì)出鄭州市61 199個(gè)新生兒非衍生法遺傳代謝病篩查串聯(lián)質(zhì)譜指標(biāo)中氨基酸和?；鈮A(表1)的醫(yī)學(xué)參考范圍[8]。

表1 非衍生化法氨基酸和?；鈮A的參考范圍(μmol·L-1)

續(xù)表1

3 討論

新生兒遺傳代謝病的篩查在中國已有數(shù)年歷史，我國最早是從20世紀(jì)80年代開始，首先開展的醫(yī)院有上海市兒科研究所、上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院，歷年的群體篩查證明，新生兒遺傳代謝病的篩查是一種行之有效的方法[9]。新生兒遺傳代謝病在群體篩查的三級(jí)預(yù)防中目標(biāo)明確，防治效果較好，可評(píng)估，獲益較大。傳統(tǒng)的新生兒遺傳代謝病篩查每個(gè)項(xiàng)目都需要各自打取血斑，分開實(shí)驗(yàn)，而串聯(lián)質(zhì)譜篩查新生兒遺傳代謝病則具有快速、簡(jiǎn)便、標(biāo)本用量少(1個(gè)血斑)、檢測(cè)病種多等優(yōu)點(diǎn)。此外，非衍生化方法檢測(cè)多種氨基酸、?；鈮A時(shí)不易對(duì)環(huán)境和工作人員造成污染。2002年自串聯(lián)質(zhì)譜應(yīng)用于新生兒遺傳代謝病篩查以來，我國新生兒遺傳代謝病篩查工作取得了舉世矚目的成績(jī)，但是也伴隨著一些問題，例如篩查項(xiàng)目不統(tǒng)一，各地參考范圍不同等。參考范圍不同會(huì)導(dǎo)致結(jié)果在判讀方面出現(xiàn)差異。

通過查閱文獻(xiàn)，本研究結(jié)果和國內(nèi)其他篩查中心的參考范圍有差異，考慮存在地區(qū)和環(huán)境因素，各實(shí)驗(yàn)室根據(jù)本地區(qū)情況制定相應(yīng)的參考范圍，才能夠更好地篩查出高危可疑患兒。歷年的篩查經(jīng)驗(yàn)表明，制定科學(xué)合理的參考范圍才能使指標(biāo)更適用于臨床。從全國的統(tǒng)計(jì)來看，新生兒遺傳代謝病篩查普遍存在假陽性率偏高的情況。本研究選取2016年8月至2019年9月在鄭州出生的61 199例新生兒作為觀察對(duì)象，通過軟件測(cè)算出11種氨基酸和31種肉堿的參考范圍。另外，還根據(jù)《新生兒疾病串聯(lián)質(zhì)譜篩查技術(shù)專家共識(shí)》[10]計(jì)算了一些氨基酸和?；鈮A的比值指標(biāo)，例如常用的Arg/Orn、Arg/Phe、Phe/Tyr、C3/C2、C4/C2等37項(xiàng)比值，這些比值指標(biāo)可以用于疾病的判斷和分型。后期結(jié)合基因診斷和其他確診實(shí)驗(yàn)結(jié)果再定期進(jìn)行評(píng)估，以便于評(píng)價(jià)所有這些指標(biāo)的適宜性。新生兒遺傳代謝病篩查假陽性率較高，合理制定醫(yī)學(xué)參考范圍，可減少假陽性新生兒的出現(xiàn)，從而穩(wěn)定家庭情緒，減少經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。遺傳代謝病臨床表現(xiàn)形式多樣，發(fā)病年齡不定，多數(shù)表現(xiàn)不典型，缺乏特異性，全身各個(gè)器官均可受累[11]，以神經(jīng)系統(tǒng)和消化系統(tǒng)的表現(xiàn)較為突出，其余臨床表現(xiàn)還有急性代謝性腦病、高氨血癥、代謝性酸中毒等，對(duì)于不能用一般疾病解釋的臨床表現(xiàn)，應(yīng)高度懷疑為遺傳代謝病。制定合理的參考范圍，對(duì)遺傳代謝病的篩查和診斷有著非常重要的作用，可更好地提高出生人口素質(zhì)，輔助臨床診治。