安化黑茶減輕高脂誘導(dǎo)的ApoE-/-小鼠非酒精性脂肪肝*

張文將， 劉圓月， 易 健， 張曉芹， 侯菊花， 劉柏炎△

（1陜西中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，陜西咸陽712046；2益陽醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，湖南益陽413000；3湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南長沙410208）

隨著人們飲食結(jié)構(gòu)和生活方式的改變，非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）的發(fā)病率呈現(xiàn)上升趨勢，成年人NAFLD 患病率為17%～33%，已成為僅次于病毒性肝炎的第2大肝病，尤其在肥胖和超重的人群中最為多見，如若病情持續(xù)發(fā)展，導(dǎo)致肝細(xì)胞反復(fù)變性壞死，最終將會(huì)轉(zhuǎn)化為肝硬化甚至肝細(xì)胞癌［1-4］。

目前NAFLD 缺乏一線有效的治療藥物，替代藥物具有潛在的肝毒性和腎毒性。臨床實(shí)踐指南認(rèn)為抗氧化劑的應(yīng)用可以減輕肝臟脂肪變性和炎癥反應(yīng)［5］。茶作為一種公認(rèn)的天然抗氧化劑，為NAFLD預(yù)防和治療提供了新的思路。安化黑茶作為一種以綠茶為原料的后發(fā)酵茶，隸屬黑茶類，在發(fā)酵的過程中產(chǎn)生了茶黃素、茶紅素、茶褐素、冠突散囊菌等新的物質(zhì)，其中冠突散囊菌存在類他汀成分［6］，是具有很大優(yōu)勢的微生物［7-8］。本課題組前期實(shí)驗(yàn)證實(shí)安化黑茶可顯著降低載脂蛋白E 敲除（apolipoprotein E knockout，ApoE-/-）小鼠體重、肝脾重量和肝指數(shù)，抑制腹部、腎周部位脂肪的合成，降低血清中甘油三酯（triglyceride，TG）和低密度脂蛋白含量并抑制炎癥因子的表達(dá)［9］。由此可見，安化黑茶具有很好的調(diào)節(jié)脂類代謝紊亂的效果。內(nèi)源性脂類物質(zhì)合成增加是造成脂代謝紊亂的重要因素，與NAFLD 的發(fā)生密切相關(guān)。但安化黑茶能否抑制內(nèi)源性脂類物質(zhì)的合成，以往的研究中鮮有報(bào)道，需要通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)來探索其相關(guān)機(jī)制。于是，本研究采用ApoE-/-小鼠配合高脂飼料喂養(yǎng)的方法復(fù)制NAFLD 模型，應(yīng)用羥甲基戊二酸單酰輔酶A 還原酶（hydroxymethyl glutaryl coenzyme A reductase，HMGCR）、過氧化物酶體增殖物激活受體γ（peroxisome proliferator-activated receptorγ，PPAR-γ）和硬脂酰輔酶A脫飽和酶1（steroyl coenzyme A desaturase-1，SCD-1）3 個(gè)指標(biāo)來觀察安化黑茶對于脂類合成的相關(guān)影響，通過檢測超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）和谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）活性及丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量來觀察安化黑茶預(yù)防性給藥的抗氧化效果，通過肝臟丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransfease，ALT）和天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（aspartate transaminase，AST）檢測來判斷肝細(xì)胞受損情況，以期深入研究安化黑茶預(yù)防NAFLD 的相關(guān)機(jī)制。

材 料 和 方 法

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 8 周齡雄性SPF 級ApoE-/-小鼠50只，購于南京大學(xué)模式動(dòng)物研究所，體質(zhì)量（25±5）g，品系名ApoE Cas9-KO，品系編號T001458，遺傳背景C57BL/6，配 繁信 息 為-82bp/wt 配 B6J，基 因 型為（ApoE）KO/KO，許可證號為SCXK（蘇）2015-0001；8周齡野生型C57BL/6J 雄性小鼠10 只，許可證號為SYXK（湘）2016-0002。本次實(shí)驗(yàn)通過了湖南中醫(yī)藥大學(xué)倫理委員會(huì)審查，動(dòng)物倫理批準(zhǔn)號為20171001，實(shí)驗(yàn)單位許可證號為SYXK（湘）2013-0005。

1.2 藥物及試劑 2014年天茯茶（安化黑茶的一個(gè)品種，由湖南省白沙溪茶廠出品）；阿托伐他?。ㄝx瑞制藥有限公司，規(guī)格:10 mg，批號 110590）；MDA 測定試劑盒（TBA 法）、GSH-Px 測定試劑盒（比色法）、總SOD 測定試劑盒（WST-1 法）、ALT 測定試劑盒和AST 測定試劑盒購于南京建成生物工程研究所；TRIzol Reagent（Invitrogen）；TB GreenTMPremix Ex TaqTM（TaKaRa）；RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit（Thermo Scientific）。

1.3 飼料配方 高脂飼料（型號:H10141）由北京華阜康生物科技股份有限公司提供，生產(chǎn)許可證號為SCXK（京）2014-0008，含21%脂肪和0.15%膽固醇，具體配方:膽固醇、碳酸鈣、玉米油、無水奶油、酪蛋白、蛋氨酸、麥芽糖糊精、玉米淀粉、纖維素、礦物質(zhì)混合物和維生素混合物。

1.4 主要儀器 高速冷凍離心機(jī)（Hermle，型號:Z32HK）；分光光度計(jì)（島津，型號:UV-1700）；多功能酶標(biāo)儀（PerkinElmer，型號:Enspire）；光學(xué)顯微鏡（奧林巴斯，型號:BX-51）；核酸蛋白濃度測定儀（BioDrop）；PCR 擴(kuò)增儀（Bio-Rad）；熒光定量PCR 儀（Eppendorf）。

2 方法

2.1 藥物制備 黑茶每天飲用量按照推薦成人飲用量每天10 g，將2014 年白沙溪牌天茯茶用干凈茶刀撬下少許，稱量至所需量，隨后戴無菌手套將所撬茶葉掰成小塊，用無菌紗布包裹系緊，放入無菌燒杯中，加入實(shí)驗(yàn)室Ⅲ級水，加水量高于茶葉2～3 cm并浸泡30 min，隨后將燒杯放在實(shí)驗(yàn)電爐上進(jìn)行加熱，武火煮開后改為文火慢燉30 min 左右，冷卻后過濾，取汁另置，將黑茶殘?jiān)诱麴s水適量（與藥渣齊平）繼續(xù)煎熬，沸騰后冷卻少許，將兩次藥液合并一起小火濃縮至所需體積，2 683×g離心 15 min 后，取上清液濃縮成含生藥量，將上述藥液用無菌紗布過濾后放入消毒磨口瓶中，4℃冰箱保存?zhèn)溆?。為防止藥液變質(zhì)，每次濃縮的藥量用1 周左右。參考茶吸收試驗(yàn)中60 kg 成人每日推薦飲用量為10 g，即每人每日為166.7 mg/kg，根據(jù)人和動(dòng)物的體表面積換算小鼠所用劑量為 1.44 g·kg-1·d-1［10］。黑茶高、中、低劑量分別為 2.16、1.44 和 0.72 g·kg-1·d-1，相當(dāng)于人體推薦劑量的13.5、9 和4.5 倍。阿托伐他汀按照 10 mg·kg-1·d-1劑量進(jìn)行灌胃，實(shí)驗(yàn)前將藥片放入干凈研缽中碾碎，加入所需體積的生理鹽水溶解，現(xiàn)配現(xiàn)用。

2.2 小鼠飼養(yǎng) 實(shí)驗(yàn)小鼠飼養(yǎng)于SPF 級獨(dú)立通氣籠盒中，儀器壓差20 Pa，溫度（24.0±0.5）℃，相對濕度（50%～70%），晝夜光照節(jié)律。ApoE-/-小鼠采用高脂輻照飼料，飼料于-20℃低溫保存，短期使用于4℃保存；空白對照組小鼠予以普通生長飼料（湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物公司提供）；飼養(yǎng)密度為每籠5 只小鼠，飲水為Ⅲ級水，自由飲水；墊料按照一周3 次的頻率予以更換，定期對籠具及水瓶進(jìn)行消毒。

2.3 動(dòng)物分組、造模與給藥 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周后，隨機(jī)將50 只8 周齡ApoE-/-雄性小鼠分為模型組（10 mL/kg 生理鹽水灌胃）、阿托伐他汀組及安化黑茶高、中、低劑量組，每組10 只，每天定量給予高脂飼料喂養(yǎng)；另取10 只8 周齡的雄性C57BL/6J 小鼠作為空白對照組（10 mL/kg 生理鹽水灌胃），每天定量予以普通生長飼料喂養(yǎng)。各組小鼠每天早晨9 點(diǎn)左右給予藥物灌胃干預(yù)，連續(xù)給藥17周［11-13］。

2.4 標(biāo)本收集與處理 各組小鼠于灌胃給藥第17周末禁食不禁水12 h，腹腔麻醉后摘除眼球取血，收集于 1.5 mL EP 管中，室溫靜止 2 h 后 12 000×g、4℃離心15 min，移液器收集血清后分裝于EP 管中，保存于-80℃待測。采用頸椎脫臼處死小鼠，遂將小鼠放置于冰上操作取材，腹腔打開暴露肝臟，用眼科剪迅速剪掉整個(gè)肝臟，放在袖珍型精密天平上稱量肝臟重量，預(yù)冷生理鹽水漂洗后剪取同一部位部分肝臟小葉放入4%多聚甲醛中用于HE 染色；稱取100 mg 左右肝臟組織放入無RNA 酶的凍存管中，加入1 ml 預(yù)冷TRIzol，迅速放入液氮中進(jìn)行速凍，隨后將標(biāo)本移至-80℃冰箱中備RT-qPCR 檢測；部分肝臟組織放入無RNA 酶的凍存管中液氮速凍后移至-80℃冰箱保存以備肝功能和氧化應(yīng)激指標(biāo)的檢測。

2.5 氧化應(yīng)激指標(biāo)的測定 從-80℃冰箱中取小鼠肝組織若干，在冰生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙擦干，放入無菌離心管中，用消毒眼科剪盡量將肝組織剪碎，加9 倍冰生理鹽水于自動(dòng)勻漿機(jī)冰上操作制成10%肝勻漿，4℃、670×g離心15 min，取上清液加生理鹽水稀釋成適宜濃度備測，測定肝臟組織中SOD 和GSH-Px 活性及MDA 含量，預(yù)實(shí)驗(yàn)得出最佳抑制率后進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)；將所得數(shù)值代入公式中計(jì)算并進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

2.6 肝功能檢測 取10%肝勻漿用BCA 試劑盒測定各組樣本的蛋白濃度，按照說明書步驟進(jìn)行操作，計(jì)算出肝組織中ALT和AST的活性。

2.7 病理形態(tài)學(xué)檢測及評估 多聚甲醛固定肝臟組織后轉(zhuǎn)移4℃冰箱中保存，48 h 后常規(guī)脫水包埋處理，4 μm 厚度切片染色，顯微鏡下觀察肝臟形態(tài)，拍照對比。按照《NASH 臨床研究網(wǎng)病理工作指南》對NAFLD 活動(dòng)度積分（NAFLD activity score，NAS）進(jìn)行半定量分析［14］。

2.8 RT-qPCR檢測

2.8.1 引物設(shè)計(jì) 從NCBI 網(wǎng)站搜索小鼠以下基因mRNA 序列，采用Primer 6.0 軟件設(shè)計(jì)引物，引物序列信息見表1。

2.8.2 組織總RNA 的提取 采用TRIzol 法來提取小鼠肝臟組織中的總RNA。用液氮低溫研磨法對肝臟組織進(jìn)行研磨，用無RNA 酶200 μL 的吸頭收集研缽中的肝臟組織粉末，轉(zhuǎn)移至1.5 mL 的無RNA 酶的EP管中，加入1 mL TRIzol室溫放置10 min。按照Invitrogen 所提供的說明書步驟提取肝組織中的總RNA。用移液器抽取2 μL 的RNA 提取液采用核酸蛋白濃度測定儀對濃度進(jìn)行檢測，并記錄吸光度比值（A260/A280），從而判斷 RNA 提取的質(zhì)量（A260/A280在1.8～2.0之間說明RNA的質(zhì)量較好）。

2.8.3 RNA 逆轉(zhuǎn)錄為cDNA 具體步驟按照Ther-mo Scientific 所提供的實(shí)驗(yàn)操作步驟進(jìn)行。總反應(yīng)體系20 μL。逆轉(zhuǎn)錄第1步，RNA 變性:模板RNA（總RNA）4 μg，Oligo（dT）18引物 1 μL，加 RNase-free water 配成 12 μL 體系，于 65℃孵育 5 min 進(jìn)行變性，完畢后迅速于冰上冷卻。將RNA 逆轉(zhuǎn)錄為cDNA 第1鏈:5× Reaction Buffer 4 μL、RiboLock RNase Inhibitor（20 U/μL）1 μL、10 mmol/L dNTP Mix 2 μL 和 RevertAid M-MuLV逆轉(zhuǎn)錄酶（200 U/μL）1 μL瞬時(shí)渦旋混勻，置于冰盒中備用，再放入提前預(yù)熱的PCR 儀中完成以下程序的設(shè)置:42℃60 min→70℃ 5 min→4℃，完成RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA第1鏈。

表1 RT-qPCR引物序列Table 1.The sequences of the primers for RT-qPCR

2.8.4 RT-qPCR 擴(kuò)增 根據(jù)上海生工所提供的相應(yīng)引物的Tm值設(shè)置56、58、60和62℃4個(gè)退火溫度梯度，根據(jù)溶解曲線確定最佳的退火溫度，然后進(jìn)行正式的RT-qPCR 擴(kuò)增，具體反應(yīng)條件為:95℃2 min；95℃ 15 s，60℃ 1 min，循環(huán)40次。

2.8.5 結(jié)果分析方法 內(nèi)參照選用β-actin，采用2-ΔΔCt法進(jìn)行相對定量，ΔCt=基因 Ct-內(nèi)參照 Ct，ΔΔCt=實(shí)驗(yàn)組Ct-對照組Ct。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

運(yùn)用SPSS 18.0 軟件進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）表示。多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD 法。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 肝臟鏡下觀圖片

正常組小鼠肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細(xì)胞大小一致，細(xì)胞核居中，胞漿紅染，見圖1A、G；模型組小鼠肝細(xì)胞體積變大，大小不一，細(xì)胞核偏位，胞漿呈現(xiàn)疏松化和空泡脂肪變性現(xiàn)象，見圖1B、H；安化黑茶高劑量組小鼠肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞核居中，胞漿呈現(xiàn)紅染，部分區(qū)域出現(xiàn)少量空泡變性現(xiàn)象，見圖1C、I；中劑量組小鼠肝臟輪廓清晰，肝細(xì)胞大小一致，細(xì)胞核居中，胞漿紅染，個(gè)別區(qū)域出現(xiàn)少量的空泡變性現(xiàn)象，見圖1D、J；低劑量組小鼠肝小葉結(jié)構(gòu)基本完整，肝細(xì)胞大小基本一致，肝細(xì)胞空泡變性和胞漿疏松化的現(xiàn)象稍多，見圖E、K；阿托伐他汀組小鼠肝細(xì)胞大小不等，可見胞漿疏松化和大小不等的空泡脂肪變性現(xiàn)象，見圖1F、L。各組NAS見表2。

Figure 1.The microscopic changes of hepatic tissues in mice（HE staining）.A～F:scale bar=200 μm；G～L:scale bar=50 μm.A，G:control group；B，H:model group；C，I:high-dose Anhua dark tea group；D，J:mediumdose Anhua dark tea group；E，K:low-dose Anhua dark tea group；F，L:atorvastatin group.圖1 小鼠肝組織鏡下觀變化

表2 NAFLD活動(dòng)度積分在各組間的比較Table 2.Comparison of NAFLD activity scores（NAS）among the 6 groups（Mean±SD. n=10）

2 肝臟肉眼觀圖片

正常對照組小鼠肝臟體積偏小，顏色暗紅色，見圖2A；模型組小鼠肝臟體積偏大，黃色油膩感嚴(yán)重，見圖2B；安化黑茶高劑量組小鼠體積增大，肝臟呈現(xiàn)暗紅色，油膩感較輕，見圖2C；中劑量組小鼠肝臟暗紅色，油膩感較輕，見圖2D；低劑量組肝臟體積增大，呈現(xiàn)黃色油膩感，見圖2E；阿托伐他汀組小鼠組肝臟體積增大，呈現(xiàn)黃色油膩感，見圖2F。

Figure 2.The visual changes of hepatic tissues in mice of different groups.A:control group；B:model group；C:high-dose Anhua dark tea group；D:mediumdose Anhua dark tea group；E:low-dose Anhua dark tea group；F:atorvastatin group.圖2 各組小鼠肝組織肉眼觀變化

3 肝臟轉(zhuǎn)氨酶水平

與空白組相比，模型組小鼠肝臟ALT 和AST 水平升高（P＜0.05）；與模型組相比，安化黑茶高、中、低劑量組和阿托伐他汀組ALT 和AST 水平降低（P＜0.05），其中中劑量組ALT 水平最低（P＜0.05）；阿托伐他汀組AST水平低于中劑量組（P＜0.05），中、低劑量組AST 水平無顯著差異（P＞0.05），高劑量組AST水平低于中劑量組（P＜0.05），見表3。

表3 小鼠肝組織中ALT和AST水平Table 3.The levels of hepatic ALT and AST in mice［U/（g protein）.Mean±SD. n=10］

4 氧化應(yīng)激水平

與空白組相比，模型組小鼠肝臟SOD 和GSH-Px活性下降，MDA 含量升高（P＜0.05）；與模型組相比，安化黑茶高、中、低劑量組SOD 和GSH-Px活性升高，MDA 含量下降（P＜0.05）；與阿托伐他汀組相比，高劑量組SOD活性升高（P＜0.05），低劑量組GSH-Px活性稍低（P＜0.05），各劑量組其余指標(biāo)與他汀組相比無顯著差異（P＞0.05）；與中劑量組相比，低劑量組SOD 和GSH-Px 活性稍低，MDA 含量稍高（P＜0.05），高劑量組 SOD 活性升高（P＜0.05），GSH-Px 活性和MDA含量無顯著差異（P＞0.05），見表4。

表4 小鼠肝臟氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)Table 4.The levels of hepatic oxidative stress indicators in mice（Mean±SD. n=10）

5 脂類物質(zhì)合成相關(guān)指標(biāo)

5.1 HMGCR mRNA 表達(dá) 與模型組相比，安化黑茶不同劑量組和阿托伐他汀組小鼠肝臟HMGCR 的mRNA 表達(dá)都顯著降低（P＜0.05），其中他汀組和中劑量組最低（P＜0.05）；中劑量組與他汀組相比無顯著差異（P＞0.05），高、低劑量組高于中劑量組（P＜0.05），見表5。

5.2 SCD-1 mRNA 表達(dá) 與模型組相比，安化黑茶不同劑量組小鼠肝臟SCD-1 的mRNA 表達(dá)都顯著降低（P＜0.05），其中高、中劑量組最低（P＜0.05）；阿托伐他汀組表達(dá)高于中劑量組（P＜0.05），低劑量組高于中劑量組（P＜0.05），高劑量組與中劑量組相比無顯著差異（P＞0.05），見表5。

5.3 PPAR-γ 的 mRNA 表達(dá) 與模型組相比，安化黑茶不同劑量組和阿托伐他汀組小鼠肝臟PPAR-γ mRNA 表達(dá)降低（P＜0.05）；高、中劑量組低于他汀組（P＜0.05），各劑量組之間無顯著差異（P＞0.05），見表5。

表5 各組小鼠肝臟HMGCR、SCD-1和PPAR-γ的mRNA表達(dá)Table 5.The mRNA levels of hepatic HMGCR，SCD-1 and PPAR-γ in mice（Mean±SD. n=10）

討 論

減少外源性脂類物質(zhì)的攝入、抑制內(nèi)源性脂類物質(zhì)的過度合成、促進(jìn)脂類物質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)和分解對于防止脂類物質(zhì)在肝臟的沉積起著重要作用。從病理形態(tài)學(xué)來看，ApoE-/-小鼠預(yù)防性灌胃給藥可很好地減輕肝臟脂變程度，我們前期研究已證實(shí)安化黑茶灌胃組小鼠血清中TG 含量低于模型組。肝臟中沉積的脂質(zhì)主要是TG，內(nèi)源性酯類物質(zhì)合成的增加是誘發(fā)NAFLD 的關(guān)鍵因素。SCD-1是脂肪酸代謝過程中的關(guān)鍵限速酶，廣泛存在于各種組織中，其中以脂肪組織和肝組織中居多，在脂肪酸的合成代謝過程中發(fā)揮著重要的作用［15-16］。本研究發(fā)現(xiàn)安化黑茶組小鼠肝臟SCD-1 的mRNA 表達(dá)顯著低于模型組，有可能是由于NAFLD 形成過程中伴隨著胰島素抵抗的現(xiàn)象［17-18］，減弱了胰島素對脂蛋白脂酶（lipoprotein lipase，LPL）的激活作用，而LPL的減少導(dǎo)致TG無法被水解，引起高脂血癥的發(fā)生，而過多脂類物質(zhì)的產(chǎn)生促使肝臟SCD-1 表達(dá)增加，加速了脂肪酸的合成，從而導(dǎo)致NAFLD 的發(fā)生。而安化黑茶可能通過減輕胰島素抵抗而增強(qiáng)了胰島素對于LPL 的激活作用，使TG 被水解，血脂含量有所降低，而脂類物質(zhì)的減少也抑制了SCD-1表達(dá)，使肝臟脂變程度減輕。

HMGCR 作為與膽固醇代謝密切相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子及其代謝酶，可促進(jìn)膽固醇的合成，從而誘發(fā)脂肪肝的形成。本研究顯示，各用藥組小鼠肝臟HMGCR的mRNA 表達(dá)顯著低于模型組，其中他汀組和黑茶中劑量組最低。他汀類藥物為HMGCR抑制劑，因此這一結(jié)果說明安化黑茶中可能有類他汀的成分，安化黑茶可以通過下調(diào)HMGCR 表達(dá)而起到抑制膽固醇合成的效果。

PPAR-γ 與肥胖、糖尿病、胰島素抵抗及其代謝綜合癥等疾病的發(fā)生和轉(zhuǎn)歸密切相關(guān)［19］。PPAR-γ在動(dòng)物的脂肪組織中表達(dá)最為豐富［20-21］，可以促使游離脂肪酸在脂肪細(xì)胞的沉積，因此PPAR-γ是生脂過程的標(biāo)志性因子。當(dāng)肝細(xì)胞由于脂類沉積誘發(fā)脂肪變性后，肝臟中的PPAR-γ 表達(dá)便會(huì)顯著升高，大量PPAR-γ 表達(dá)促使脂質(zhì)合成基因的激活，導(dǎo)致肝臟更多脂質(zhì)的沉積［22-23］。若能夠去除肝細(xì)胞內(nèi)或者巨噬細(xì)胞內(nèi)的PPAR-γ，則可以有效避免小鼠肝臟脂肪變性［24］。本研究的結(jié)果和上述文獻(xiàn)一致，由此我們推測可能是由于高脂飲食促使肝臟PPAR-γ 出現(xiàn)高表達(dá)，過多脂類物質(zhì)的攝入導(dǎo)致外周游離脂肪酸含量的增加，從而激活PPAR-γ信號并誘導(dǎo)其下游脂肪酸轉(zhuǎn)位酶（fatty acid translocase，F(xiàn)AT）的表達(dá)，F(xiàn)AT促使肝細(xì)胞攝取更多的脂肪酸，過多脂肪酸攝入超過了肝臟自身氧化的能力，最終誘導(dǎo)了肝細(xì)胞脂肪變性的發(fā)生。安化黑茶預(yù)防性給藥可以通過下調(diào)肝臟PPAR-γ 的mRNA 表達(dá)而減少脂類物質(zhì)在肝臟沉積，從而達(dá)到很好的預(yù)防非酒精性脂肪肝的效果。

肝細(xì)胞的氧化損傷是誘發(fā)NAFLD 的重要因素之一。SOD 活性的高低間接反映了機(jī)體清除氧自由基的能力，過量的MDA 具有潛在的細(xì)胞毒性，是評價(jià)細(xì)胞損傷程度的重要指標(biāo)，GSH-Px 可維持細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的完整，因此可通過檢測SOD、MDA 和GSH-Px這3 個(gè)指標(biāo)來推測機(jī)體抗氧化的情況［25］。本研究結(jié)果顯示，模型組小鼠肝臟中SOD 和GSH-Px 活性降低，MDA 含量升高，反映了在NAFLD 模型小鼠確實(shí)存在氧化損傷狀況；安化黑茶不同劑量組預(yù)防性給藥均可以提高肝臟SOD 和GSH-Px 活性，降低MDA含量及ALT 和AST 活性，說明安化黑茶預(yù)防性給藥可以起到抗氧化作用，從而減少對肝細(xì)胞的氧化損傷。

綜上所述，安化黑茶可能通過抑制脂類物質(zhì)的合成、減少肝臟的氧化損傷來達(dá)到防治NAFLD 的效果。但是脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)和分解異常也與NAFLD 的發(fā)生密切相關(guān)，我們在后續(xù)實(shí)驗(yàn)過程中將檢測影響脂類物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)和分解的相關(guān)指標(biāo)并進(jìn)行深入分析。