基于“味性化味”和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的藏藥三熱散治療慢性胃炎的藥性和作用機(jī)制研究＊

東改措，文成當(dāng)智

（1. 青海省海西州蒙藏醫(yī)醫(yī)院 德令哈 817000；2. 成都中醫(yī)藥大學(xué) 民族醫(yī)藥學(xué)院 成都 611137）

慢性胃炎是由多種致病因素引起的胃腸疾病，是慢性萎縮性胃炎、慢性腸炎、胃潰瘍等的病理基礎(chǔ)。而藏醫(yī)認(rèn)為脾胃疾病是由于飲食和起居等不調(diào)而引起三胃火紊亂、培根偏盛所致，是培根加扎（）、培根蘭()、木布?。ǎ┮约澳[痞()、胃癌()等的前期病因。脾胃病是藏醫(yī)的優(yōu)勢病種，尤其治療慢性胃炎有良好的效果，藏藥三熱散是治療慢性胃炎、消化不良等培根偏盛型疾病的核心藥方和加減方，該方始載于《四部醫(yī)典》[1]，是由蓽茇、干姜、胡椒等三種藏藥組成。初步統(tǒng)計，僅在《四部醫(yī)典》中，該方記載頻次可達(dá)166 次，且主要集中在培根病、消化道疾病、腫瘤、腹水、隆病等，尤其與三胃火紊亂和胃腸道部位等有著密切關(guān)系，見圖1。

近年來，隨著網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)逐漸興起，以中藥學(xué)、化學(xué)、藥代動力學(xué)、藥理學(xué)和計算科學(xué)等多學(xué)科融合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)平臺，該平臺以探索中藥方劑的化學(xué)物質(zhì)實體與機(jī)體生命活動的交互規(guī)律的一種新模式[2]，其中多成分、多靶點、多途徑的研究方法可以引用于多組分、多靶點的藏藥方劑學(xué)，探索藏醫(yī)方劑配伍的隱形知識、推測藏藥三熱散治療慢性胃炎的作用機(jī)制，對藏醫(yī)治療慢性胃炎的臨床應(yīng)用具有參考意義。

1 研究方法

圖1 《四部醫(yī)典》中含三熱散方劑的功效網(wǎng)絡(luò)

1.1 “味性化味”分析

數(shù)據(jù)來源 以《四部醫(yī)典》為依據(jù)，搜集三熱散的組方和劑量，根據(jù)《晶珠本草》收集組方藥味，應(yīng)用本研究前期提出的“味性化味”矢量結(jié)構(gòu)模型

其中以組方矢量（B）、劑量矢量（T）、配伍結(jié)構(gòu)矢量（D）等三種影響方劑藥性的矢量為重點，從三熱散的六味、三化味、十七效、二十種特性、三因、本質(zhì)功效等層面其藥性。

1.2 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析

化學(xué)成分和來源中醫(yī)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的藥材數(shù)據(jù)庫TCMSP、ETCM 等中檢索藏藥蓽茇、干姜、胡椒，收集所有化學(xué)成分，并建立生藏藥三熱散的化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫。

疾病靶點收集在網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的疾病靶標(biāo)庫，ETCM Disease 中以“gastritis”作為疾病或癥狀關(guān)鍵詞進(jìn)行檢索，并上HomePage 的疾病靶標(biāo)信息設(shè)定模塊，在中藥靶標(biāo)預(yù)測界面中已建立的藏藥三熱散化學(xué)成分庫中的成分進(jìn)行靶標(biāo)預(yù)測，選取相似性分?jǐn)?shù)大于等于0.6的成分預(yù)測靶標(biāo)作為候選。

GO 功能及KEGG 通路分析候選靶標(biāo)上傳并導(dǎo)入DAVID 6.8數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行GO 和KEGG 通路分析，并構(gòu)建“化合物-基因靶標(biāo)-通路”網(wǎng)絡(luò)。

2 研究結(jié)果

2.1 藥性分析

六味和三化味根據(jù)《四部醫(yī)典》三熱散的組方劑量為等量，其中蓽茇的味辛甘外，干姜和胡椒均味辛，因此該方辛味偏盛，辛味是治療培根性疾病的主要藥味。根據(jù)“味性化味”矢量結(jié)構(gòu)模型，分析其六味與三化味比值，六味中以辛味偏盛，三化味中苦化味偏盛，根據(jù)藏醫(yī)三化味理論，苦化味對培根、赤巴性疾病有治療作用，見表1。

八性和十七效藏醫(yī)認(rèn)為藥物在六味和三化味不同層面有不同的藥性，本研究分析三熱散的六味藥性，八性以輕銳糙熱等突出，十七效中以糙輕熱干等突出，主要對治鈍穩(wěn)重潤等培根性疾病特性，主治培根病。三化味藥性中涼性突出，十七效以涼稀鈍等突出，對治熱臭銳等赤巴性疾病特性，主治赤巴病，見表2，圖2。

表1 藏藥三熱散的六味與三化味

本質(zhì)性能藏藥經(jīng)典《晶珠本草》[4]中對藥物的本質(zhì)性能細(xì)分為氣味性能、生地性能、對治性能、形態(tài)性能、顏色性能等八種[5]，并以八種本質(zhì)性能總結(jié)概括地記載了各個藥物的功效。藏藥三熱散的組方蓽茇、干姜、胡椒均有芳香氣味，而且均對培根、隆等寒性疾病有治療作用，見表3。

3 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析結(jié)果

成分收集在ETCM 等網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)平臺的中藥材數(shù)據(jù)庫及中藥成分?jǐn)?shù)據(jù)庫，檢索三熱散的化學(xué)成分，共檢索到蓽茇有蓽茇明堿、蓽茇明寧堿、胡椒堿等17個成分，共預(yù)測除126個靶標(biāo)；干姜有姜油酮、姜烯酚、六氫姜黃素、姜辣二酮、5ξ-羥基-1-（4-羥基-3-甲氧基苯基）-7-（4-羥基苯基）-3-庚酮、內(nèi)消旋-3,5-二乙酰氧基-1,7-雙-（4-羥基-3-甲氧基苯基）庚烷等38個成分，共預(yù)測出1020 個靶標(biāo)；胡椒有5-羥基-7,3',4'-三甲氧基黃酮、胡椒內(nèi)酰胺A、3,8(9)-p-薄荷二烯-1-醇等93 個成分，共預(yù)測出1320 個靶標(biāo)。藏藥“三熱散”治療慢性胃炎總共預(yù)測出2466個靶標(biāo)。

核心靶標(biāo)分析由平臺生成的核心靶標(biāo)網(wǎng)絡(luò)，圖2，藥物預(yù)測靶標(biāo)（紅色節(jié)點）、已知疾病靶標(biāo)（黃的節(jié)點）、其他靶標(biāo)（灰色節(jié)點），三者相互作用構(gòu)成一個整體網(wǎng)絡(luò)，其他靶標(biāo)具有中間連接的作用，網(wǎng)絡(luò)藥理節(jié)點的Degree 值越高，說明與之相接的節(jié)點數(shù)目越多，該節(jié)點在網(wǎng)絡(luò)中越重要。Degree 值較高的KRAS 是已知疾病靶標(biāo)，即胃炎病相關(guān)靶標(biāo)，其蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞增生中起重要作用，見圖3。

其中核心靶標(biāo)B4GALT1 即β-1,4-半乳糖基轉(zhuǎn)移酶1，有文獻(xiàn)報道該酶在樹突狀細(xì)胞粘附、成熟及T 細(xì)胞粘附、激活的過程中發(fā)揮重要作用[6]，與免疫及炎癥反應(yīng)密切相關(guān)，而且在調(diào)控上皮細(xì)胞增殖和分化過程中也發(fā)揮著重要作用，也是結(jié)直腸癌的一個潛在生物標(biāo)志物[7]，而且。在腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著重要作用，且與受精過程、神經(jīng)元遷移、細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞粘附和轉(zhuǎn)移等生物學(xué)功能密切相關(guān)[8]。B4GALT2 主要在腦、心臟、肌肉和胰腺中表達(dá)，B4GALT4 主要在胎盤、腎臟和胰腺中表達(dá)[9]。CDK9即細(xì)胞周期依賴性蛋白激酶9，其參與機(jī)體炎癥反應(yīng)、病毒感染、復(fù)制，以及腫瘤細(xì)胞的抗凋亡促增殖的代謝過程[10]。PRKCD 基因下調(diào)，會發(fā)生肝脾腫大、淋巴增生、系統(tǒng)性自身免疫疾病，是免疫穩(wěn)態(tài)的守護(hù)者[11]。HSP90AA1 基因與細(xì)胞神經(jīng)系統(tǒng)病理學(xué)的蛋白質(zhì)聚集和衰老有關(guān)[12]，且與胰腺癌、腫瘤、白血病等有關(guān)[13]。

表2 藏藥三熱散的十七效

表3 藏藥三熱散的本質(zhì)性能

GO 功能分析 藏藥三熱散治療慢性胃炎的主要與三磷酸腺苷結(jié)合、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、酶結(jié)合、RNA 聚合酶Ⅱ啟動子轉(zhuǎn)錄調(diào)控、蛋白激酶活性、蛋白質(zhì)復(fù)合物結(jié)合、蛋白質(zhì)磷酸化、蛋白絲氨酸/蘇氨酸激酶活性、谷胱甘肽衍生物生物合成過程、激酶活性、線粒體、刺激性C型凝集素受體等功能有關(guān)。見表4。

圖2 藏藥“三熱散”的“味性化味”藥性分析

圖3 藏藥“三熱散”的靶標(biāo)-疾病基因相互作用網(wǎng)絡(luò)圖

表4 藏藥“三熱散”的功能信息條目

表5 藏藥三熱散的通路信息條目

GO 功能分析結(jié)果顯示有ATP 結(jié)合，而且與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)（signal transduction）Na +和K +泵等信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，直接相互作用蛋白作為分子機(jī)制和環(huán)境[14]。蛋白質(zhì)磷酸化（protein phosphorylation）可以參與重要酶促反應(yīng)，是信號傳遞有關(guān)的蛋白激酶類主要受控于胞內(nèi)信使[15]，有助于胃腸道中蛋白激酶之間的信號傳遞和提供能量。絲氨酸/蘇氨酸激酶活性（protein serine/threonine kinase activity）是治療套細(xì)胞淋巴瘤的潛在的新的治療靶點[16]，而且該激酶15 結(jié)合位點與結(jié)腸癌發(fā)病及淋巴轉(zhuǎn)移、血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá)、腫瘤血管生長等有關(guān)[17]，11位點與調(diào)節(jié)糖尿病的內(nèi)毒素血癥，改善炎癥狀態(tài)有關(guān)[18]，并可抑制消化道癌變和內(nèi)毒素等引起的代謝紊亂。谷胱甘肽的衍生物（glutathione derivative biosynthetic process）對胃黏膜有預(yù)防及保護(hù)作用[19]，其基因多態(tài)性與胃癌發(fā)展相關(guān)[20]。線粒體（mitochondrion）內(nèi)腺苷酸的含量異常是慢性淺表性胃炎形成機(jī)理之一[21]，并有研究提出了“脾-線粒體相關(guān)”理論，認(rèn)為線粒體與脾胃有著密切的聯(lián)系[22]。另外酪氨酸激酶等蛋白激酶活性與胃粘膜損傷修復(fù)有重要意義[23]。可知藏藥“三熱散”治療慢性胃炎可能通過調(diào)節(jié)質(zhì)子泵、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白，從而改善胃腸道對膳食的化學(xué)和物理消化，蛋白激酶和線粒體等修復(fù)胃黏膜損傷并提供能量，且抑制胃腸道細(xì)胞及淋巴細(xì)胞的癌變，使該方具有多途徑的提高人體免疫系統(tǒng)、治療慢性胃炎等消化道疾病的作用。

KEGG 通路分析利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)平臺進(jìn)行靶標(biāo)通路富集分析，通路富集分析結(jié)果主要與內(nèi)分泌系統(tǒng)、甲狀腺激素、循環(huán)系統(tǒng)、蛋白信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、神經(jīng)營養(yǎng)因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞生長與死亡、ErbB 信號、Toll 樣受體信號、乙型肝炎、縫隙連接等通路有關(guān)。見表5。

圖4 藏藥三熱散的成分-關(guān)鍵藥靶-通路網(wǎng)絡(luò)圖

通路富集結(jié)果涉及多個方面，如信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、循環(huán)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、神經(jīng)營養(yǎng)因子信號、神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白激活ErbB 蛋白的受體酪氨酸激酶信號等疾病的相關(guān)通路。研究發(fā)現(xiàn)，胃腸道器官中存在自分泌或旁分泌的定向神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白激活ErbB 蛋白的受體酪氨酸激酶信號（ErbB signaling pathway）通路[24]，且與免疫系統(tǒng)識別病原相關(guān)分子的主要受體，調(diào)控適應(yīng)性免疫應(yīng)答的Toll 樣受體[25]通路有關(guān)系?？p隙連接（Gap junction）蛋白43是細(xì)胞間隙連接通訊中最重要的間隙連接蛋白，對胃腸道動力的形成和調(diào)節(jié)起著關(guān)鍵作用，胃腸運動功能障礙是消化道疾病的重要臨床表現(xiàn)[26]。因此，可進(jìn)一步表明該方與胃腸道細(xì)胞增殖分化過程、提高消化道免疫調(diào)節(jié)、加強(qiáng)胃腸道蠕動等作用，對慢性胃炎，尤其是“培根”偏盛而胃腸功能障礙、消化不良、寒性胃炎等有著治療作用。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)平臺生成的中藥-成分-關(guān)鍵藥靶-通路網(wǎng)絡(luò)，見圖4，將復(fù)雜的作用機(jī)制以網(wǎng)絡(luò)的形式具體表達(dá)。中藥-成分-關(guān)鍵藥靶-通路網(wǎng)絡(luò)分為四層，綠色節(jié)點代表藥物，粉色節(jié)點代表化學(xué)成分，藍(lán)色節(jié)點代表作用的靶點，紅色節(jié)點代表富集得到的通路。

4 總結(jié)與討論

慢性胃炎是臨床上常見的疾病，藏醫(yī)認(rèn)為該病與飲食、起居、心理等有關(guān)，是長期偏食、暴飲暴食、風(fēng)寒潮濕等引起三因紊亂所致，從病理上可以分為三個階段，早期是培根過盛，膳食的精華和糟粕不能及時分解、消化，過多的黏液積聚于胃內(nèi)，逐漸影響胃腸道的微血管，引起胃腸蠕動障礙，導(dǎo)致培根性胃炎。中期是培根性胃炎逐漸影響消化道的功能，精華和糟粕凝結(jié)為濁液，引起胃腸道潰瘍，且胃液使消化道生熱，破壞胃腸道表面，導(dǎo)致赤巴性胃炎。晚期是胃腸道無法正常消化膳食，吸收營養(yǎng)，引起隆性胃炎。可知藏醫(yī)對慢性胃炎的病理病機(jī)由從培根-赤巴-隆等的轉(zhuǎn)變。藏藥三熱散是治療慢性胃炎的常用藥物，本研究基于藏藥“味性化味”理論分析三熱散的藥性，六味藥性中方主治培根病，三化味藥性中該方主治赤巴病，根據(jù)《四部醫(yī)典》收載含三熱散方劑功效中主治培根病、不消病、腫痞、腹水等來看，該方藥性主要以六味藥性，主治培根偏盛而隆、赤巴衰弱性疾病，藏醫(yī)認(rèn)為隆主生“輕動”，行于白脈；赤巴主生熱，行于肝膽、血液等；培根主生津，行于脾肺。因此，藏藥三熱散可調(diào)節(jié)精華和津液過剩、胃火功能減弱、白脈功能減弱等疾病。

從十七效層面看，糙效、輕效、熱效、干效等突出，其中糙效可對治培根的“柔粘”性引起的培根粘液過剩而微管堵塞等病機(jī)，影響遍行隆的功能；輕效可對治培根的重性引起的不消腫痞、蠕動減弱等病機(jī)，影響下行隆功能；熱效可對治培根的涼性引起的三火減弱、精濁分解不清等病機(jī)，影響能化培根、消化赤巴、伴隆火等三胃火功能；干效可對治赤巴的“瀉濕”性引起的腹瀉、慢性胃炎、慢性腸炎等病機(jī)，影響能依培根的功能。本質(zhì)性能分析中均為溫性，主治胃腸疾病?？梢娙裏嵘⑼ㄟ^對治培根，增強(qiáng)三胃火改善胃腸白脈功能，從而達(dá)到溫胃益脾、化濕行隆等效果，對精華過剩、風(fēng)寒潮濕等外因和三因紊亂、培根偏盛等內(nèi)因所引起的慢性胃炎、寒性胃腸道具有良好效果。

網(wǎng)絡(luò)靶點分析得到藏藥三熱散治療慢性胃炎的物質(zhì)基礎(chǔ)和分子機(jī)制，發(fā)現(xiàn)該方與B4GALT1、COX7C、CDK9、PRKCD、B4GALT2、PRKAA2 等關(guān)鍵靶點有關(guān)聯(lián)，在功能靶標(biāo)中有三磷酸腺苷結(jié)合、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、蛋白激酶活性、蛋白質(zhì)磷酸化、蛋白絲氨酸/蘇氨酸激酶活性、谷胱甘肽衍生物生物合成過程、線粒體等有關(guān)。通路靶標(biāo)中主要與內(nèi)分泌系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)、蛋白信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、神經(jīng)營養(yǎng)因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、縫隙連接等有關(guān)。藏藥三熱散可能作用于分泌細(xì)胞、神經(jīng)營養(yǎng)因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、線粒體等能量代謝通路和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，調(diào)節(jié)ATP，修復(fù)消化道黏膜，達(dá)到治療慢性胃炎的作用。

綜上，藏醫(yī)“味性化味”理論分析三熱散主要調(diào)節(jié)“三胃火”而作用于慢性胃炎，而網(wǎng)絡(luò)靶點分析得到該方通過調(diào)節(jié)胃腸道免疫而起效，啟示藏醫(yī)“三胃火”理論與現(xiàn)代免疫功能之間具有潛在的聯(lián)系[27]。本研究結(jié)合藏藥藥性與網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)，揭示藏藥三熱散的臨床用藥特點和內(nèi)在藥性，探索其治療慢性胃炎的機(jī)制，為藏醫(yī)臨床和藏藥方劑研究提供新的方法與思路。