道孚縣新型冠狀病毒肺炎患者口咽和糞便標本核酸檢測結果分析

王有為，楊陽，葉萍，茍瑪巴姆，肯布，周瑩，章曉紅b(.四川省醫(yī)學科學院·四川省人民醫(yī)院a. 檢驗科，b. 急診內(nèi)科，成都6007；.甘孜藏族自治州疾病預防控制中心，四川康定66099；.甘孜藏族自治州道孚縣人民醫(yī)院檢驗科，四川道孚6600；.甘孜藏族自治州爐霍縣疾病預防控制中心，四川爐霍66500)

2019年12月以來，我國湖北省及以外地區(qū)相繼發(fā)生新型冠狀病毒肺炎(COVID-19)疫情。由于在患者糞便中可分離到新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)，應注意糞便造成環(huán)境污染或氣溶膠/接觸傳播[1]。本研究對四川省道孚縣2020年2月報告的COVID-19確診病例SARS-CoV-2核酸檢測結果進行分析，以期對COVID-19防控和隔離管理提供參考。

1 資料和方法

1.1一般資料 收集2020年2月四川省道孚縣人民醫(yī)院收治COVID-19確診病例67例，其中男性36例、女性31例；輕型患者31例、普通型患者35例、重型患者1例。診斷標準依據(jù)國家衛(wèi)生健康委員會發(fā)布的《新型冠狀病毒肺炎診療方案(試行第五版)》中湖北以外省份標準[2]以及《新型冠狀病毒肺炎診療方案(試行第六版)》[3]。

1.2標本收集 確診病例入院當天及在院期間間隔2～3 d采集口咽拭子、出院后集中隔離醫(yī)學觀察期間每周采集口咽拭子、糞便標本，于8 h內(nèi)送至SARS-CoV-2核酸檢測實驗室，24 h內(nèi)完成檢測。

1.3主要儀器和試劑 NatchS全自動核酸提取儀、SLAN-96P Real-Time PCR System(湖南圣湘公司),CFX96熒光定量PCR儀(美國Bio-Rad公司)。新型冠狀病毒2019-nCoV核酸檢測試劑盒(熒光PCR法，批號：2020004，湖南圣湘公司)，QIAamp Viral RNA Mini Kit(50)(批號：166012740,QIAGEN公司)。

1.4糞便和口咽拭子核酸檢測 由于道孚縣不具備核酸檢測能力，樣本送至鄰近2個實驗室檢測。收到標本后用75%乙醇消毒外包裝及容器，去除外包裝。糞便標本56 ℃滅活1 h、口咽拭子56 ℃滅活30 min。用一次性接種環(huán)挑取約0.2 g成型糞便或移液器吸取200 μL稀便加入裝有2 mL TRIZOL的15 mL離心管中，密封后混勻、靜置10 min，取上清液用QIAamp Viral RNA Mini Kit(50)試劑盒純化RNA核酸。用新型冠狀病毒2019-nCoV核酸檢測試劑盒、NatchS全自動核酸提取儀提取口咽拭子標本中病毒RNA核酸。純化和提取后核酸用新型冠狀病毒2019-nCoV核酸檢測試劑盒，按照說明書進行檢測和陽性判斷。通過開展室內(nèi)質(zhì)控和隨機插入陰、陽性對照開展質(zhì)量控制。

1.5統(tǒng)計學分析 用SPSS 23.0統(tǒng)計學軟件進行。入院日至口咽拭子SARS-CoV-2核酸檢測持續(xù)呈陰性的第一次采樣日期間為口咽拭子核酸轉陰天數(shù)。分類資料分析采用卡方檢驗，正態(tài)分布的定量資料的均數(shù)比較采用兩樣本t檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1一般資料 輕型、普通型病例兩組間性別分布差異無統(tǒng)計學意義(χ2=0.203，P=0.652)，年齡差異有統(tǒng)計學意義(t=-3.570，P=0.001)，見表1。重癥患者1例，女，77歲，伴有高血壓、肺結核，未納入統(tǒng)計。

表1 67例確診病例性別、年齡分布

2.2平均住院天數(shù) 67例患者最短住院9 d，最長住院30 d，平均住院(16.0±4.5)d。輕型、普通型病例平均住院天數(shù)分別為(15.7±4.1)d和(16.2±4.8)d，兩組間差異無統(tǒng)計學意義(P=0.260)。1例重癥患者住院天數(shù)為15 d。

2.3口咽拭子核酸轉陰天數(shù) 67例患者入院后核酸轉陰天數(shù)最短1 d，最長29 d，轉陰平均天數(shù)為(7.4±6.2)d。輕型、普通型患者核酸轉陰天數(shù)分別為(6.7±5.9)d和(8.1±6.4)d，兩組間差異無統(tǒng)計學意義(P=0.881)。重癥患者入院后第一天起口咽拭子核酸檢測一直為陰性。所有患者出院后集中隔離醫(yī)學觀察期間咽拭子SARS-CoV-2核酸檢測為陰性。

2.4口咽拭子核酸陽性天數(shù)統(tǒng)計 67例患者中有29例患者在入院后最短1 d、最長18 d，口咽拭子樣本檢測到SARA-CoV-2 ORF1ab基因和N基因；有3例患者入院后連續(xù)2次采樣，SARA-CoV-2均僅N基因呈陽性。入院后核酸復查陽性率為47.8%(32/67)。

2.5糞便標本SARA-CoV-2核酸檢測 患者出院后均實行集中隔離點隔離醫(yī)學觀察2～4周[4]。由于資料有限，僅報道隔離2周內(nèi)糞便標本SARS-CoV-2核酸檢測結果。67例糞便標本中有16例核酸檢測呈陽性，陽性率為23.9%(16/67)，其中有2例第1周檢出SARA-CoV-2 N基因，在第2周檢測到SARA-CoV-2 ORF1ab基因和N基因；有6例持續(xù)2周檢測到ORF1ab基因和N基因；有5例患者在住院期間口咽拭子未檢測出SARA-CoV-2 ORF1ab基因或N基因。

3 討論

疫情發(fā)生后，截至2月28日無新增病例。本文作者有幸參與道孚縣新型冠狀病毒肺炎疫情防控工作。文中病例均為密切接觸發(fā)病或聚集性發(fā)病病例，為該地開展流行病學調(diào)查期間采集口咽拭子進行SARS-CoV-2核酸檢測呈陽性時發(fā)現(xiàn)，尚不明確具體接觸或感染時間。病例以臨床癥狀輕微為主，重型病例數(shù)量有限，未作統(tǒng)計分析，同時，糞便核酸陽性者未隨訪至其轉陰是本文的缺陷。

輕型、普通型病例兩組間性別、年齡的比較結果與董玉穎等[5]報道一致?；颊呷朐汉螅捶桨钢委?，有35例(52.2%)患者在入院后多次采集口咽拭子均未檢出SARS-CoV-2核酸，可能與患者呼吸道癥狀輕微、無痰或主動咯痰能力弱等原因導致以口咽拭子為主的樣本核酸檢測假陰性有關。李彩玉等[6]報道不同采集時機、采集部位和樣本類型等是造成核酸檢測“假陰性”的重要因素。其中，口咽拭子陽性率最低，與該部位病毒含量、采樣操作時刺激上呼吸道給患者帶來不適從而降低患者依從性等有關。

輕型、普通型患者口咽拭子核酸陽性天數(shù)分別為(8.3±5.4)d和(7.6±4.9)d，提示該類型患者入院后1～2周仍有病毒排出并存在呼吸道傳播可能。在臨床癥狀消失、肺部CT影像學炎癥滲出性改變明顯改善時應加強病毒核酸的篩查，符合標準才能出院。文中病例在住院(16.0±4.5)d后出院，無呼吸道樣本SARS-CoV-2核酸“復陽”的現(xiàn)象。

67例患者出院后有16例患者的糞便標本核酸檢測呈陽性，其中5例住院期間口咽拭子未檢出病毒核酸，提示SARS-CoV-2可在消化道復制并通過糞便排出，且持續(xù)時間長；SARA-CoV-2 N基因單陽性不能排除病毒復制的可能性；糞便標本核酸檢測可能是呼吸道樣本核酸檢測陰性時的補充。COVID-19患者出院后解除隔離標準應考慮將糞便標本SARS-CoV-2核酸檢測呈陰性納入，且在隔離期間做好出院患者排泄物的消殺。