低溫脅迫下不同濃度ABA對(duì)4個(gè)油棕新品種幼苗生理特性的影響

劉艷菊 周麗霞 曹紅星

摘? 要：探討低溫脅迫下不同品種油棕幼苗ABA合成酶基因NCED3表達(dá)特性及不同濃度ABA對(duì)其幼苗生長(zhǎng)和生理的影響，為提高不同品種油棕幼苗抗寒能力提供理論依據(jù)。以油棕新品種Ni、C×N、B×E、D×N為材料，對(duì)其進(jìn)行低溫脅迫處理（15、10、5?℃，5?d），利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）檢測(cè)4種油棕幼苗的NCED3基因表達(dá)特性;然后，10?℃低溫脅迫下對(duì)4種油棕幼苗外施不同濃度ABA（50～300 μmol/L ABA），測(cè)定其可溶性蛋白、可溶性糖、脯氨酸含量和超氧化物歧化酶（SOD）及過氧化物酶（POD）活性等生理指標(biāo)。結(jié)果表明，低溫脅迫可觸發(fā)4種油棕幼苗ABA合成酶基因NCED3的過量表達(dá)，外施50～300 μmol/L ABA均降低幼苗質(zhì)膜透性和SOD酶活性，抑制MDA和H₂O₂含量上升，緩解低溫脅迫引起的膜脂過氧化，提高可溶性蛋白、可溶性糖含量和POD活性，進(jìn)而提高油棕幼苗抗寒性。4個(gè)品種中，B×E材料的耐寒能力較強(qiáng)。

關(guān)鍵詞：油棕;ABA;低溫脅迫中圖分類號(hào)：S31 ?????文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

Effects of Exogenous ABA on Physiology of Four New Oil PalmVarieties under Cold Stress

LIU Yanju^1，2， ZHOU Lixia^1，2， CAO Hongxing^1，2*

1. Coconut Research Institute， Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences， Wenchang， Hainan 571339， China; 2. Hainan Key Biological Laboratory of Tropical Oil Crops， Wenchang， Hainan 571339， China

Abstract： In order to provide theoretical basis for improving cold resistance of different oil palm varieties， the present experiment was conducted to investigate the expression characteristics of ABA synthase geneNCED3of different oil palm varieties under cold stress and the growth and physiology effects of different ABA concentrations on cold resistance of different oil palm varieties. The new oil palm varieties Ni， C×N， B×E and D×N were used as the materials， treated with low temperature stress （15?℃， 10?℃， 5?℃， 5?d）. The expression characteristics ofNCED3in the seedlings were detected by real-time quantitative PCR （qPCR）. Then， different concentrations of ABA （50-300 μmol/L ABA） were applied to the seedlings under 10?℃， and the physiological indexes were determined， including soluble protein content， soluble sugar content， proline content， H₂O₂content， MDA content， SOD and POD activity. Cold stress could trigger the overexpression of ABA synthase geneNCED3 in the seedlings. The application of 50-300 μmol/L ABA decreased the plasma membrane permeability and SOD activity of the seedlings， inhibited the increase of MDA and H₂O₂levels， so the membrance lipid peroxidation caused by cold stress was relieved， soluble protein， soluble sugar content and POD activity were increased， and thus improved cold resistance of the seedlings. B×E had strong cold tolerance.

Keywords： oil palm; ABA; cold stress

DOI： 10.3969/j.issn.1000-2561.2020.06.008

油棕（Elaeis guineensisJacq.）屬棕櫚科（Palmae）多年生熱帶木本油料作物，被譽(yù)為“世界油王”^[1]，在我國(guó)主要分布于海南、云南、廣東、廣西等地。油棕喜高溫，在熱量不足的環(huán)境下生長(zhǎng)緩慢，因此，低溫成為限制其產(chǎn)量提高和種植面積進(jìn)一步擴(kuò)大的主要因子之一。目前，國(guó)內(nèi)關(guān)于油棕抗寒的研究多集中在描述油棕生理生化反應(yīng)方面^[2-4]，而關(guān)于提高油棕抗寒能力的研究較少。

ABA作為植物生產(chǎn)中廣泛應(yīng)用的一種植物激素和信號(hào)分子，能促進(jìn)器官衰老和脫落、調(diào)節(jié)基因表達(dá)等作用。低溫脅迫下，ABA與植物受體蛋白的結(jié)合能力增強(qiáng)，感知和傳遞低溫脅迫信號(hào)，從而調(diào)控植物體內(nèi)各物質(zhì)的平衡和誘導(dǎo)植物的脅迫抗性^[5]。研究表明，ABA在干旱、高鹽、低溫和病蟲害等逆境脅迫反應(yīng)中起到重要作用^[6]。在逆境條件下，植物合成大量ABA，抑制氣孔開放，促進(jìn)水分吸收，降低葉片伸展率，誘導(dǎo)特異性蛋白質(zhì)合成，從而增強(qiáng)植株抵抗逆境能力^[7-8]，而9-順-環(huán)氧類胡蘿卜素雙加氧酶（NCED）是植物ABA生物合成途徑中的關(guān)鍵酶，其催化裂解反應(yīng)直接生成ABA的前體物質(zhì)。干旱脅迫可誘導(dǎo)煙草NCED3基因表達(dá)以及內(nèi)源ABA的積累^[9]，NCED3在水稻中的過量表達(dá)能提高水稻中內(nèi)源ABA的水平，從而提高植物的耐旱性^[10]。

筆者前期研究發(fā)現(xiàn)，低溫脅迫下噴施ABA可提高油棕本地種幼苗抗寒能力^[11]。但低溫脅迫下，油棕幼苗葉片ABA合成酶基因NCED3變化情況及ABA對(duì)不同品種油棕幼苗抗寒生長(zhǎng)和生理影響的研究尚未見報(bào)道，因此，測(cè)定低溫脅迫下不同品種油棕幼苗ABA合成酶基因NCED3及不同濃度ABA對(duì)不同品種油棕幼苗抗寒生長(zhǎng)和生理相關(guān)指標(biāo)能夠?yàn)樘岣哂妥胤N苗抗寒能力提供理論依據(jù)。

1 ?材料與方法

1.1 材料

中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院椰子研究所從尼日利亞引進(jìn)的資源Ni，哥斯達(dá)黎加引進(jìn)的資源C×N、B×E、D×N，共4個(gè)油棕新品種，選取幼苗苗高30～35?cm，5葉1心，生長(zhǎng)健壯，無(wú)病蟲害為試驗(yàn)材料。

1.2 方法

1.2.1 ?試驗(yàn)設(shè)置? （1）低溫脅迫對(duì)不同品種油棕葉片ABA合成酶基因NCED3的影響。人工氣候箱設(shè)4個(gè)溫度處理，分別為28?（CK）、15、10、5?℃，光照約為4000 lx，光周期為12?h，濕度70%，進(jìn)行低溫脅迫。處理5?d后取心葉外圍第2片葉進(jìn)行各指標(biāo)測(cè)定。每次處理5株苗，3次重復(fù)。

（2）低溫脅迫外施ABA對(duì)不同品種油棕生理指標(biāo)的影響。試驗(yàn)設(shè)5個(gè)處理，為0、50、100、200、300?μmol/L ABA，以常溫管理和不噴施ABA的油棕幼苗為對(duì)照（CK）。分別置于10?℃人工氣候箱中（光照約為4000 lx，光周期為12 h，濕度70%）進(jìn)行低溫脅迫。低溫脅迫期間每天分別噴施固定量的0、50、100、200、300 μmol/L ABA，均勻噴灑于葉面上。處理5?d后取心葉外圍第2片葉進(jìn)行各指標(biāo)測(cè)定。每次處理5株苗，3次重復(fù)。

1.2.2? 總RNA提取及cDNA第一鏈合成? 采用植物RNA提取試劑盒提取低溫處理后的4種油棕心葉的總RNA，參照Prime Script RT試劑盒說(shuō)明反轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一鏈。

1.2.3 ?引物設(shè)計(jì)及合成? 從NCBI搜索獲得油棕基因組序列，從The Arabidopsis Information Resource（TAIR）數(shù)據(jù)庫(kù)搜索獲得NCED3基因，并與油棕基因組序列進(jìn)行比對(duì)，找出同源基因。通過蛋白氨基酸序列比對(duì)，將存在NCED3保守結(jié)構(gòu)域的蛋白編碼基因判定為油棕NCED3基因。利用Primer 5.0設(shè)計(jì)油棕NCED3基因的qPCR引物，以Actin為內(nèi)參基因，引物序列為NCED3-f （5?-TCCAGCGAGGAACTGAACG-3?），NCED3-r（5?-CCACCAATGCCTCATCCTG-3?）。由北京六合華大基因科技股份有限公司合成。

1.2.4NCED3基因qPCR檢測(cè)? qPCR反應(yīng)體系25?μL：2×SYBR?Green Master Mix 12.5?μL，10?μmol/L的正、反向引物各1.0?μL，40?μmol/L cDNA模板2.0 μL，ddH₂O補(bǔ)足至25.0?μL。擴(kuò)增程序：94?℃預(yù)變性5 min;94?℃ 10?s，58?℃ 25?s，72?℃ 30?s（延伸階段采集信號(hào)），進(jìn)行30個(gè)循環(huán)后作溶解曲線（65～95?℃，0.1?℃/s）。每個(gè)樣品重復(fù)3次，結(jié)果采用2^?DDCT法計(jì)算基因的相對(duì)表達(dá)量。當(dāng)基因表達(dá)量上調(diào)或下調(diào)大于2倍時(shí)判定為存在表達(dá)差異。

1.2.5? 生長(zhǎng)指標(biāo)的測(cè)定? 幼苗土面到頂端新芽芽尖的距離為株高，外施ABA處理前后分別測(cè)量單株幼苗的株高，其差值即為株高生長(zhǎng)量;全株收獲洗凈后將莖葉的地上部分和根的地下部分分開，烘箱110?℃殺青15?min，80?℃烘干至恒質(zhì)量，每一單株莖葉的干質(zhì)量和根干質(zhì)量的總和即為全株干質(zhì)量，每一單株根干質(zhì)量與莖葉干質(zhì)量的比值即為根冠比。

1.2.6? 生理指標(biāo)的測(cè)定? 可溶性蛋白質(zhì)含量采用考馬斯亮藍(lán)G-250法、可溶性糖含量采用蒽酮比色法^[12]測(cè)定，過氧化氫（H₂O₂）含量采用硫酸鈦法^[13]，丙二醛（MDA）含量采用硫代巴比妥酸法^[14]，脯氨酸含量測(cè)定采用磺基水楊酸法^[15]，質(zhì)膜透性測(cè)定采用電導(dǎo)法^[16]，超氧化物歧化酶（SOD）和過氧化物酶（POD）活性測(cè)定應(yīng)用南京建成試劑盒進(jìn)行測(cè)定。

1.3數(shù)據(jù)處理

采用Excel 2010進(jìn)行試驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)和制圖，采用DPS 7.05軟件進(jìn)行方差分析。

2 ?結(jié)果與分析

2.1低溫脅迫下不同品種油棕幼苗ABA合成酶基因NCED3相對(duì)表達(dá)量

由圖1可知，10?℃以上低溫脅迫下，4種油棕幼苗ABA合成酶基因NCED3相對(duì)表達(dá)量的變化趨勢(shì)基本一致，即隨著溫度的降低其相對(duì)表達(dá)量逐漸上升。Ni、C×N和D×N都在10?℃處理達(dá)到最大值，僅B×E在5?℃處理相對(duì)表達(dá)量上升至最大值，其他品種均在5?℃處理相對(duì)表達(dá)量略下降。在10?℃處理下，Ni、C×N、B×E、D×N材料的NCED3相對(duì)表達(dá)量與CK相比分別顯著地增長(zhǎng)了158.33%、406.59%、207.29%、438.57%，10?℃脅迫處理4種油棕幼苗體內(nèi)ABA合成酶基因表達(dá)較為強(qiáng)烈。所以下一步不同濃度ABA處理的低溫脅迫溫度設(shè)定為10?℃。

2.2? ABA對(duì)低溫脅迫4個(gè)油棕品種生長(zhǎng)指標(biāo)的影響

由表1可知，在10?℃低溫脅迫下，4種油棕幼苗的株高生長(zhǎng)量和全株干質(zhì)量總體上小于對(duì)照，噴施不同濃度ABA后4種油棕幼苗的株高生長(zhǎng)量均隨著ABA濃度的提高而增長(zhǎng)，其中Ni、B×E和D×N的株高生長(zhǎng)量顯著高于0?μmol/L ABA處理的，C×N的株高生長(zhǎng)量?jī)H在100～300?μmol/L ABA處理下顯著高于0?μmol/L ABA處理的;不同濃度ABA處理對(duì)4種油棕幼苗全株干質(zhì)量的影響不同，其中C×N的全株干質(zhì)量顯著高于0?μmol/L ABA處理的，300?μmol/L ABA處理的最大，上升了6.52%，Ni、B×E和D×N的全株干質(zhì)量均在200?μmol/L ABA最大;10?℃低溫脅迫下，4種油棕幼苗的根冠比總體上顯著小于對(duì)照。Ni在100～300?μmol/L ABA處理的根冠比顯著高于0?μmol/L ABA處理。

由表1還可以看出，同一濃度ABA處理下，B×E的株高生長(zhǎng)量、全株干質(zhì)量和根冠比總體上顯著高于其他3個(gè)品種。

2.3? ABA對(duì)低溫脅迫4個(gè)品種油棕幼苗生理指標(biāo)的影響

由表2可知，與對(duì)照相比，低溫脅迫處理4種油棕的各生理指標(biāo)均受到不同程度的影響。其中，10?℃低溫脅迫，0?μmol/L ABA處理下Ni葉片的生理指標(biāo)均高于對(duì)照，葉片中的可溶性蛋白、可溶性糖及脯氨酸含量升高，進(jìn)而提高其抗寒能力;不同濃度ABA處理的Ni葉片可溶性蛋白含量顯著高于0?μmol/L ABA處理（P<0.05），其中300?μmol/L ABA處理的最大，提高了120%。與噴施0?μmol/L ABA處理相比，50?μmol/L ABA處理的Ni葉片可溶性糖含量最高，而100、200、300?μmol/L ABA處理的可溶性糖含量顯著降低，200?μmol/L ABA處理的含量最低，降低了4.78%;與噴施0?μmol/L ABA處理相比，200?μmol/L ABA處理的脯氨酸含量顯著降低，減少了50.64%;不同濃度的ABA處理的Ni質(zhì)膜透性及H₂O₂含量均低于0?μmol/L ABA處理，其中200?μmol/L ABA處理的最低，說(shuō)明200?μmol/L ABA處理的Ni較耐寒;50、100、200、300?μmol/L ABA處理的Ni MDA含量比0?μmol/L ABA處理分別下降了35.66%、18.89%、45.4%、15.39%。

10?℃低溫脅迫，0?μmol/L ABA處理下C×N葉片的生理指標(biāo)均高于對(duì)照;不同濃度ABA處理的C×N葉片可溶性蛋白含量顯著高于0?μmol/L ABA處理，其中200?μmol/L ABA處理的最大，提高了70.37%;不同濃度ABA處理的C×N葉片可溶性糖含量與0?μmol/L ABA處理相比降低，與對(duì)照處理相比含量升高;與噴施0?μmol/L ABA處理相比，300?μmol/L ABA處理的C×N脯氨酸含量顯著最低，減少了63.52%;不同濃度的ABA處理的C×N質(zhì)膜透性及H₂O₂含量均低于0?μmol/L ABA處理，其中200?μmol/L ABA處理的最低;50、100、200、300?μmol/L ABA處理的C×N MDA含量比0?μmol/L ABA處理分別下降了2.61%、26.98%、44.2%、20.88%。

不同濃度ABA處理的B×E葉片可溶性蛋白含量顯著高于0?μmol/L ABA處理的，其中200、300?μmol/L ABA處理的明顯升高，分別提高了214.81%、224.07%;不同濃度ABA處理的B×E可溶性糖含量明顯降低，與0?μmol/L ABA處理相比，其中300?μmol/L ABA降低程度最大，降低了14.98%;與噴施0?μmol/L ABA處理相比，不同濃度ABA處理的B×E脯氨酸含量呈先降低再升高的趨勢(shì);不同濃度的ABA處理的質(zhì)膜透性及H₂O₂含量均低于0?μmol/L ABA處理，其中200?μmol/L ABA處理的質(zhì)膜透性及H₂O₂含量最低，說(shuō)明200?μmol/L ABA處理的B×E較耐寒;50、100、200、300?μmol/L ABA處理的MDA含量比0?μmol/L ABA處理分別下降了2.57%、11.82%、19.12%、14.4%。

不同濃度ABA處理的D×N葉片可溶性蛋白含量顯著高于0?μmol/L ABA處理，其中200?μmol/L ABA處理的最大，提高了42.02%;與噴施0?μmol/L ABA處理相比，100、200、300?μmol/L ABA處理的D×N可溶性糖含量顯著降低，200?μmol/L ABA處理的含量最低，降低了21.68%;與噴施0?μmol/L ABA處理相比，300?μmol/L ABA處理的脯氨酸含量顯著降低，減少了76.54%;不同濃度的ABA處理的質(zhì)膜透性及H₂O₂含量均低于0?μmol/L ABA處理，其中200?μmol/L ABA處理的質(zhì)膜透性及H₂O₂含量最低;50、100、200、300?μmol/L ABA處理D×N的MDA含量比0?μmol/L ABA處理分別下降了9.92%、18.11%、26.48%、11.69%。

由表2還可以看出，在4個(gè)品種中，0?μmol/L ABA處理的B×E在可溶性蛋白含量、可溶性糖、脯氨酸含量高于或者顯著高于其他3個(gè)品種，而質(zhì)膜透性、MDA含量和H₂O₂含量顯著低于其他3個(gè)品種;50～300?μmol/L ABA處理的B×E可溶性蛋白含量顯著高于其他3個(gè)品種，50～300?μmol/L ABA處理的Ni可溶性糖含量顯著高于其他3個(gè)品種;50～200?μmol/L ABA處理的B×N質(zhì)膜透性顯著低于其他3個(gè)品種的;100～300?μmol/L ABA處理的Ni MDA均高于其他3個(gè)品種;50～ 300?μmol/L ABA處理C×N脯氨酸含量明顯低于其他3個(gè)品種，而在300?μmol/LABA處理B×E的脯氨酸含量最高，與其他3個(gè)品種相比較;50～ 200 μmol/L ABA處理Ni的H₂O₂含量顯著低于其他3個(gè)品種，300 μmol/L ABA處理B×E的H₂O₂含量最低。

2.4? ABA對(duì)低溫脅迫4個(gè)品種油棕幼苗SOD和POD活性的影響

從表3可以看出，4種油棕單獨(dú)低溫處理的SOD活性最大，低溫脅迫后各濃度ABA處理的SOD活性均呈下降趨勢(shì)。50、100、200、300?μmol/L ABA處理下SOD差異不大說(shuō)明ABA對(duì)不同品種油棕葉片SOD活性變化不明顯。從表3可以看出，0?μmol/L ABA處理的4種油棕葉片POD活性顯著低于對(duì)照，Ni、C×N、B×E和D×N與對(duì)照相比分別降低了43.32%、32.25%、36.21%和43.93%。而50?μmol/L ABA處理的POD活性與0?μmol/L ABA處理相比明顯上升，分別升高了44.17%、5.69%、31.64%和43.53%。100?μmol/L ABA處理的除了B×E外其他的POD活性與0?μmol/L ABA處理的相比變化不明顯，而B×E的POD活性與0?μmol/L?ABA處理相比顯著上升，提高了51.88%。200?μmol/L ABA處理的各品種POD活性與50?μmol/L ABA處理的相比變化不明顯。300?μmol/L ABA處理的4種油棕幼苗POD活性與0?μmol/L ABA處理相比，除C×N外其他明顯上升，其中Ni提高了61.11%。說(shuō)明噴施一定濃度ABA可提高4種油棕葉片的POD活性，進(jìn)而減少低溫脅迫產(chǎn)生H₂O₂，降低氧化傷害。

由表3還可以看出，在50～300?μmol/L ABA處理下，C×N和D×N的SOD活性均顯著高于Ni和B×E;在50～300?μmol/L ABA處理下，B×E的POD活性高于或者顯著高于其他3品種（300?μmol/L ABA處理下的Ni除外）。

3 ?討論

ABA是植物低溫逆境下的重要信號(hào)因子，低溫脅迫下，ABA與其受體蛋白的結(jié)合能力增強(qiáng)，進(jìn)而感知和傳遞低溫脅迫信號(hào)，對(duì)植物體內(nèi)各物質(zhì)的平衡調(diào)控和對(duì)脅迫抗性的誘導(dǎo)等方面起到關(guān)鍵作用^[5]。低溫脅迫下，4種油棕幼苗ABA合成酶基因NCED3相對(duì)表達(dá)量均隨著溫度的降低其相對(duì)表達(dá)量逐漸上升，在10?℃脅迫處理4種油棕幼苗體內(nèi)ABA合成酶基因均強(qiáng)烈表達(dá)，說(shuō)明低溫脅迫可觸發(fā)4種油棕幼苗ABA合成酶基因NCED3的過量表達(dá)，也說(shuō)明ABA參與油棕幼苗響應(yīng)低溫脅迫以此來(lái)維持正常的生長(zhǎng)發(fā)育。

10?℃低溫脅迫，4種油棕幼苗的株高生長(zhǎng)量、全株干質(zhì)量和根冠比均下降，說(shuō)明低溫限制了不同品種油棕幼苗的生長(zhǎng)。而外施不同濃度ABA后3個(gè)生長(zhǎng)指標(biāo)均隨著ABA濃度的提高而升高，說(shuō)明低溫脅迫下，ABA對(duì)油棕幼苗生長(zhǎng)有一定的促進(jìn)作用。

可溶性蛋白和可溶性糖是細(xì)胞內(nèi)滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)，能夠增加細(xì)胞滲透性，提高植物的耐寒能力。本研究結(jié)果表明，不同濃度ABA處理能明顯提高4種油棕體內(nèi)可溶性蛋白含量;與低溫對(duì)照相比，可溶性糖含量呈下降趨勢(shì)，但均比對(duì)照處理高，這與苗永美等^[17]對(duì)甜瓜的研究結(jié)果不一致。低溫脅迫通過氧化傷害進(jìn)而破壞細(xì)胞膜，導(dǎo)致質(zhì)膜透性增大。本研究結(jié)果表明，與低溫對(duì)照相比，不同濃度ABA處理的4種油棕的質(zhì)膜透性顯著降低，說(shuō)明外施ABA可緩解4種油棕由低溫引起的葉片質(zhì)膜透性增加;H₂O₂作為植物細(xì)胞代謝的氧化產(chǎn)物，可導(dǎo)致細(xì)胞膜發(fā)生膜脂過氧化，影響植物的正常生長(zhǎng)^[18]。本研究發(fā)現(xiàn)，外施不同濃度ABA可顯著降低4種油棕幼苗的H₂O₂含量，其中200 μmol/L ABA處理幼苗的H₂O₂含量最低，說(shuō)明外源ABA能緩解低溫脅迫對(duì)4種油棕幼苗誘發(fā)的氧化傷害。

MDA作為膜脂過氧化的終產(chǎn)物之一，它通過膜脂過氧化，損害細(xì)胞膜原有結(jié)構(gòu)和功能，從而改變其生理功能和活性，進(jìn)一步影響其他生理代謝的進(jìn)行^[19]，植物在脅迫條件下，MDA含量有升高趨勢(shì)，但是隨著脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)和脅迫程度的加深，其含量有下降趨勢(shì)^[20]。有研究表明，ABA是通過保護(hù)膜結(jié)構(gòu)，維持膜功能和誘導(dǎo)抗寒基因表達(dá)而增強(qiáng)植物抗冷性^[21]。本研究中低溫脅迫后4種油棕幼苗葉片MDA含量明顯升高，外施不同濃度ABA均可降低幼苗葉片MDA含量，其中200?μmol/L ABA處理的MDA含量均最低。

脯氨酸廣泛存在于植物體內(nèi)，主要是作為滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)、蛋白質(zhì)分子的保護(hù)物質(zhì)以及活性氧的清除劑等發(fā)揮作用，從而起到抗寒作用。研究認(rèn)為，低溫脅迫下脯氨酸的累積能力與品種的抗寒能力呈正相關(guān)^[22-23]。也有研究認(rèn)為，抗寒性弱的品種在低溫條件下，為保護(hù)體內(nèi)組織免受冷害，積累了大量的游離脯氨酸，而游離脯氨酸累積高峰出現(xiàn)晚的品種，表明其適應(yīng)性較強(qiáng)。本研究發(fā)現(xiàn)，低溫脅迫下，C×N和D×N隨外源ABA濃度增大，脯氨酸的含量明顯減少;Ni和B×E的脯氨酸含量在ABA濃度較低時(shí)也明顯減少，但在300?μmol/L ABA處理的脯氨酸含量明顯增加，分別與低溫對(duì)照相比僅降低14.03%和15.05%，說(shuō)明低溫脅迫下，外施ABA能減少4種油棕脯氨酸含量的累積。這與羅立津等^[24]對(duì)甜椒、黃宇等^[25]對(duì)雷公藤的研究結(jié)果不一致，也與劉艷菊等^[11]對(duì)油棕本地種的研究結(jié)果不一致。因此油棕在低溫下的脯氨酸累積能力與抗寒性的關(guān)系還有待進(jìn)一步試驗(yàn)驗(yàn)證。

SOD、POD在植物體內(nèi)活性氧清除過程中起重要作用^[26]。本研究發(fā)現(xiàn)，單獨(dú)低溫處理的4種油棕幼苗葉片SOD活性上升，而外施不同濃度ABA后降低了SOD活性，減少了超氧陰離子自由基向H₂O₂的轉(zhuǎn)化，這與方仁等^[27]對(duì)香蕉幼苗、劉艷菊等^[11]對(duì)油棕本地種的研究結(jié)果一致。單獨(dú)低溫脅迫的4種油棕幼苗葉片POD與CK相比明顯下降，而外施一定濃度ABA能提高4種油棕幼苗葉片POD活性，其中B×E的POD活性隨ABA濃度增加呈先增加后下降的趨勢(shì)。

同時(shí)，在4個(gè)品種中，0?μmol/L ABA處理的B×E在可溶性蛋白含量、可溶性糖、脯氨酸含量高于或者顯著高于其他3個(gè)品種，而質(zhì)膜透性、MDA含量和H₂O₂含量顯著低于其他3個(gè)品種;50～300?μmol/L ABA處理的B×E可溶性蛋白含量和POD活性顯著高于其他3個(gè)品種;說(shuō)明在4個(gè)品種中，B×E耐寒性較強(qiáng)。不同濃度ABA處理的油棕幼苗內(nèi)源ABA如何變化及ABA合成酶基因NCED3表達(dá)情況還需進(jìn)一步試驗(yàn)研究。

綜上所述，低溫脅迫可觸發(fā)4種油棕幼苗ABA合成酶基因NCED3的過量表達(dá)，并通過10?℃低溫脅迫下對(duì)其外施ABA（50～300?μmol/L ABA）發(fā)現(xiàn)，ABA通過降低幼苗質(zhì)膜透性和SOD酶活性，抑制MDA和H₂O₂含量上升，緩解低溫脅迫引起的膜脂過氧化，提高可溶性蛋白、可溶性糖含量和POD活性，進(jìn)而提高油棕幼苗抗寒性。在4個(gè)品種中，B×E耐寒性較強(qiáng)。

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