住院兒童常見呼吸道病毒抗原檢出情況分析

羅 麗，龍博文，陳小金，劉 洪

目前在全球范圍內(nèi)，急性呼吸道感染(acute respiratory infections，ARI)因其高致病率和病死率仍然是公共衛(wèi)生威脅，尤其是在發(fā)展中國家[1,2]。在兒童，ARI是5歲以下兒童最常見的死亡原因[3,4]?，F(xiàn)已確定病毒是引起不同人群ARI的主要原因[5-7]。常見的引起ARI的病毒有：呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus，RSV)、 腺病毒(adenovirus，ADV)、甲型流感病毒(influenza virus A，IFVA)、乙型流感病毒(influenza virus B，IFVB)以及副流感病毒Ⅰ型(parainfluenza virus Ⅰ,PIVⅠ)、副流感病毒Ⅱ型(parainfluenza virus Ⅱ,PIVⅡ)、副流感病毒Ⅲ型(parainfluenza virus Ⅲ,PIVⅢ)等。本研究旨在了解ARI的流行病學特征，為防止濫用抗生素及防治ARI提供參考。

1 對象與方法

1.1 對象 選取2018-07至2019-06在萍鄉(xiāng)市婦幼保健院住院年齡<15歲的急性呼吸道感染患兒，共7656例。其中，男4585例，女3071例，男女比例：1.49∶1。<1歲 2571例，1～<3歲2745例，3～<6歲 1743例，≥6歲597例。年齡最小1個月，最大14歲，平均年齡：2.08歲。ARI的診斷標準參照《諸福棠實用兒科學》第8版。納入標準： (1)病程<7 d；(2)符合急性呼吸道感染診斷；(3)年齡<15歲；(4)每個患兒不重復入組。排除標準：病例資料不全者。

1.2 方法 采用直接免疫熒光法檢測患兒鼻咽分泌物中7種常見呼吸道病毒的抗原。采集鼻咽拭子標本，專用植絨鼻咽拭子從患兒鼻腔插入至鼻咽部約5 cm后輕輕轉(zhuǎn)動拭子2～3圈取樣，抽出鼻咽拭子，放入含2 ml生理鹽水的塑料試管中(生理鹽水沒過拭子)，盡快送檢，樣本收集完成至檢驗≤24 h。呼吸道病毒抗原檢測試劑盒為美國 Diagnostic Hybrids公司產(chǎn)品，細胞涂片制備均嚴格按照呼吸道病毒抗原檢測試劑盒說明進行相關(guān)操作。200倍熒光顯微鏡(OLYMPUS CX22型顯微鏡購自日本 OLYMPUS公司)下每視野找到≥2個蘋果綠色熒光細胞即為陽性，否則為陰性。陰性細胞被伊文斯藍染成紅色。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用 SPSS19.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析,計數(shù)資料用百分率表示,組間計數(shù)資料率的比較采用χ2檢驗,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 呼吸道7種病毒感染的總體檢出情況 本組7656例標本中，檢出至少一種病毒的1958例，總陽性檢出率為25.57%，其中，男1186例，女772例，男女比例：1.49∶1。檢出率排名前三的病毒為：RSV(13.39%),ADV(4.79%)，IFVA(3.24%)。其他病毒檢出情況：PIVⅢ(2.64%)，IFVB(0.99%)，PIVⅠ(0.50%)，PIVⅡ(0.05%)。

2.2 不同年齡組呼吸道病毒感染檢出情況 各年齡組患兒病毒檢出情況：<1歲組30.11 %(774/2571)，1～<3歲組25.90 %(711/2745)，3～<6歲 21.80%(380/1743)，≥6歲16.08 %(96/597)。各年齡組病毒陽性檢出率差異無統(tǒng)計學意義(表1)。

表1 不同年齡組患兒病毒檢出率比較 (n；%)

2.3 不同性別患兒7種病毒檢出情況 1958例陽性樣本中，男1186例，女772例，男性7種病毒陽性檢出率為25.87%,女性7種病毒陽性檢出率為25.20%，不同性別病毒陽性檢出率差異無統(tǒng)計學意義(表2)。

表2 不同性別患兒病毒檢出率 (n；%)

2.4 不同月份常見呼吸道病毒感染的檢出情況 7種病毒在全年不同月份中的檢測結(jié)果表明部分呼吸道病毒感染存在明顯季節(jié)流行特征(圖1)。RSV的感染主要集中在11月至第二年的2月，IFVA的感染集中在1-3月，ADV的感染集中在4-6月，IFVB感染高峰集中在5、6月，其他病毒沒有明顯的季節(jié)流行特點，呈全年散發(fā)。

圖1 患兒不同月份7種呼吸道病毒檢出情況

2.5 7種呼吸道病毒合并感染檢出情況 1958例陽性樣本中僅檢出12例2種病毒協(xié)同感染，檢出率為0.16%。RSV和ADV協(xié)同感染有7例，PIVⅢ和ADV協(xié)同感染2例，IFVA和RSV協(xié)同感染1例，PIVⅠ和RSV感染1例。無3種以上病毒協(xié)同感染病例。

3 討 論

本研究中7656例急性呼吸道感染住院患兒7種常見呼吸道病毒總體檢出率為25.57%，這與國內(nèi)張莉、馬琳等[8]的報道(34.47%)及在匹茲堡[9](59.7%)和巴西東南部[10](54.3%)的研究中報告的發(fā)病率不一致，分析原因可能為：(1)研究采用的檢測方法為直接免疫熒光法，該方法應(yīng)盡量使拭子毛刷獲取多一點上皮細胞，這樣能最大限度獲取感染病毒的組織樣本，而本研究所有患兒鼻咽拭子的采集非同一操作者，標本的取樣非同質(zhì)化可能影響了病毒檢出率，今后可在標本采集上通過加強同質(zhì)化培訓及雙人雙份標本采集來加強標本質(zhì)量控制；(2)研究對象僅為住院患兒，未涵蓋門診呼吸道感染患兒，可能也是檢出率低于上述研究的原因；(3)檢測的病原種類有限，未覆蓋鼻病毒、副流感病毒Ⅳ、腸道病毒、冠狀病毒等常見引起呼吸道感染的病毒，在今后的研究中可考慮覆蓋病毒種類更廣一些。此外對于病毒檢測陰性的標本今后的研究中可進一步應(yīng)用核酸檢測的方法進行再次檢測，以提高病毒檢出率。

在所有檢測的病毒中RSV檢出率最高，尤其在<1歲組(21.51%),這與國內(nèi)外的報道一致[11,12]，說明目前住院患兒中RSV是ARI中最常見的病毒。2015年，Shi等[13]報告了全球每年估計的RSV負擔為3310萬(占所有急性下呼吸道感染(ALRI)費用發(fā)作生的22%)，導致320萬人次住院和5.96萬5歲以下兒童死亡。其次檢出率較高的病毒為腺病毒(4.79%)、甲型流感病毒(3.24%)和副流感病毒Ⅲ(2.64%)，與段亞麗等[14]的多中心研究結(jié)果一致, 說明腺病毒近年在我國發(fā)病率呈現(xiàn)上升趨勢，AdV是引起兒童ARI的重要病原之一。

通過全年不同月份病毒檢出情況分析，發(fā)現(xiàn)部分病毒感染存在明顯季節(jié)流行特征，呼吸道病毒檢出率前三位的病毒的流行特征是：RSV的感染主要集中在11月至次年的2月，ADV的感染集中在4-6月份，IFVA的感染集中在1-3月，IFVB感染高峰集中在5-6月。

本研究中2種病毒協(xié)同感染的檢出率不高(0.16%)，這與謝正德等[15](35.58%)及余春梅等[16](26.7%)報道的檢出率不一致，考慮可能與病例的選擇標準、地理、氣候以及檢測病原體種類、實驗室檢測方法有關(guān)。

病毒性呼吸道疾病的實驗室診斷方法中，抗原檢測直接免疫熒光法需時短，標本在送到實驗室2 h內(nèi)就可得出結(jié)果，在普通實驗室就可開展，與其他方法相比，具有快速、簡便、特異性及敏感性高的特點[17]，適合基層醫(yī)療機構(gòu)選用。

急性呼吸道感染具有高發(fā)病率及死亡率，病毒感染是ARI的主要病原，ARI臨床表現(xiàn)如發(fā)熱、咽痛、咳嗽、疲勞等缺乏特異性，而且目前可用于預防呼吸道病毒感染的疫苗很少，因此,了解急性呼吸道感染的病原學流行特征，對今后有效預防和控制病毒流行具有重要意義；選擇快速、靈敏的實驗室檢測手段，早期明確ARI的病原體對于臨床醫(yī)生明確疾病診斷及選擇合理診治方案具有指導意義。