金關(guān)片對(duì)小鼠高尿酸血癥的藥效作用研究

史琳莉 楊芳炬 鄭焱江 梁 楠 植茂輝

［1.華潤(rùn)三九（雅安）藥業(yè)有限公司，四川 雅安 625000；2.四川大學(xué)，四川 成都 610042；3.成都醫(yī)學(xué)院，四川 成都 610083］

金關(guān)片是由雷公藤、續(xù)斷、山藥、細(xì)辛、附子（制）、茯苓、桑枝、桂枝、鹿角霜、秦艽、丹參、枸杞子、牛膝、雞血藤、黃精、淫羊藿、薏苡仁、黃芪共18味中藥經(jīng)加工制成的片劑，具有補(bǔ)益肝腎、祛寒止痛、活血通絡(luò)的功效，增強(qiáng)腎上腺皮質(zhì)功能，調(diào)整免疫等作用［1］。臨床上主要用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎，對(duì)痛風(fēng)所致的關(guān)節(jié)疼痛、腫脹等癥狀有顯著改善效果［2］。本實(shí)驗(yàn)從動(dòng)物實(shí)驗(yàn)角度，通過(guò)飼喂小鼠酵母膏建立高尿酸血癥模型［3］，觀察金關(guān)片對(duì)該模型的血清中尿酸（UA）、尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）的含量影響，對(duì)金關(guān)片治療高尿酸血癥作用進(jìn)行藥效學(xué)評(píng)價(jià)，為金關(guān)片的臨床運(yùn)用提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康昆明種小鼠，SPF級(jí)，雄性，體質(zhì)量20～22 g，四川大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SCXK（川）2009-09。

1.2 藥物與試劑

金關(guān)片［華潤(rùn)三九（雅安）藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字Z20054153，規(guī)格：0.3 g/片］用時(shí)研磨成極細(xì)粉末溶于0.5%的CMC-Na溶液制成混懸液備用，高、中、低劑量的質(zhì)量濃度分別為120、60、30 mg/mL。別嘌醇片（江蘇方強(qiáng)制藥廠，國(guó)藥準(zhǔn)字H20033683）用0.5%CMC-Na配制成質(zhì)量濃度2 mg/mL藥液。酵母粉（成都云鴻科技發(fā)展有限公司，進(jìn)口分裝，500 g/瓶）用0.5%CMCNa配制成質(zhì)量濃度1.5 g/mL溶液。尿酸試劑盒（南京建成生物工程研究所提供）。尿素氮試劑盒（脲酶法）（南京建成生物工程研究所）。肌酐試劑盒（除蛋白法）（南京建成生物工程研究所提供）。TG16G臺(tái)式高速離心機(jī)（湖南凱達(dá)科學(xué)儀器科學(xué)有限公司）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（）表示，采用t檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 方法與結(jié)果

2.1 造模給藥同時(shí)進(jìn)行組實(shí)驗(yàn)

2.1.1 分組與造模［3］小鼠隨機(jī)分為6組，每組10只，分別為：陰性對(duì)照組（5%CMC-Na溶液20 mL/kg）、模型組（酵母膏20 mL/kg）、陽(yáng)性藥對(duì)照組（酵母膏+別嘌醇40 mg/kg，相當(dāng)于1倍臨床等效劑量）、金關(guān)片高劑量組（酵母膏+金關(guān)片2.4 g/kg，相當(dāng)于4倍臨床等效劑量）、中劑量組（酵母膏+金關(guān)片1.2 g/kg，相當(dāng)于2倍臨床等效劑量）、低劑量組（酵母膏+金關(guān)片0.6 g/kg，相當(dāng)于1倍臨床等效劑量）。除陰性對(duì)照組外，各組造模方法參照文獻(xiàn)［3］執(zhí)行。各組每天給予酵母膏30 g/kg灌胃，每天1次，連續(xù)7 d，第3日時(shí)開始灌胃相應(yīng)藥液，每日1次，連續(xù)4 d。

2.1.2 標(biāo)本采集與檢測(cè) 于第7日末次給藥30 min后，各組動(dòng)物經(jīng)眼眶后靜脈叢取血，按照試劑盒說(shuō)明書測(cè)定小鼠血清中UA、BUN、Scr的含量。

2.1.3 各組血清中UA、BUN、Scr水平比較 見表1。造模后，與陰性對(duì)照組比較，模型組小鼠的UA、BUN、Scr含量均顯著升高（P<0.01）；與模型組比較，各給藥組均顯著降低BUN水平（P<0.05或P<0.01），同時(shí)，除金關(guān)片低劑量組外，高、中劑量組及陽(yáng)性藥對(duì)照組均顯著降低UA、Scr水平（P<0.05或P<0.01）；與陽(yáng)性藥對(duì)照組比較，金關(guān)片各劑量組降低BUN水平無(wú)明顯差異，高劑量組降低UA水平亦無(wú)明顯差異，但高劑量組降低Scr水平較陽(yáng)性藥對(duì)照組顯著（P<0.05）；金關(guān)片各劑量組間比較，高劑量組降低UA水平較中、低劑量組顯著（P<0.05），高、中劑量組降低Scr水平較低劑量組顯著（P<0.05），其余各組指標(biāo)無(wú)明顯差異（P>0.05）。說(shuō)明金關(guān)片對(duì)高尿酸血癥形成過(guò)程中BUN水平升高有明顯的降低作用，并對(duì)高尿酸模型小鼠誘發(fā)的Scr、UA升高也有明顯降低作用，尤其是金關(guān)片高、中劑量效果更為顯著。

表1 各組血清中UA、BUN、Scr水平比較（±s）

表1 各組血清中UA、BUN、Scr水平比較（±s）

與陰性對(duì)照組比較，◆◆P<0.01；與模型組比較，?P<0.05，??P<0.01；與陽(yáng)性給藥組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01；與金關(guān)片高劑量組比較，#P<0.05；與金關(guān)片低劑量組比較，●P<0.05。下同

組別陰性對(duì)照組模型組陽(yáng)性藥對(duì)照組金關(guān)片高劑量組金關(guān)片中劑量組金關(guān)片低劑量組n 10 10 10 10 10 10 UA（μmol/L）168.17±20.93 230.55±34.90◆◆158.26±7.09**175.25±23.85**202.16±29.03*▲▲#214.20±21.26▲▲#BUN（mg/L）189.49±26.08 272.09±52.16◆◆209.82±28.02**204.34±41.74**219.93±41.74**232.26±52.14*Scr（μmol/L）208.54±30.58 276.09±60.86◆◆232.03±21.82**198.80±29.34**▲224.58±31.70**260.68±26.22#

2.2 造模后給藥組實(shí)驗(yàn)

2.2.1 分組與造模［3］小鼠隨機(jī)分為6組，每組10只，分別為：陰性對(duì)照組（0.5%的CMC-Na溶液20 mL/k）、模型組（酵母膏20 mL/kg）、陽(yáng)性對(duì)照藥組（酵母膏＋別嘌醇40 mg/kg，相當(dāng)于1倍臨床等效劑量）、金關(guān)片高劑量組（酵母膏＋金關(guān)片2.4 g/kg、相當(dāng)于4倍臨床等效用量）、中劑量組（酵母膏＋金關(guān)片1.2 g/kg，相當(dāng)于2倍臨床等效用量）、低劑量組（酵母膏＋金關(guān)片0.6 g/kg，相當(dāng)于1倍臨床等效用量）。除陰性對(duì)照組外，各組造模方法參照文獻(xiàn)［3］執(zhí)行。各組每天給予酵母膏30 g/kg灌胃，每天1次，連續(xù)7 d。造模結(jié)束后再灌胃相應(yīng)藥液，每日1次，連續(xù)3 d。

2.2.2 標(biāo)本采集與檢測(cè) 末次給藥30 min后，各組動(dòng)物眼眶后靜脈叢取血，按照試劑盒說(shuō)明書測(cè)定小鼠血清中UA、BUN、Scr的含量。

2.2.3 各組血清中UA、BUN、Scr水平比較 見表2。表2數(shù)據(jù)可見，與陰性對(duì)照比較，模型組UA、BUN水平顯著升高（P<0.01），但Scr水平無(wú)明顯差異（P>0.05）；與模型組比較，金關(guān)片高劑量組顯著降低UA、BUN水平（P<0.05），陽(yáng)性藥對(duì)照組亦顯著降低UA、BUN（P<0.01）；金關(guān)片各劑量組間比較，高劑量組降低UA作用較低劑量組顯著（P<0.05），其余各指標(biāo)無(wú)明顯差異（P>0.05）。說(shuō)明金關(guān)片在小鼠高尿酸模型形成后給藥，也具有降低血清UA水平作用，且高劑量組對(duì)高尿酸模型所致的BUN升高也具明顯降低作用。

表2 各組血清中UA、BUN、Scr水平比較（±s）

表2 各組血清中UA、BUN、Scr水平比較（±s）

組別陰性對(duì)照組模型組陽(yáng)性藥對(duì)照組金關(guān)片高劑量組金關(guān)片中劑量組金關(guān)片低劑量組n 10 10 10 10 10 10 UA（μmol/L）168.17±20.93 202.04±21.98◆◆165.89±9.56**177.38±15.15*192.25±16.69 200.04±35.30#BUN（mg/L）189.49±26.08 248.76±29.83◆◆206.21±27.25**215.26±45.23*223.31±40.52 232.28±39.53 Scr（μmol/L）208.54±30.58 222.18±34.71 206.82±57.32 196.51±22.92 204.53±29.48 219.43±38.01

2.3 造模同時(shí)給藥實(shí)驗(yàn)與造模后給藥實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較見表3。兩組試驗(yàn)對(duì)尿酸、尿素氮、肌酐水平的影響比較結(jié)果表明：兩組均有降低模型小鼠血清UA、BUN、Scr含量作用，但造模同時(shí)給藥試驗(yàn)組中金關(guān)片各劑量降低UA、BUN水平均較造模后再給藥組顯著（P<0.05或P<0.01）；造模同時(shí)給藥試驗(yàn)組中，金關(guān)片高、中劑量降低UA水平均比造模后再給藥組顯著（P<0.01），而兩試驗(yàn)組低劑量降低Scr水平無(wú)明顯差異。說(shuō)明金關(guān)片在模型形成過(guò)程中給藥較模型形成后給藥療效更為顯著，提示金關(guān)片在高尿酸形成過(guò)程中給藥具有良好對(duì)抗UA升高作用。

表3 各組造模時(shí)與造模后給藥實(shí)驗(yàn)比較（±s）

表3 各組造模時(shí)與造模后給藥實(shí)驗(yàn)比較（±s）

與高劑量組比較，?P<0.05，??P<0.01；中劑量組間比較，▲▲P<0.01；低劑量組間比較，#P<0.05

組別金關(guān)片高劑量組（n=10）金關(guān)片中劑量組（n=10）金關(guān)片低劑量組（n=10）Scr（μmol/L）77.29±37.64 25.67±16.22**77.29±35.70 17.65±9.35▲▲15.41±34.60 2.75±13.04時(shí)間造模時(shí)造模后造模時(shí)造模后造模時(shí)造模后UA（μmol/L）54.76±11.60 24.67±15.45**27.85±7.30 9.80±9.16▲▲15.81±14.56 2.01±17.51#BUN（mg/L）67.72±40.90 33.50±20.35*52.17±21.69 25.45±18.96▲▲39.84±24.14 16.47±17.69#

3 討 論

人體在正常嘌呤飲食狀態(tài)下，非同日兩次空腹血UA水平無(wú)論男性還是女性高于420 μmol/L，即稱為高尿酸血癥［4］。長(zhǎng)期的高尿酸血癥，在體內(nèi)可形成尿酸鹽沉積。尿酸鹽沉積在不同部位即產(chǎn)生不同的臨床表現(xiàn)，當(dāng)尿酸鹽沉積于關(guān)節(jié)處，引起關(guān)節(jié)炎癥表現(xiàn)時(shí)，即稱為痛風(fēng)［5］，臨床表現(xiàn)為高尿酸血癥、反復(fù)發(fā)作的痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)石沉積及痛風(fēng)性腎病等［6］。隨著生活水平的提高和飲食結(jié)構(gòu)的改變，高尿酸血癥和痛風(fēng)的發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)。痛風(fēng)和高尿酸血癥現(xiàn)已成為僅次于糖尿病的第二大代謝性疾病，嚴(yán)重危害人們的身心健康［7］。流行病學(xué)調(diào)查顯示，近20年來(lái)美國(guó)痛風(fēng)患病率達(dá)3.9%，而歐洲的痛風(fēng)患病率為3.2%［8］。在我國(guó)痛風(fēng)發(fā)病率逐年上升，目前已超過(guò)5 000萬(wàn)人，部分沿海城市人群的痛風(fēng)患病率達(dá)1.14%，而高尿酸血癥的患病率高達(dá)13.19%［9］。高尿酸血癥患者中約10%左右會(huì)出現(xiàn)臨床痛風(fēng)癥，而多數(shù)人雖有持續(xù)血UA水平增高但無(wú)痛風(fēng)發(fā)作，稱之為特發(fā)性高尿酸血癥。但需要注意的是，UA水平越高、高UA持續(xù)的時(shí)間越長(zhǎng)，發(fā)生痛風(fēng)的可能性就越大，可以說(shuō)高尿酸血癥是痛風(fēng)發(fā)生發(fā)展最重要的生化基礎(chǔ)［10］。近年來(lái)越來(lái)越多臨床研究表明，高尿酸血癥與高血壓、腎臟疾病、糖尿病、心血管疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)［11］。因此，早期發(fā)現(xiàn)尿酸升高、高尿酸血癥，降低尿酸水平是預(yù)防與治療高尿酸血癥、痛風(fēng)，以及高血壓、腎臟疾病、糖尿病、心血管等相關(guān)疾病的關(guān)鍵。

現(xiàn)代藥理研究表明，金關(guān)片處方中多味藥物具有降低UA的作用。其中山藥的甲醇提取物可顯著抑制黃嘌呤氧化酶，從而抑制UA的生成［12］；附子可顯著降低血清中Scr、UA水平，降低腎UA，由此起到較好的腎臟保護(hù)作用［13］；秦艽能降低高尿酸血癥模型大鼠的UA值，增加大鼠24 h尿量和UA排泄量［14］；楊彩鳳等通過(guò)研究中藥治療高尿酸血癥組方規(guī)律發(fā)現(xiàn)，牛膝、薏苡仁組合是治療高尿酸血癥的常見組合及常見核心用藥［15］，這個(gè)組合也使用在金關(guān)片的處方中。金關(guān)片治療高尿酸血癥可能與其處方中多種成分協(xié)同發(fā)揮降低UA生成，增加UA排泄等作用有關(guān)。

本試驗(yàn)通過(guò)大量酵母膏（20 mL/kg）灌胃建立高尿酸血癥模型，1周后，小鼠血清中UA水平顯著升高，Scr、BUN水平也顯著升高。給予金關(guān)片后，UA、BUN、Scr水平均顯著降低，且在高尿酸血癥形成過(guò)程中給藥較病癥形成后給藥療效更為顯著，提示金關(guān)片對(duì)臨床高尿酸血癥患者具有良好的治療并控制癥狀發(fā)展的應(yīng)用價(jià)值。