嗜水氣單胞菌感染大鯢的病理組織學觀察

林衍榮,吳 青,黎學練,沙 莎

(1.西南大學動物科學學院,重慶榮昌402460 ; 2.重慶開州水產技術推廣站,重慶開州405400)

中國大鯢(Andriasdavidianus)又稱娃娃魚，屬兩棲類(Amphibian)、有尾目(Urodela)、隱鰓鯢科(Crypt obrachidae)、大鯢屬(Andrias)，是我國特有的水陸兩棲類動物[1]。在養(yǎng)殖大鯢的細菌性疾病中，氣單胞菌屬中的嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophila)[2]、維氏氣單胞菌(Aeromonasveronii)[3]等是常見的致病菌，能引起皮膚潰瘍及敗血癥等。在養(yǎng)殖大鯢感染嗜水氣單胞菌的研究中有分離鑒定的報道，但少見系統(tǒng)的病理組織學研究。將嗜水氣單胞菌感染大鯢并進行組織病理學觀察，可以促進嗜水氣單胞菌對大鯢致病機理的研究和提供研究依據。

圖3 BPA暴露7 d各組大鼠子宮組織結構變化(H.E.染色，100×)
Fig.3 Structural changes of uterine tissue of rats in each group after 7 days of BPA exposure(H.E.staining,100×)
A～D:劑量分別為0、20、60、180 mg/(kg·bw)
A～D: Uterus structure of 0、20、60、180 mg/(kg·bw) group separately

圖4 BPA暴露7 d各組大鼠卵巢組織結構變化(H.E.染色，40×)
Fig.4 Structural changes of ovarian tissues in each group of rats after 7 days of BPA exposure(H.E.stain,40×)
A～D:劑量分別為0、20、60、180 mg/(kg·bw)
A～D: Uterus structure of 0、20、60、180 mg/(kg·bw) group separately

1 材料與方法

1.1 樣本 病理樣本：將由病死大鯢中分離得到的嗜水氣單胞菌接種于正常大鯢。采取接種后死亡的大鯢臟器，取部分組織用于分離鑒定，其余的保存在10%中性福爾馬林溶液中。(從采取的組織內鑒定出嗜水氣單胞菌，證明大鯢被感染。)

正常樣本：養(yǎng)殖大鯢的新鮮臟器(購自重慶某大鯢養(yǎng)殖場，用10%中性福爾馬林固定)。

1.2 方法 制備再改良的Harris蘇木素染液[4]及沉淀酸化伊紅-Y染液[5]。將固定好的組織制作石蠟切片，并將完成H.E.染色的正常組織切片和病理組織切片在尼康E100顯微鏡下觀察并攝影。

2 結果

正常大鯢組織的H.E.染色結果見中插彩版圖1～12。嗜水氣單胞菌感染大鯢的各組織的H.E.染色結果如下所述。

心：鏡檢心包膜脫落；部分心肌纖維腫脹、斷裂；心肌細胞空泡變性，細胞核溶解、破裂；心臟內可見大量充血、淤血(見中插彩版圖13)。

肝：鏡檢肝臟內存在大量壞死灶，壞死灶中的細胞破裂、溶解，在壞死灶周圍可見大量的炎性細胞浸潤；肝索排列紊亂，血竇間充滿大量紅細胞；肝細胞腫大，發(fā)生空泡變性、淀粉樣變性(見中插彩版圖14)；小葉間靜脈及毛細血管內淤血(見中插彩版圖15)；小葉間膽管細胞空泡變性、細胞核被擠于一側，部分小葉間膽管破裂。

脾：鏡檢可見少量壞死灶，壞死灶內細胞溶解破裂；紅髓、白髓大量減少；網狀細胞胞核溶解、碎裂(見中插彩版圖16)。

肺：鏡檢肺泡腔內充滿數量不等的紅細胞，部分囊腔內可見炎性細胞；肺動脈充血(見中插彩版圖17)；平滑肌層內可見少量紅染蛋白性物質；部分肌纖維空泡變性，有的細胞核溶解。

腎：鏡檢腎動脈充血；腎間質出血，有大量紅細胞浸潤；腎小管上皮細胞胞核溶解、破裂(見中插彩版圖18)，管腔內可見脫落的上皮細胞、紅細胞及均質紅染的蛋白樣物質；腎小球球囊囊間隙增寬；周圍的結締組織疏松水腫。

胰：鏡檢可見胰腺細胞溶解、破裂、壞死；部分區(qū)域有炎性細胞浸潤；存在散在的出血點；血管內有蛋白纖維性物質(見中插彩版圖19)。

腸：鏡檢小腸黏膜上皮細胞脫落，杯狀細胞增加，紋狀緣消失，肌層與漿膜層間隙增大(見中插彩版圖20)；黏膜層出血；黏膜層可見炎性細胞浸潤(見中插彩版圖21)。

胃：鏡檢胃黏膜脫落；黏膜上層輕微出血；外縱肌層肌細胞腫脹斷裂，顏色深染；肌肉層與漿膜層間隙增大(見中插彩版圖22)；部分區(qū)域漿膜脫落。

皮膚：鏡檢表皮脫落，皮膚結構不完整(見中插彩版圖23、圖24)，腺泡腔內充滿大量紅細胞，毛細血管內可見淤血。

3 討論

3.1 嗜水氣單胞菌對大鯢臟器組織損傷機理 嗜水氣單胞菌是氣單胞菌屬的模式種，革蘭陰性，為短小桿菌，有鞭毛，無莢膜，不形成芽孢。生長溫度為4～41 ℃，最適溫度為25～30 ℃。生長pH值為5.0～9.0，最適pH值為7.2～7.4，可引起魚類的腸炎，蛙的紅腿病，也可造成大鯢的腹水病、腐皮病[2,7-9]。因嗜水氣單胞菌能通過許多不同的調節(jié)機制改變基因表達和適應生存環(huán)境，現(xiàn)被認為是病原菌而非機會性致病菌[10]。病菌目前已知的毒力因子有：粘附素、脂多糖、胞外產物等，其中粘附素是細菌感染動物的關鍵[11]。

在自然條件下，嗜水氣單胞菌可通過粘附素粘附于中國大鯢皮膚、腸道的細胞表面，通過一定的機制、途徑侵入動物機體，定植于皮膚及腸道內的細胞[12-13]。在細菌定植期間，菌體的膜外蛋白與宿主細胞膜受體的糖殘基發(fā)生反應，從而聚集在宿主細胞上；細菌的脂多糖可使菌體改變代謝，以適應溫度、pH值、滲透壓等，同時作為細菌內毒素的主要物質又可造成組織內白細胞數目變化和彌散性血管內凝血，抑制層粘連蛋白和嵌有脂質的層粘連蛋白受體的結合，使黏膜、漿膜受損；其膜外蛋白、S層蛋白、胞外蛋白酶等可保護菌體免受吞噬及抗體、補體的作用[7,10-14]。細菌定植后大量繁殖，奪取宿主的營養(yǎng)，使大鯢機體的抵抗力進一步下降，腸道中的菌體通過肝門靜脈感染肝臟、胰臟等器官[6]，進而通過體循環(huán)感染全身各組織臟器。菌體在不同的組織細胞內定植、增殖后產生外毒素。大多數的外毒素又通過蛋白酶降解發(fā)揮活性，其中：溶血素具有溶血性與細胞毒性，能引發(fā)敗血癥與介導炎癥反應，亦可抗吞噬；氣溶素具有溶血性、腸毒性和細胞毒性，其成熟的蛋白可破壞細胞膜的滲透性使細胞死亡；尿素酶對菌體具有保護作用，還可產生氨削弱黏液的屏障功能，造成細胞變性[7,11-14]。在各種毒力因子的作用下，對大鯢機體造成損傷。

與自然條件不同，本試驗的大鯢病理樣本為腹腔注射接種嗜水氣單胞菌的感染病例。細菌直接粘附于內臟組織，定植于各器官的細胞上，進行增殖，產生毒素。各種毒素因子相互協(xié)作共同作用于大鯢機體，損傷組織臟器的黏膜、漿膜，影響白細胞數量變化，使組織細胞發(fā)生變性，血管內充血、淤血。從病理切片的觀察結果中亦可證實：胃、腸的黏膜受損；皮膚表皮脫落；腎小管上皮細胞脫落、碎裂；心臟、肝臟及腎臟的細胞發(fā)生變性，可見細胞溶解、碎裂，肝內存在大量的壞死灶；肝、腸、胰有炎性細胞浸潤，脾臟白髓減少；多數組織器官內有不同程度的充血、出血及淤血。其中對肝臟、腎臟、脾臟造成的病理損傷最為嚴重，影響大鯢的物質能量代謝，破壞內環(huán)境穩(wěn)態(tài)，降低大鯢的免疫能力，最終使多器官、系統(tǒng)功能衰竭，造成死亡。

3.2 嗜水氣單胞菌感染與大鯢養(yǎng)殖的關系 我國大鯢人工繁育成功已有40年，在大鯢的病害方面的研究也有多年的經驗累積。嗜水氣單胞菌感染中國大鯢是細菌、環(huán)境及宿主間復雜的分子作用的結果[8]。在自然環(huán)境中生長的大鯢對疾病有較強的抵抗力，是因為：野生大鯢種群密度較小；食物多樣；環(huán)境水質環(huán)境良好，溶解氧氣充足；病源少且不易傳播[15]。相比在人工養(yǎng)殖的環(huán)境中，雖然大鯢的食物來源得到保證，但是食物種類單一；隨著集約化程度的不斷提高，大鯢打斗致使皮膚破潰的機率增大；且在一定季節(jié)，養(yǎng)殖場內的水質環(huán)境與嗜水氣單胞菌的最適生長溫度、pH值相近，使得養(yǎng)殖大鯢更易染病。因此，保持大鯢養(yǎng)殖場環(huán)境良好，定期消毒檢疫，合理控制大鯢養(yǎng)殖密度，實行分級飼養(yǎng)技術，可減少大鯢疾病的發(fā)生[16]?？茖W的飼養(yǎng)與綜合管理對疫病的預防、發(fā)生及控制起著至關重要的作用。