晚期非小細(xì)胞肺癌患者惡性腫瘤組織中定植菌群研究

宋國鋒

[摘要] 目的 探討晚期非小細(xì)胞肺癌（Non-small cell lung cancer，NSCLC）患者惡性腫瘤組織中定植菌群情況，分析氣道定植菌群與NSCLC發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。 方法 回顧性研究2017年1月～2018年10月我院行肺葉切除手術(shù)的NSCLC患者212例，肺癌標(biāo)本采集于癌性病變部位及毗鄰癌性病變的正常組織，分析細(xì)菌定植情況。根據(jù)是否存在定植菌群分為定植組32例和非定植組180例。對兩組患者細(xì)菌取樣培養(yǎng)和SP-D水平檢測。 結(jié)果 NSCLC患者中有15.09%（32/212）患者存在定植菌群，而正常組織有3.77%（8/212）存在定植菌群，肺癌組織中定植菌發(fā)生率明顯高于正常組織（P<0.05）。兩組菌群分布以肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯菌多見。定植組SP-D水平明顯高于非定植組（P<0.05）。相關(guān)性分析顯示，血清SP-D水平與致病性定植菌發(fā)生呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.215（P=0.023）。術(shù)后定植組并發(fā)癥發(fā)生率明顯高于非定植組（P<0.05），而定植組以肺部感染為主要并發(fā)癥，肺部感染發(fā)生率明顯高于非定植組（P<0.05）。 結(jié)論 細(xì)菌定植與肺癌的發(fā)生具有一定的相關(guān)性，肺癌患者合并致病性定植菌與術(shù)后并發(fā)癥發(fā)生密切相關(guān)，血清SP-D水平與患者術(shù)前致病菌定植狀態(tài)相關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 非小細(xì)胞肺癌;肺組織;定植菌;血清SP-D

[中圖分類號] R734.2;R563.1? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2020）16-0128-04

Study on colonizing flora in malignant tumor tissue of patients with advanced non-small cell lung cancer

SONG Guofeng

Department of Laboratory Medicine， Jiamusi Cancer Hospital in Heilongjiang Province， Jiamusi? ?154007， China

[Abstract] Objective To explore the colonizing flora of malignant tumor tissues in patients with advanced non-small cell lung cancer（NSCLC）， and to analyze the relationship between colonizing flora of airways and the occurrence and development of NSCLC. Methods A retrospective study? of 212 patients with NSCLC who underwent lobectomy in our hospital from January 2017 to October 2018 were collected. Lung cancer specimens were collected at the cancerous lesion and normal tissue adjacent to the cancerous lesion. The bacterial colonization was analyzed. According to the presence of colonizing bacteria， the patients were divided into? colonizing bacteria group（n=32） and non-colonizing bacteria group（n=180）. The bacteria sampling was cultured and SP-D level was detected in two groups. Results 15.09%（32/212） of NSCLC patients had colonizing flora， while 3.77%（8/212） of normal tissue had colonizing flora. The incidence of colonizing bacteria in lung cancer tissue was significantly higher than that of normal tissue（P<0.05）. The distribution of bacteria in the two groups was more common with Streptococcus pneumoniae and Klebsiella pneumoniae. The SP-D level in the colonizing-bacteria group was significantly higher than that in the non-colonizing bacteria group（P<0.05）. Correlation analysis showed that the serum SP-D level was positively correlated with the occurrence of pathogenic colonizing bacteria， with a correlation coefficient of 0.215（P=0.023）. The postoperative complications rate of colonizing-bacteria group were significantly higher than the non-colonizing bacteria group（P<0.05）. While the colonizing-bacteria group had lung infection as the main complication， and the incidence of lung infection in the colonizing-bacteria group was significantly higher than that of the non-colonizing bacteria group（P<0.05）. Conclusion Bacterial colonization has a certain correlation with the occurrence of lung cancer. Lung cancer combined with pathogenic colonization bacteria is closely related to postoperative complications. Serum SP-D level is related to the preoperative colonization status of pathogenic bacteria.

[Key words] Non-small cell lung cancer; Lung tissue; Colonizing bacteria; Serum SP-D

肺癌是我國高死亡率的惡性腫瘤之一[1]，近年來發(fā)病率持續(xù)攀升，發(fā)病年齡縮小，其中80%～85%為非小細(xì)胞肺癌（Non-small cell lung cancer，NSCLC）[2]。NSCLC的發(fā)生是機(jī)體易感性與環(huán)境因素共同作用的結(jié)果[3]。近年來，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，氣道定植菌群作為重要環(huán)境因素在NSCLC發(fā)生、進(jìn)展過程中的作用越來越受到重視[4]。目前，已有研究證實術(shù)前致病性氣道細(xì)菌定植是導(dǎo)致術(shù)后肺部并發(fā)癥的獨立危險因素。但對于氣道細(xì)菌定植與肺癌發(fā)生之間的關(guān)系探討較少。為此，本研究探討了晚期非小細(xì)胞肺癌患者惡性腫瘤組織中定植菌群情況，分析氣道定植菌群與NSCLC發(fā)生發(fā)展的關(guān)系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

采用回顧性分析法，選取我院2017年1月～2018年10月診治的212例NSCLC患者作為調(diào)查對象。其中男120例，女92例，平均年齡（52.94±8.47）歲，癌癥類型：鱗癌118例，腺癌94例。臨床分期：Ⅰ期80例，Ⅱ期132例。根據(jù)留取肺癌組織（腫瘤邊緣1×1×1 cm3）是否存在定植菌群分為定植組32例和非定植組180例。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）經(jīng)影像學(xué)及病理學(xué)檢查確診為NSCLC者;（2）國際抗癌聯(lián)盟2016年第8版肺癌TNM分期屬于Ⅲ～Ⅳ期[5]，有手術(shù)指征者;（3）全胸腔鏡/開胸肺葉切除術(shù)+系統(tǒng)淋巴結(jié)清掃者;（4）入院前4周未應(yīng)用過抗生素藥物者;（5）患者知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）已發(fā)生轉(zhuǎn)移或伴有血液系統(tǒng)病、免疫系統(tǒng)疾病者;（2）全肺切除者;（3）合并有肺部感染者;（4）術(shù)中出血量≥1000 mL者;（5）有精神病或癡呆史者。

1.2 方法

患者均進(jìn)行全胸腔鏡/開胸肺葉切除手術(shù)。全胸腔鏡肺葉切除患者手術(shù)方法為單向式胸腔鏡肺葉切除法+系統(tǒng)淋巴結(jié)清掃。開胸患者應(yīng)用常規(guī)后外側(cè)切口，肺葉切除術(shù)+系統(tǒng)淋巴結(jié)清掃。系統(tǒng)淋巴結(jié)清掃左側(cè)必須清掃第5、6、7、8、9、10組淋巴結(jié)，右側(cè)包括第2、3、4、7、8、9、10組淋巴結(jié)。術(shù)后均應(yīng)用鎮(zhèn)痛泵進(jìn)行止痛治療，均早期促使患者下床活動，必要時應(yīng)用非甾體類止痛藥。鎮(zhèn)痛泵于胸腔引流管拔除的同時也一起停止。兩組患者均根據(jù)胸腔引流氣體和液體量確定行胸部X線片檢查。

1.3 觀察指標(biāo)

（1）定植菌鑒定：手術(shù)中分別留取肺癌組織（腫瘤邊緣1×1×1 cm3）、正常組織（肉眼觀遠(yuǎn)離癌組織的正常肺組織）。取細(xì)菌學(xué)標(biāo)本，培養(yǎng)的合格樣本按照標(biāo)準(zhǔn)流程預(yù)處理后，依次接種于血平板、中國藍(lán)和巧克力平板中，在5%CO2、37℃箱內(nèi)卵化18 h，卵化完成后記錄菌落數(shù)量，并進(jìn)行分離鑒定。采用P2000全自動細(xì)菌分析儀進(jìn)行致病菌鑒定，質(zhì)控菌株均來自中國微生物菌種保藏中心。質(zhì)控菌株：金黃色葡萄球菌ATCC 25923、糞腸球菌ATCC29212、大腸埃希菌ATCC25922、肺炎克雷伯菌ATCC700603、銅綠假單胞菌ATCC27853。（2）SP-D水平變化：于清晨采集患者的靜脈血液5 mL，3000 r/min離心分離，收集上清液，于-20℃保存?zhèn)溆茫捎妹嘎?lián)免疫吸附法測定肺表面活性蛋白D含量（Surfactant protein，SP-D）水平，試劑盒購于上海通蔚試劑有限公司。比較兩組研究對象SP-D水平變化。（3）術(shù)后并發(fā)癥：記錄定植組與非定植組患者術(shù)后并發(fā)癥，包括乳糜胸、皮下氣腫、胸腔積液/氣胸、肺不張、聲音嘶啞、肺部感染。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

使用SPSS16.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行分析，計量資料用（x±s）表示，采用獨立樣本t檢驗或方差分析，計數(shù)資料用[n（%）]表示，采用χ2檢驗，樣本在作t檢驗和方差分析前，均先作正態(tài)分析或方差齊性檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 正常組織與肺癌組織定植菌群特征比較

肺癌組織中定植菌發(fā)生率明顯高于正常組織（P<0.05）。見表1。

2.2 正常組織與肺癌組織定植菌群分布比較

兩組對象菌群分布以肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯菌多見。見表2。

2.3 兩組血清SP-D水平比較

定植組SP-D水平明顯高于非定植組（P<0.05）。相關(guān)性分析顯示，血清SP-D水平與致病性定植菌發(fā)生呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.215（P=0.023）。見表3。

2.4 兩組術(shù)后并發(fā)癥發(fā)生率比較

術(shù)后定植組并發(fā)癥發(fā)生率明顯高于非定植組（P<0.05），而定植組以肺部感染為主要并發(fā)癥，肺部感染發(fā)生率明顯高于非定植組（P<0.05）。見表4。

3 討論

國家癌癥中心數(shù)據(jù)顯示，2006～2011年我國肺癌患病率為130.2（1/10萬），其中男性84.6（1/10萬），女性45.6（1/10萬），男性患病率居惡性腫瘤第2位，女性居第4位[7-9]。報道顯示，在已明確診斷的肺癌患者中，約80%為NSCLC[10，11]。癌癥的發(fā)生機(jī)制復(fù)雜，是多步驟、多途徑的過程，也是機(jī)體內(nèi)因與外界環(huán)境長期交互作用的結(jié)果[12，13]。近年來，隨著分子生物學(xué)研究的進(jìn)展，癌癥患者相關(guān)組織內(nèi)致病性細(xì)菌定植在其發(fā)生發(fā)展，尤其是并發(fā)癥發(fā)生中的作用受到廣泛關(guān)注[14，15]。國內(nèi)外專家廣泛探討了腸道菌群與結(jié)直腸癌發(fā)生及進(jìn)展的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，包括牛鏈球菌、梭狀芽胞桿菌、幽門螺旋桿菌等與結(jié)直腸癌的發(fā)生及進(jìn)展相關(guān)[16-18]。高珂等[19]研究顯示，肺癌患者合并致病性氣道定植菌與術(shù)后肺炎發(fā)生具有顯著關(guān)系。彭武君等[20]報道顯示，氣道定植菌會增加肺癌患者術(shù)后肺部感染的幾率，而這一現(xiàn)象在老年群體表現(xiàn)更加明顯。

本研究探討了晚期NSCLC患者惡性腫瘤組織中定植菌群的情況，結(jié)果顯示NSCLC患者中有15.09%（32/212）患者存在定植菌群，肺癌組織中定植菌發(fā)生率明顯高于正常組織（P<0.05），提示定植菌群的存在可能與肺癌的發(fā)生有一定相關(guān)性。定植菌群分布結(jié)果顯示，肺癌組織與正常組織菌群分布以肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯菌多見。

肺表面活性蛋白（Surfactant protein，SP）是肺組織局部分泌的重要活性物質(zhì)，其能夠調(diào)節(jié)肺表面張力、促進(jìn)蛋白酶與抑制劑之間的平衡，同時還可以抵抗病原體侵襲、炎性因子釋放及氧化應(yīng)激[21，22]。本研究結(jié)果顯示，定植組SP-D水平明顯高于非定植組（P<0.05）。而相關(guān)性分析顯示，血清SP-D水平與致病性氣道定植菌發(fā)生呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.215（P=0.023）。上述結(jié)果表明肺癌組織局部免疫功能的變化可能是導(dǎo)致細(xì)菌定植的原因之一。

NSCLC患者術(shù)后并發(fā)癥的發(fā)生是影響患者預(yù)后及生活質(zhì)量的重要因素，本研究結(jié)果顯示，術(shù)后定植組并發(fā)癥發(fā)生明顯高于非定植組（P<0.05），而定植組以肺部感染為主要并發(fā)癥，肺部感染發(fā)生率明顯高于非定植組（P<0.05），這可能是由于定植菌是肺部感染發(fā)生的重要因素，同時可誘發(fā)多種并發(fā)癥，不僅影響手術(shù)效果，還對患者的預(yù)后產(chǎn)生不利影響。這與高珂等[19]研究結(jié)果一致。

綜上所述，細(xì)菌定植與肺癌的發(fā)生具有一定的相關(guān)性，肺癌患者合并致病性定植菌與術(shù)后并發(fā)癥發(fā)生密切相關(guān)，血清SP-D水平與患者術(shù)前致病菌定植狀態(tài)相關(guān)。但本研究尚存在一定的不足，如未對影響定植菌群的因素進(jìn)行單因素及多因素分析，需在今后的研究中不斷完善，以更好地為臨床提供參考。

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（收稿日期：2020-03-17）