玫瑰茄總黃酮超聲波-微波協(xié)同提取及抗氧化活性

黃瓊 黃曉梅

摘? 要：采用Box-Behnken響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)法對(duì)玫瑰茄總黃酮超聲波-微波協(xié)同提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，研究了乙醇濃度、液固比、提取時(shí)間、微波功率、提取次數(shù)5個(gè)單因素對(duì)總黃酮提取量的影響，建立了乙醇濃度、液固比和微波功率的三因素回歸模型，并研究其抗氧化活性。結(jié)果表明，提取的最佳工藝參數(shù)為乙醇濃度40%、液固比50∶1（mL/g）、微波功率250 W、提取時(shí)間20 min、超聲波功率50 W，在此條件下提取2次，總黃酮提取量為40.2?mg/g。同時(shí)以維生素C作對(duì)照，研究了玫瑰茄總黃酮粗提物和純化物的體外抗氧化活性。結(jié)果表明，玫瑰茄總黃酮粗提物和純化物都具有較強(qiáng)的抗氧化活性，能夠有效清除O₂^-·自由基和DPPH自由基，清除能力與濃度呈較明顯的量效關(guān)系，但抗氧化能力較維生素C弱。

關(guān)鍵詞：響應(yīng)面法;超聲波-微波協(xié)同;玫瑰茄總黃酮;提取;抗氧化活性中圖分類(lèi)號(hào)：S681;TS201.2 ?????文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

Ultrasound-microwave Assisted Extraction and Antioxidant Activity of Total Flavonoids fromHibiscus sabdariffaL.

HUANG Qiong， HUANG Xiaomei

Fujian Vocational College of Agriculture， Fuzhou， Fujian 350003， China

Abstract： The ultrasonic-microwave assisted extraction of the flavonoids fromHibiscus sabdariffa L. was optimized by response surface analysis with a Box-Behnken design. The effects of five important factors， liquid-material ratio， ethanol concentraion， extraction time， microwave power and the extraction times， on the flavonoids extraction ofH. sabdariffa Lwere investigated in the single factor experiments. The regression model of the liquid-material ratio， ethanol concentration and microwave power to solvent was established. The optimum technology condition for the ultrasonic-microwave assisted extraction of the flavonoids fromH. sabdariffa L. was determined as follow： the ethanol concentration 40%， liquid-material ratio 50∶1 （mL/g）， microwave power 250 W， extraction time 20 min and ultrasonic power 50 W， extracted twice. Under the conditions， the flavonoids yield was 40.2 mg/g. Using vitamin C as the control， the antioxidant activity of the crude extract and purified flavonoids was studied. The crude extract and purified flavonoids fromH. sabdariffa L. had a strong antioxidant activity， and they had an antioxidation effect on DPPH and O^-₂·， and the scavenging activity had an obvious dose-effect relationship of concentration， but the antioxidant activity was weaker than that of vitamin C.

Keywords： response surface methodology; ultrasound-microwave assisted; total flavonoids fromHibiscus sabdariffa L.; extraction; antioxidation activity

DOI： 10.3969/j.issn.1000-2561.2020.06.024

玫瑰茄（Hibiscus sabdariffaL.），又名山琉、洛神花、芙蓉煎，是錦葵科木槿屬的一年生草本植物^[1]。花萼呈紫紅色，具有降血糖、降血脂、降血壓、抗癌、改善消化系統(tǒng)等藥理作用^[2]，含有豐富的碳水化合物、有機(jī)酸、粗蛋白、粗脂肪、多酚和總黃酮^[3]。其中，總黃酮有黃酮醇和黃烷醇，它們以單體或聚合物的形式存在^[4]。目前關(guān)于玫瑰茄栽培、加工研究報(bào)道較多，如李秀芬等^[5]研究了玫瑰茄引種栽培技術(shù)，洪璇等^[6]研究了玫瑰茄果凍配方及加工工藝，李玉珠等^[7]研究了玫瑰茄酒發(fā)酵工藝。但是針對(duì)玫瑰茄總黃酮提取工藝的研究報(bào)道很少，僅有王麗巖等^[8]研究了超聲波輔助提取玫瑰茄總黃酮工藝，但采用超聲波提取易出現(xiàn)受熱不均、產(chǎn)熱不足等問(wèn)題。

研究表明，總黃酮是一類(lèi)有較強(qiáng)生物活性物質(zhì)^[9]，具有消炎、抗菌、抗突變、抗氧化、抗腫瘤、預(yù)防心血管疾病等功效^[10-11]。植物黃酮類(lèi)化合物提取方法主要有溶劑提取法、微波提取法、超聲波輔助提取、超聲波酶法提取、超聲波-微波協(xié)同提取法等^[12-15]。超聲波-微波協(xié)同提取是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的新技術(shù)，具有節(jié)約能耗、增大提取率、縮短提取時(shí)間、易于操作等優(yōu)點(diǎn)，但應(yīng)用在玫瑰茄總黃酮提取尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究以福建漳州產(chǎn)地的玫瑰茄干花萼為原料，采用超聲波-微波協(xié)同提取技術(shù)，利用Box-Behnken響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)法優(yōu)化提取工藝，并以維生素C為對(duì)照，測(cè)定玫瑰茄總黃酮抗氧化活性，旨在為玫瑰茄總黃酮的相關(guān)研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，以期為玫瑰茄在功能食品中的開(kāi)發(fā)利用和新型抗氧化劑的開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)，為玫瑰茄綜合利用開(kāi)辟一條新的途徑。

1? 材料與方法

1.1材料

玫瑰茄：市售，產(chǎn)地為福建漳州;蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，純度≥98%）;抗壞血酸（維生素C，南京建成生物工程研究所，純度為99%）;DPPH自由基（上海銘博生物科技有限公司，純度為96%）;無(wú)水乙醇、乙酸乙酯、NaNO₂、Na₂CO_3、Al（NO₃）₃等化學(xué)試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

ME204電子天平，瑞士梅特勒-托利多公司;CW-2000超聲-微波協(xié)同萃取儀，上海新拓微波溶樣測(cè)試技術(shù)有限公司;UV-1800-DS2紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)，上海美譜達(dá)儀器有限公司;LGR10-4.2高速冷凍離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠;RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器設(shè)備公司。

1.2方法

1.2.1 ?玫瑰茄總黃酮的提取工藝流程? 玫瑰茄花萼→清洗→烘干→粉碎→過(guò)篩→干粉→稱(chēng)量→料液混勻→超聲波-微波協(xié)同提取→過(guò)濾→離心分離→得上清液。

1.2.2 ?蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制及玫瑰茄總黃酮提取量計(jì)算? 在參考前人研究結(jié)果^[16]的基礎(chǔ)上稍作修改。精密稱(chēng)取質(zhì)量恒定的5.0 mg蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，用60%乙醇定容至50?mL，即為0.1?mg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。準(zhǔn)確量取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL分別置于50 mL容量瓶中，各加入1.0 mL 5% NaNO₂溶液，搖勻，靜置6 min;然后分別加入1.0?mL 10% Al（NO₃）₃水溶液，搖勻，靜置6 min;再分別加入10.0 mL 4% NaOH，搖勻，最后用60%乙醇稀釋至刻度，靜置15 min。通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)可知蘆丁和玫瑰茄總黃酮最大吸收波長(zhǎng)為510 nm，因此在510 nm處測(cè)定吸光度。以60%乙醇作空白對(duì)照，以吸光度A為縱坐標(biāo)，以蘆丁質(zhì)量濃度C（mg/mL）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得到蘆丁質(zhì)量濃度C（mg/mL）與吸光度A之間的回歸方程C=0.0950A-0.0006，R²=0.9998，表明吸光值與蘆丁質(zhì)量濃度線(xiàn)性關(guān)系良好。

玫瑰茄總黃酮提取量計(jì)算^[17]。量取1.0 mL上清液置于50 mL容量瓶，按標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的測(cè)定步驟，測(cè)得樣品的吸光度，得樣品總黃酮質(zhì)量濃度，并計(jì)算樣品總黃酮提取量。

總黃酮提取量（mg/g）=

式中：C為樣品提取液總黃酮質(zhì)量濃度，mg/mL;N為稀釋倍數(shù);V為樣品提取液體積，mL;M為樣品質(zhì)量，g。

1.2.3? 單因素試驗(yàn)? （1）乙醇濃度對(duì)玫瑰茄總黃酮提取量的影響?？傸S酮易溶于甲醇、乙醇等有機(jī)溶劑，從溶劑毒性和價(jià)格考慮，選擇乙醇為提取劑，超聲波功率為50 W（儀器限制，超聲波功率限定為50 W）。設(shè)乙醇濃度分別為30%、40%、50%、60%、70%，液固比10∶1（mL/g），提取時(shí)間10 min，微波功率150 W，提取1次，考察乙醇濃度對(duì)玫瑰茄總黃酮提取量的影響。

（2）液固比對(duì)玫瑰茄總黃酮提取量的影響。設(shè)液固比分別為10∶1、20∶1、30∶1、40∶1、50∶1、60∶1（mL/g），乙醇濃度40%，提取時(shí)間10?min，微波功率為150 W，提取1次，考察液固比對(duì)玫瑰茄總黃酮提取量的影響。

（3）提取時(shí)間對(duì)玫瑰茄總黃酮提取量的影響。設(shè)提取時(shí)間分別為10、15、20、25、30 min，乙醇濃度40%，液固比為50∶1（mL/g），微波功率150 W，提取1次，考察提取時(shí)間對(duì)玫瑰茄總黃酮提取量的影響。

（4）微波功率對(duì)玫瑰茄總黃酮提取量的影響。微波功率分別為150、200、250、300、350、400 W，乙醇濃度40%，液固比為50∶1（mL/g），提取時(shí)間20 min，提取1次，考察微波功率對(duì)玫瑰茄總黃酮提取量的影響。

（5）提取次數(shù)對(duì)玫瑰茄總黃酮提取量的影響。設(shè)提取次數(shù)分別為1、2、3次，乙醇濃度40%，液固比為50∶1（mL/g），提取時(shí)間20 min，微波功率250 W。考察提取次數(shù)對(duì)玫瑰茄總黃酮提取量的影響。

1.2.4? 響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)設(shè)計(jì)? 在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，影響玫瑰茄總黃酮提取量的3個(gè)關(guān)鍵因素為乙醇濃度、液固比和微波功率，采用響應(yīng)面法中的 Box-Behnken模型優(yōu)化試驗(yàn)設(shè)計(jì)。響應(yīng)面試驗(yàn)因素水平如表1所示。

1.2.5? 加標(biāo)回收率測(cè)定? 按照最優(yōu)提取工藝條件提取玫瑰茄總黃酮3份，分別加入蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液，混勻，于510 nm處測(cè)吸光度得總黃酮含量，計(jì)算加標(biāo)回收率，其計(jì)算公式為：

1.2.6? 玫瑰茄總黃酮的純化? 將玫瑰茄總黃酮粗提液置于真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀55 ℃減壓濃縮。后用溫水將濃縮物攪拌溶解，石油醚萃取脂類(lèi)物質(zhì)和色素類(lèi)物質(zhì)3次。將萃取液用乙酸乙酯（1∶1）萃取總黃酮3次，合并萃取液，真空抽濾，減壓濃縮，于65?℃真空干燥。將上述黃酮粉與5% Na₂CO₃溶液混合均勻，兩者比例為1∶100，調(diào)pH為5.0～6.0，用乙酸乙酯萃取3次，真空抽濾、減壓濃縮、真空干燥，最終得到純化后的玫瑰茄總黃酮^[18]。

1.2.7? 玫瑰茄總黃酮抗氧化性研究? （1）玫瑰茄總黃酮對(duì)超氧陰離子自由基（O₂^-·）的清除作用。在參考文獻(xiàn)[19]基礎(chǔ)上稍作修改，精確量取1.0?mL 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mg/mL粗提物和純化物于50?mL容量瓶，分別加入8.0?mL 50?mmol/L Tris-HCl 緩沖液（pH 8.2），25?℃水浴20 min，取出后再加入1.0?mL 25?mmol/L鄰苯三酚，混勻，靜置5 min，立刻加入4滴10 mol/L HCl終止反應(yīng)，在波長(zhǎng)325 nm處測(cè)吸光度K₁，用蒸餾水代替鄰苯三酚同法測(cè)定吸光度K₂，以1.0?mL蒸餾水代替樣品液同法測(cè)定吸光度K₃，以維生素C作為對(duì)照。O₂^-·清除率按下式計(jì)算。

O₂^-·清除率=（1?）×100%

式中：K₁為樣品液吸光度;K₂為對(duì)照液吸光度;K₃為空白液吸光度。

（2）玫瑰茄總黃酮對(duì)DPPH自由基的清除作用。在參考文獻(xiàn)[20]基礎(chǔ)上稍作修改，準(zhǔn)確移取1.0 mL 0.1 mg/mL DPPH溶液，分別加入1.0 mL 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mg/mL粗提物和純化物于比色管中，混勻，黑暗中靜置30 min，517 nm波長(zhǎng)處測(cè)吸光度。以維生素C作為對(duì)照。DPPH自由基清除率按下式計(jì)算：

DPPH·清除率=（1?）×100%

式中：B₁為樣品加DPPH溶液吸光度;B₂為樣品加乙醇溶劑吸光度;B₀為不加樣品空白對(duì)照液吸光度。

1.3數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 21.0軟件對(duì)單因素試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析，采用Design Expert 8.0.6軟件對(duì)響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，試驗(yàn)數(shù)據(jù)均為3次平行試驗(yàn)的平均值。

2 ?結(jié)果與分析

2.1單因素試驗(yàn)

2.1.1 ?乙醇濃度對(duì)玫瑰茄總黃酮提取量的影響? 由圖1可知，玫瑰茄總黃酮提取量隨著乙醇濃度的增大呈現(xiàn)先增加后減少的趨勢(shì)，乙醇濃度為40%時(shí)，提取量最高。其原因是乙醇溶液極性與總黃酮極性相似，隨著乙醇濃度的增大，總黃酮易溶出，使得提取量增大，但是乙醇濃度過(guò)高時(shí)，醇溶性物質(zhì)如蛋白質(zhì)、兒茶素等物質(zhì)溶出，降低總黃酮提取量。因此，選定乙醇濃度為40%。

2.1.2 ?液固比對(duì)玫瑰茄總黃酮提取量的影響? 由圖2可知，液固比為10∶1～50∶1（mL/g），提取量隨著液固比增大而增加，當(dāng)液固比為50∶1（mL/g）時(shí)，提取量最高，液固比為50∶1～60∶1（mL/g）時(shí)，提取量隨著液固比增大而減少，其原因是乙醇溶劑用量的增加，有利于總黃酮溶出，提取量迅速增加，但是溶劑用量過(guò)多，其他物質(zhì)如色素等也會(huì)溶解出來(lái)，導(dǎo)致提取量降低。因此，選定液固比為50∶1（mL/g）。

2.1.3? 提取時(shí)間對(duì)玫瑰茄總黃酮提取量的影響? 由圖3可知，提取量隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)呈現(xiàn)先增加后減少的趨勢(shì)，當(dāng)提取時(shí)間為20 min時(shí)，提取量最高。其原因是隨著提取時(shí)間延長(zhǎng)，細(xì)胞內(nèi)黃酮類(lèi)活性物質(zhì)充分與乙醇溶劑接觸，使得更多黃酮類(lèi)化合物溶出，提取量增大，但提取時(shí)間太長(zhǎng)，導(dǎo)致其他非黃酮類(lèi)活性物質(zhì)溶出，總黃酮提取量反而下降。所以，最佳提取時(shí)間為20 min。

2.1.4 ?微波功率對(duì)玫瑰茄總黃酮提取量的影響? 由圖4可知，玫瑰茄總黃酮提取量隨著微波功率升高先增大后減少。當(dāng)微波功率是250 W時(shí)，提取量最高，其原因是微波功率升高，有利于軟化和破壞細(xì)胞壁，使更多黃酮類(lèi)物質(zhì)溶出，但是功率太高，會(huì)造成提取液溫度提升較快，使得部分黃酮類(lèi)物質(zhì)因受熱不均而失去活性，而且功率過(guò)高，溶劑揮發(fā)速度加快，導(dǎo)致總黃酮含量下降，所以，選定微波功率為250 W。

2.1.5? 提取次數(shù)對(duì)玫瑰茄總黃酮提取量的影響? 由圖5可知，增大提取次數(shù)，有利于玫瑰茄總黃酮的提取，當(dāng)提取次數(shù)為3次時(shí)，玫瑰茄總黃酮提取量最高，但是同提取2次比較，提取量相差不大，僅相差0.9?mg/g，說(shuō)明提取次數(shù)對(duì)玫瑰茄總黃酮提取量影響不顯著，為了節(jié)約能耗，選擇提取次數(shù)為2次最優(yōu)。

2.2各單因素與玫瑰茄總黃酮提取量的方差分析

利用SPSS 21.0對(duì)影響玫瑰茄總黃酮提取量各單因素進(jìn)行方差分析，結(jié)果如表2所示。由表2可知，液固比、乙醇濃度和微波功率對(duì)玫瑰茄總黃酮提取量均有極顯著影響（P<0.01），提取時(shí)間對(duì)總黃酮提取量有顯著影響（P<0.05），提取次數(shù)對(duì)總黃酮提取量影響不顯著（P>0.05）。綜合考慮選定影響玫瑰茄總黃酮提取量的3個(gè)關(guān)鍵因素（乙醇濃度、液固比和微波功率）進(jìn)行優(yōu)化試驗(yàn)設(shè)計(jì)。

2.3玫瑰茄總黃酮提取條件響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果及分析

2.3.1? 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果? 響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)因素水平見(jiàn)表1，設(shè)計(jì)方案及試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3，回歸方程的方差分析見(jiàn)表4。利用Design-Expert 8.0.5軟件對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行回歸擬合，得到玫瑰茄總黃酮提取量對(duì)液固比（A）、乙醇濃度（B）和微波功率（C）二次回歸方程為Y=40.7?2.24A? 1.32B+0.61C+4.55AB+0.58AC+1.8BC?8.9A²?12.04B²?9.01C²，R²=0.9961，表明該方程對(duì)實(shí)驗(yàn)擬合程度較好，說(shuō)明此方程較準(zhǔn)確可靠，可以通過(guò)此模型來(lái)預(yù)測(cè)玫瑰茄總黃酮最優(yōu)提取條件。

由表4可知模型的P<0.01，表明回歸模型極顯著;該模型的失擬項(xiàng)P>0.05，不顯著，表明該回歸方程擬合度和可靠性較高，可以作為預(yù)測(cè)玫瑰茄總黃酮最優(yōu)提取工藝參數(shù)的模型。在回歸方程中，A、AB、A²、B²、C² 對(duì)總黃酮提取量影響極顯著，B、C、BC對(duì)總黃酮提取量影響顯著。AC對(duì)總黃酮提取量影響不顯著。由F值可得影響總黃酮提取量各因素順序?yàn)椋阂汗瘫龋?em>A）>乙醇濃度（B）>微波功率（C）。

2.3.2 ?等高線(xiàn)和響應(yīng)面分析因素間的交互作用? 液固比、乙醇濃度和微波功率兩兩交互作用等高線(xiàn)及響應(yīng)面見(jiàn)圖6、圖7、圖8。液固比和乙醇濃度響應(yīng)面較陡，等高線(xiàn)為橢圓形，說(shuō)明它們之間的交互作用對(duì)響應(yīng)值影響顯著;乙醇濃度和微波功率響應(yīng)面較陡，等高線(xiàn)為橢圓形，說(shuō)明它們之間的交互作用對(duì)響應(yīng)值影響顯著;液固比和微波功率響應(yīng)面較平滑，等高線(xiàn)為圓形，說(shuō)明它們之間的交互作用對(duì)響應(yīng)值影響不顯著。由圖6A等高線(xiàn)的疏密程度可知，乙醇濃度比軸的等高線(xiàn)變化密集，而液固比比軸的等高線(xiàn)變化稀疏，所以與乙醇濃度相比，液固比對(duì)響應(yīng)值峰值的影響更

大;從圖7A可知液固比對(duì)響應(yīng)值峰值的影響比微波功率更大;從圖8A可知乙醇濃度對(duì)響應(yīng)面峰值影響比微波功率更大。由圖6B、圖7A、圖7B、圖8A、圖8B可知，液固比對(duì)響應(yīng)值的影響最為顯著，表現(xiàn)為曲線(xiàn)坡度較陡;而乙醇濃度和微波功率次之，表現(xiàn)為較液固比曲線(xiàn)更為平滑。因此，影響玫瑰茄總黃酮提取量影響主次是液固比>乙醇濃度>微波功率。這一點(diǎn)，同表3分析結(jié)果一致。

2.4響應(yīng)面試驗(yàn)?zāi)Ｐ偷尿?yàn)證

由Design-Expert 8.0.5軟件分析得最佳提取工藝條件為液固比48.55∶1?mL/g、乙醇濃度39.19%、微波功率251.08 W，在此條件下，玫瑰茄總黃酮提取量預(yù)測(cè)值為40.9 mg/g?？紤]到便于操作，最終確定提取最佳工藝條件為液固比50∶1 mL/g、乙醇濃度40%、微波功率250?W。為了檢驗(yàn)試驗(yàn)設(shè)計(jì)所得結(jié)果的可靠性，采用上述最佳工藝條件平行提取3次，得到玫瑰茄總黃酮提取量為40.2?mg/g，該值與預(yù)測(cè)值基本吻合，表明由Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)所得的最佳提取工藝條件科學(xué)合理，準(zhǔn)確可靠。

2.5玫瑰茄總黃酮回收率測(cè)定

加標(biāo)回收率試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表5。由表5可得，平均加標(biāo)回收率為97.1%，符合規(guī)定。表明該提取方法測(cè)定玫瑰茄總黃酮提取量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠，準(zhǔn)確度較高。

2.6玫瑰茄總黃酮抗氧化活性測(cè)定

2.6.1? 玫瑰茄總黃酮對(duì)O₂^-·自由基的清除作用 玫瑰茄總黃酮對(duì)O₂^-·的清除作用結(jié)果見(jiàn)圖9。由圖9可見(jiàn)，無(wú)論是玫瑰茄總黃酮粗提物還是總黃酮純化物對(duì)O₂^-·的清除效果都顯著，并且都隨著總黃酮濃度的升高，清除率逐漸增大。純化后總黃酮比粗提物總黃酮清除率強(qiáng)，當(dāng)總黃酮濃度為1.40?mg/mL時(shí)，兩者清除O₂^-·能力最強(qiáng)，清除率分別為77.5%和90.1%，但與維生素C相比，清除率稍弱，清除率分別相差17.1%和4.5%。

2.6.2? 玫瑰茄總黃酮對(duì)DPPH自由基的清除作用? 玫瑰茄總黃酮對(duì)DPPH自由基的清除作用結(jié)果見(jiàn)圖10。由圖10可以看出，玫瑰茄粗提物總黃酮和純化物總黃酮對(duì)DPPH自由基的清除效果都非常明顯，并且都隨著總黃酮濃度的升高，清除率逐漸增大。純化后總黃酮比粗提物總黃酮清除率強(qiáng)，當(dāng)玫瑰茄總黃酮濃度為1.4?mg/mL時(shí)，其對(duì)DPPH自由基的清除率最大，清除率分別為82.9%和87.4%，但與維生素C相比，清除率稍弱，清除率兩者分別相差12.7%和8.2%。

3? 討論

福建省玫瑰茄資源非常豐富，除做蜜餞、果醬和果酒外，從中提取分離玫瑰茄總黃酮，可實(shí)現(xiàn)玫瑰茄綜合利用，為玫瑰茄的開(kāi)發(fā)利用和深加工開(kāi)辟了一條新的途徑。

超聲波-微波協(xié)同提取是利用超聲波的空化作用和微波的熱效應(yīng)，使超聲波產(chǎn)生的振蕩作用能有效彌補(bǔ)微波傳熱、傳質(zhì)不均等缺陷，微波極佳的熱效應(yīng)能有效地彌補(bǔ)超聲波產(chǎn)熱不足的問(wèn)題^[21]。本研究在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用Box- Behnken法設(shè)計(jì)試驗(yàn)優(yōu)化玫瑰茄總黃酮的超聲波-微波協(xié)同提取工藝。結(jié)果表明，最佳工藝條件為：乙醇濃度40%、液固比50∶1?（mL/g）、提取時(shí)間20 min、微波功率250 W、超聲波功率50 W、提取2次。在此條件下，玫瑰茄總黃酮提取量為40.2?mg/g。通過(guò)對(duì)提取方法穩(wěn)定性和加標(biāo)回收率的考察，確定該提取方法測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，建立的回歸模型模擬良好。通過(guò)對(duì)比王麗巖等^[8]超聲波輔助提取玫瑰茄黃酮類(lèi)化合物（提取時(shí)間45 min，得率3.78%），得到超聲波-微波協(xié)同提取玫瑰茄總黃酮不僅縮短提取時(shí)間，而且提取效率更高。

研究表明，自由基能殺死機(jī)體紅細(xì)胞，降解蛋白質(zhì)、細(xì)胞膜和多糖化合物，可引起許多疾病如機(jī)體衰老、誘發(fā)心腦血管疾病、糖尿病、癡呆癥、腫瘤等的發(fā)生^[9]。而植物黃酮類(lèi)化合物可以抑制自由基反應(yīng)，具有抗衰老、預(yù)防心血管疾病、減少癌癥的發(fā)生。目前，食品中常用的人工合成抗氧化劑具有毒性，尋找安全、天然抗氧化劑已經(jīng)成為趨勢(shì)。植物黃酮類(lèi)化合物是很好的天然抗氧化劑，對(duì)其研究已經(jīng)引起研究人員廣泛重視。陳紅梅等^[22]研究結(jié)果表明，半枝蓮黃酮提取物具有一定抗氧化活性。張蜀艷等^[23]研究結(jié)果表明，白花蛇舌草和半枝蓮總黃酮具有較強(qiáng)的抗氧化性?？寡趸瘜?shí)驗(yàn)結(jié)果表明，玫瑰茄粗提物和純化物都具有清除O₂^-·自由基和DPPH自由基能力，其清除能力與濃度呈較明顯的量效關(guān)系，總黃酮質(zhì)量濃度越高，清除能力越強(qiáng)，但純化后總黃酮比粗提物總黃酮清除率強(qiáng)。當(dāng)其濃度達(dá)1.4 mg/mL時(shí)，對(duì)O₂^-·自由基的清除率分別為77.5%和90.1%。當(dāng)其濃度達(dá)1.4?mg/mL時(shí)，對(duì)DPPH自由基的清除為82.9%和87.4%，但都弱于維生素C?？傊S酮類(lèi)化合物作為廣泛存在于玫瑰茄的一類(lèi)活性藥用成分，是一種很好的天然抗氧化劑，在抗衰老、減少癡呆癥、癌癥、預(yù)防心血管疾病、糖尿病的發(fā)生方面具有較好的功效。

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