俄羅斯楊樹新品種N12玻璃化組培苗恢復(fù)培養(yǎng)的研究

梁立東 李明文

摘要： ?采用正交表L9（34）進(jìn)行試驗(yàn)設(shè)計(jì)，研究了不同培養(yǎng)基、6-BA濃度、KT濃度和瓊脂濃度對(duì)俄羅斯楊樹新品種N12玻璃化組培苗恢復(fù)培養(yǎng)的影響。結(jié)果表明：不同培養(yǎng)基、6-BA濃度、KT濃度和瓊脂濃度對(duì)玻璃化組培苗恢復(fù)率的影響具有極顯著的差異，其作用大小依次為培養(yǎng)基>6-BA濃度>KT濃度>瓊脂濃度;促進(jìn)玻璃化組培苗恢復(fù)培養(yǎng)的最佳處理方式為MS培養(yǎng)基、0 mg/L 6-BA、0.5 mg/L KT和9%瓊脂，其玻璃化組培苗恢復(fù)效果最好。

關(guān)鍵詞： ?楊樹; ?玻璃化; ?組培苗; ?培養(yǎng)

中圖分類號(hào)： ? S 792. 119， S 723 . 1 + 32. 6 ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： ? A ? ? ? ? ? ? ? ?文章編號(hào)：1001 - 9499（2020）04 - 0001 - 03

俄羅斯楊樹新品種N12（Populus alba × P. alba）是適用于我國(guó)高緯度寒冷地區(qū)營(yíng)造速生豐產(chǎn)林、農(nóng)田防護(hù)林及城市綠化等應(yīng)用的樹種，具有適應(yīng)性強(qiáng)、生長(zhǎng)迅速、干型通直、樹形優(yōu)美、抗性強(qiáng)等諸多特性[ 1 - 3 ]。2004年，黑河市林業(yè)科學(xué)院從俄聯(lián)邦科學(xué)院西伯利亞分院中心植物園引進(jìn)了該品種，通過區(qū)域化試驗(yàn)，證明該品種適合我國(guó)北方地區(qū)栽植[ 1 - 4 ]。目前，俄羅斯楊樹新品種N12的組織培養(yǎng)技術(shù)[ 5 ]、硬枝扦插生根能力[ 2 ]、硬枝扦插苗生長(zhǎng)[ 3 ]、區(qū)域化試驗(yàn)的研究已有報(bào)道[ 1 ]，但對(duì)N12的組培苗玻璃化問題尚未見報(bào)道。本研究探討了不同培養(yǎng)基、6-BA濃度、KT濃度和瓊脂濃度等因素對(duì)玻璃化組培苗恢復(fù)培養(yǎng)的影響，旨在為俄羅斯楊樹新品種N12玻璃化組培苗恢復(fù)提供有效的技術(shù)措施。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料為俄羅斯楊樹新品種N12當(dāng)年萌生嫩枝，經(jīng)黑河市林業(yè)科學(xué)院研究建立的組培體系，在培養(yǎng)過程中出現(xiàn)的玻璃化組培苗。

1. 2 試驗(yàn)方法

采用正交設(shè)計(jì)方法，按照正交表L9（34）進(jìn)行試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以培養(yǎng)基（A）、6-BA濃度（B）、KT濃度（C）和瓊脂濃度（D）為試驗(yàn)因素，每個(gè)因素下設(shè)3個(gè)水平（表1）。共設(shè)9個(gè)處理，每個(gè)處理5瓶，每瓶接種10個(gè)玻璃化組培苗，重復(fù)3次（表2）。

1. 3 培養(yǎng)條件

試驗(yàn)所用培養(yǎng)基附加蔗糖3%，培養(yǎng)基滅菌前pH值為5.8，經(jīng)高溫、高壓滅菌15 min（121 ℃，0.105 MPa下）。培養(yǎng)條件為溫度25 ℃，空氣相對(duì)濕度80%，光照強(qiáng)度20 μmol/m2·s，光照周期16 h/d。

1. 4 數(shù)據(jù)收集與處理

培養(yǎng)30 天后統(tǒng)計(jì)各處理的玻璃化組培苗恢復(fù)率（%）。應(yīng)用SPSS19.0軟件進(jìn)行極差和方差分析，并對(duì)差異顯著指標(biāo)進(jìn)行Duncan檢驗(yàn)和多重比較，采用Sigma Plot 12.5作圖。其中，恢復(fù)率（%）=正常組培苗數(shù)/供試玻璃化組培苗數(shù)×100。

2 結(jié)果與分析

2. 1 不同處理對(duì)玻璃化組培苗恢復(fù)的影響

不同處理對(duì)N12玻璃化組培苗恢復(fù)存在著明顯的差異。由圖1可以看出，不同處理間玻璃化組培苗恢復(fù)率變化范圍為12.7%～90.0%，處理4、5玻璃化組培苗恢復(fù)效果最好，恢復(fù)率分別達(dá)到了90.0%和88.7%，而且恢復(fù)的組培苗生長(zhǎng)旺盛、莖段粗壯、葉色翠綠;處理9玻璃化組培苗恢復(fù)效果最差，恢復(fù)率只有12.7%。

2. 2 不同因素及水平對(duì)玻璃化組培苗恢復(fù)率的極差分析

從圖2可知，培養(yǎng)基（A）的R值最大，達(dá)38.0;其次為6-BA濃度（B），R值為35.8;再次為KT濃度，R值16.2;瓊脂濃度的R值最小，只有3.6。根據(jù)R值大小可以判斷不同因素對(duì)玻璃化組培苗恢復(fù)率的影響作用大小為培養(yǎng)基（A）>6-BA濃度（B）>KT濃度（C）>瓊脂濃度（D）;同一因素不同水平的平均值可以判斷培養(yǎng)基（A）、6-BA濃度（B）、KT濃度（C）、瓊脂濃度（D）各水平影響作用大小分別為A2>A1>A3、B1>B2>B3、C3>C2>C1、D3>D2>D1。由不同因素每個(gè)水平試驗(yàn)結(jié)果平均值大小可以確定最佳處理水平組合為A2B1C3D3，即以MS為培養(yǎng)基、6-BA濃度0 mg/L、KT濃度0.5 mg/L、瓊脂濃度9%為玻璃化組培苗恢復(fù)最佳處理組合。

2. 3 不同試驗(yàn)因素及水平對(duì)玻璃化組培苗恢復(fù)率的方差分析與多重比較

極差分析結(jié)果能夠簡(jiǎn)單直觀反映不同試驗(yàn)因素及水平的影響大小，但不能反映不同試驗(yàn)因素及水平真實(shí)誤差大小及精度，所以還需要對(duì)不同試驗(yàn)因素及水平進(jìn)行方差分析與多重比較。從表3可知，培養(yǎng)基、6-BA濃度、KT濃度、瓊脂濃度對(duì)玻璃化組培苗恢復(fù)率的影響都極為顯著（P<0.01），但是對(duì)玻璃化組培苗恢復(fù)率的影響程度具有較大差異，作用大小依次為培養(yǎng)基>6-BA濃度>KT濃度>瓊脂濃度，這與極差分析結(jié)果相一致。

由多重比較結(jié)果（表4）可知，在培養(yǎng)基（A）的3個(gè)水平中，A2水平對(duì)玻璃化組培苗恢復(fù)率影響顯著高于A1和A3，說明最好的是MS培養(yǎng)基;在6-BA濃度（B）的3個(gè)水平中，B1水平對(duì)玻璃化組培苗恢復(fù)率影響顯著高于B2和B3，說明6-BA最好濃度為0 mg/L;在KT濃度（C）的3個(gè)水平中，C3水平對(duì)玻璃化組培苗恢復(fù)率影響顯著高于C1和C2，說明KT最好濃度為0.5 mg/L;在瓊脂濃度（D）的3個(gè)水平中，D3水平對(duì)玻璃化組培苗恢復(fù)率影響顯著高于D1和D2，說明瓊脂最好濃度為9%。綜合不同因素水平間多重比較可以看出，對(duì)玻璃化組培苗恢復(fù)率影響最佳的處理水平組合為A2B1C3D3，這與極差分析結(jié)果相一致。

3 討 論

試驗(yàn)結(jié)果表明，MS培養(yǎng)基最適宜玻璃化組培苗的恢復(fù)培養(yǎng);1/2MS培養(yǎng)基對(duì)玻璃化組培苗的恢復(fù)培養(yǎng)次之;WPM培養(yǎng)基對(duì)玻璃化組培苗的恢復(fù)培養(yǎng)影響最小。6-BA濃度為0～0.1 mg/L時(shí)，對(duì)玻璃化組培苗的恢復(fù)率具有極顯著降低作用;隨著6-BA濃度的增加，玻璃化組培苗的恢復(fù)率減小，可見6-BA濃度可對(duì)玻璃化組培苗的恢復(fù)造成強(qiáng)烈抑制作用。KT濃度為0～0.5 mg/L時(shí)，對(duì)玻璃化組培苗的恢復(fù)率具有極顯著促進(jìn)作用，隨著KT濃度的增加，玻璃化組培苗的恢復(fù)率增加。瓊脂濃度為3%～9%時(shí)對(duì)玻璃化組培苗的恢復(fù)率具有極顯著促進(jìn)作用，隨著瓊脂濃度增加，玻璃化組培苗的恢復(fù)率增加。由此可知，采用MS培養(yǎng)基、不添加6-BA、添加KT濃度為0.5 mg/L、瓊脂濃度為9%的組合時(shí)對(duì)俄羅斯楊樹新品種N12玻璃化組培苗的恢復(fù)效果最好。

參考文獻(xiàn)

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第1作者簡(jiǎn)介： ?梁立東（1982-）， ?男， ?高級(jí)工程師， ?現(xiàn)主要從事樹木組織培養(yǎng)及種苗培育和森林培育等方面的研究工作。

收稿日期： 2020 - 03 - ?20

（責(zé)任編輯： ? 張亞楠）

Abstract The orthogonal table L9（34） was used for experimental design. The effects of different media， 6-BA concentration， KT concentration and agar concentration on the restoration of vitrified tissue culture seedlings of a new Russian poplar variety were studied. The results showed that the effects of different media， 6-BA concentration， KT concentration， and agar concentration on the recovery rate of vitrification tissue culture seedlings were extremely significant， and their effects were in the order of medium> 6-BA concentration> KT concentration> agar concentration; the best treatment to promote the recovery of vitrification tissue culture seedlings is MS medium， 0 mg/L 6-BA， 0.5 mg/L KT and 9% agar. The vitrification tissue culture seedling has the best recovery effect.

Key words Poplar; ?Vitrification; ?Tissue culture seedlings; ?Culture