血漿miR-92a和miR-93在急性ST段抬高型心肌梗死診斷及近期預(yù)后評(píng)估中的臨床價(jià)值分析

修明文, 邊毓堯

(河北中石油中心醫(yī)院急診科, 河北 廊坊 065000)

急性心肌梗死是威脅生命的冠狀動(dòng)脈疾病發(fā)作，是尚未解決的具有高發(fā)病率和死亡率的臨床問題。血液供應(yīng)不足和氧化應(yīng)激導(dǎo)致心臟組織壞死，病理重塑和左心功能不全[1,2]。急性心肌梗死可分為兩類：ST段抬高型心肌梗死(STEMI)和非ST段抬高型心肌梗死(NSTEMI)。在STEMI中，梗死相關(guān)的動(dòng)脈通常被富含纖維蛋白的血塊完全阻塞，而立即再灌注治療是最初的方法。早期準(zhǔn)確診斷STEMI對(duì)于獲得最佳治療效果至關(guān)重要[3,4]。因此，迫切需要能夠補(bǔ)充和改善當(dāng)前STEMI診斷策略的新方法。近期研究發(fā)現(xiàn)，在STEMI期間血液和血漿中的幾種miRNA，例如miR-1、miR-133a、miR-208b、miR-499和miR-328的水平發(fā)生了變化，這表明循環(huán)miRNA的診斷在早期的STEMI中具有診斷價(jià)值[5]。本研究擬探討血漿miR-92a和miR-93在急性ST段抬高型心肌梗死診斷及近期預(yù)后評(píng)估中的臨床價(jià)值分析，為急性ST段抬高型心肌梗死的診斷及治療提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料:收集2016年8月至2018年9月在我院急診科確診的急性ST段抬高型心肌梗死患者160例為病例組。所有病例符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管病學(xué)分會(huì)2007年制定的不穩(wěn)定型心絞痛和非ST段抬高型心肌梗死診斷和治療指南診斷標(biāo)準(zhǔn)，其中男80例，女80例，年齡為42～74歲，平均年齡(59.1±13.6)歲。另外招募了152名健康的成年人志愿者(心電圖正常，無心血管疾病史)作為對(duì)照組，對(duì)照組年齡和性別情況。性別、年齡、BMI、吸煙、飲酒、高血壓、高脂血癥等一般資料無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，見表1。該研究得到本院研究倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)，并在每個(gè)患者的知情同意下收集樣品。納入標(biāo)準(zhǔn)：急性缺血性胸痛；心電圖異常(病理性Q波，ST段抬高或壓抑)；心肌壞死標(biāo)志物(肌鈣蛋白(cTns)和肌酸激酶(CK))的水平超過正常范圍上限的兩倍。這些患者出現(xiàn)癥狀后不超過24h入院。排除標(biāo)準(zhǔn)：先前有MI或經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療(PCI)，任何血液系統(tǒng)疾病，急性或慢性感染，嚴(yán)重肝功能不全，腎衰竭(腎小球?yàn)V過率(GFR)<15mL/min/1.73m2或經(jīng)透析)的患者，或已知或排除治療的惡性腫瘤。終止、退出標(biāo)準(zhǔn)：患者依從性差；出現(xiàn)嚴(yán)重不良事件及其他原因致使繼續(xù)試驗(yàn)困難。

1.2方 法

1.2.1各指標(biāo)的測(cè)定:病例組及對(duì)照組患者清晨空腹及肱靜脈抽血；取靜脈血10mL置于EDTA抗凝管中，3000rpm離心，l0min，分離血漿(分別于入院后發(fā)病4h、發(fā)病8h、發(fā)病12h、發(fā)病24h、發(fā)病48h、發(fā)病72h、發(fā)病1周)；同時(shí)取靜脈血10mL置于無菌管中，室溫靜置30min，3000rpm離心，l0min，分離血清。貝克曼AU-480全自動(dòng)生化分析儀(美國(guó)庫爾特公司)分析儀測(cè)定TG、HDL-C、LDL-C(TG、HDL-C、LDL-C試劑盒為貝克曼原廠自帶試劑)，德鐵HBS-1096B酶標(biāo)儀(南京德鐵實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)測(cè)定hs-CRP、NT-pro BNP(hs-CRP、NT-pro BNP ELISA試劑盒購于上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司)。使用TRIzol試劑(卡爾斯巴德生命技術(shù)公司，美國(guó)，56488)從血漿分離總RNA。PrimeScriptTM RT預(yù)混液(中國(guó)大連寶生物，48789)用于合成第一鏈cDNA。然后使用Power SYBR Green PCR Master Mix(Carlsbad，CA，65486)和GAPDH作為內(nèi)部對(duì)照，通過使用7900HT快速實(shí)時(shí)PCR系統(tǒng)(美國(guó)Applied Biosystems)進(jìn)行定量聚合酶鏈反應(yīng)(qPCR)。miR-92a、miR-93、GAPDH引物序列由上海生工科技合成。miR-92a正向：5'-GTCTGTAGCGTCAGTAAATGCCTGGATAGCCCTGTGATGCA-3'和miR-92a反向：5'-CTGTCTGTAGCTAGCGTAGAATGACGGTGAGCCTTGGAGTG-3'。miR-93正向：3'-CGTGCGTGCGATGCCAACAGTTGGTCGAGTTTTG-3'，miR-93反向：3'-CGGTGACCCCATGTGACAGTAAGCTGCGTCCT-3'GAPDH正向：5，-CTGTGCAGTCAGTCAGTCCTGTGACGTGA-3，和GAPDH反向：5，-CTGTCGGTGCCCATGCAGTCAGTTGCTGTGAGTGC-3，(反向)。RT反應(yīng)在以下條件下進(jìn)行：42℃15min; 85℃，5s;然后保持在4℃。PCR反應(yīng)在95℃下進(jìn)行30s，然后在7900HT實(shí)時(shí)PCR系統(tǒng)中進(jìn)行40個(gè)循環(huán)(95℃5s和60℃34s)。分析RT-PCR結(jié)果并表示為CT的相對(duì)miRNA表達(dá)(閾值循環(huán))值，然后將其轉(zhuǎn)換為倍數(shù)變化。

1.2.2隨訪:對(duì)急性STEMI患者出院后進(jìn)行為期3個(gè)月的隨訪，隨訪主要不良心血管事件(MACE)發(fā)生情況，主要包括：心絞痛發(fā)作、再次血運(yùn)重建、新發(fā)心力衰竭、中心原性死亡等。

2 結(jié) 果

2.1兩組一般情況比較:病例組性別、年齡、BMI、吸煙、飲酒、高血壓、高脂血癥等一般資料與對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

表1 兩組一般情況比較

2.2兩組miR-92a、miR-93指標(biāo)比較：與對(duì)照組比較，病例組發(fā)病4h、發(fā)病8h、發(fā)病12h、發(fā)病24h、發(fā)病48h血漿miR-92a水平降低，miR-93水平升高(P<0.05)；病例組發(fā)病72h、發(fā)病1周血漿miR-92a、miR-93水平無明顯變化(P>0.05)。時(shí)間分布顯示，miR-92a于急性ST段抬高型心肌梗死發(fā)病4h開始降低，12h達(dá)到最低值，72h后趨于正常；miR-93于發(fā)病急性ST段抬高型心肌梗死發(fā)病4h開始升高，8h達(dá)到最高值，72h后亦趨于正常。見表2。

表2 兩組miR-92a miR-93指標(biāo)比較

2.3兩組血脂指標(biāo)比較：病例組HDL-C水平低于對(duì)照組，TG、LDL-C水平高于對(duì)照組(P<0.05)，見表3。

表3 兩組血脂指標(biāo)比較

2.4兩組hs-CRP、NT-proBNP指標(biāo)比較：病例組hs-CRP、NT-proBNP水平高于對(duì)照組(P<0.05)，見表4。

表4 兩組hs-CRP NT-proBNP指標(biāo)比較

2.5miR-92a、miR-93與各指標(biāo)相關(guān)性分析：miR-92a與HDL-C，miR-93與TG、LDL-C、hs-CRP、NT-proBNP正相關(guān)，miR-92a與TG、LDL-C、hs-CRP、NT-proBNP，miR-93與HDL-C負(fù)相關(guān)(P<0.05)，見表5。

表5 miR-92a miR-93與各指標(biāo)相關(guān)性分析

2.6各指標(biāo)診斷急性ST段抬高型心肌梗死的價(jià)值分析：診斷急性ST段抬高型心肌梗死時(shí)，miR-93的AUC、敏感性、特異性、準(zhǔn)確性、cutoff分別為0.851、76.3%、79.6%、82.6%、2.35；miR-92a的AUC、敏感性、特異性、準(zhǔn)確性、cutoff分別為0.846、75.9%、72.6%、81.1%、3.59。，見表6、圖1。

表6 各指標(biāo)診斷急性ST段抬高型心肌梗死的價(jià)值分析

圖1 miR-93、miR-92a診斷急性ST段抬高型心肌梗死的ROC曲線

2.7miR-92a、miR-93表達(dá)水平與患者預(yù)后分析：160例急性STEMI患者確診3個(gè)月內(nèi)共發(fā)生20例(12.5%)MACE，其中心絞痛發(fā)作7例、中心原性死亡5例、心力衰竭8例，無靶血管再次血運(yùn)重建。以中位數(shù)為界限分組，miR-92a高表達(dá)組MACE發(fā)生率明顯高于miR-92a低表達(dá)組(P<0.05)，miR-93高表達(dá)組MACE發(fā)生率明顯低于miR-93低表達(dá)組(P<0.05)，見表7。

表7 不同miR-92a miR-93表達(dá)水平患者預(yù)后比較n(%)

2.8急性ST段抬高型心肌梗死患者M(jìn)ACE發(fā)生情況的多元Logistic回歸分析：以急性ST段抬高型心肌梗死患者是否發(fā)生MACE為應(yīng)變量(是=1，否=0)，患者基本特征、血清學(xué)指標(biāo)及miR-93、miR-92a等作為自變量進(jìn)行多因素logistic逐步回歸分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)高水平miR-93及低水平miR-92a為急性ST段抬高型心肌梗死患者發(fā)生MACE的危險(xiǎn)因素(OR=4.62、5.02，P<0.05)，見表8。

表8 急性ST段抬高型心肌梗死患者M(jìn)ACE發(fā)生情況的多元Logistic回歸分析

3 討 論

MicroRNA(miRNA)是長(zhǎng)度為17-27個(gè)核苷酸的小型非編碼細(xì)胞RNA。通過與靶標(biāo)mRNA的3'UTR配對(duì)，它們通過翻譯抑制和轉(zhuǎn)錄物切割充當(dāng)基因表達(dá)的序列特異性調(diào)節(jié)子。最近的研究表明，miRNA是許多疾病發(fā)病機(jī)理中的重要調(diào)節(jié)劑。AMI中涉及許多循環(huán)miRNA。這些包括心臟特異性miRNA(miR-208a)和非心臟特異性miRNA(miR-126，miR-328，miR-134)[6]。

miR-92a可通過阻斷蛋白激酶B信號(hào)通路抑制心血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和集落形成，在急性心肌炎、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎中，miR-92a表達(dá)降低，提示miR-92a在此類疾病中發(fā)揮重要調(diào)控作用[7]。miR-92a在幾種肌肉疾病中均被下調(diào)，例如杜興氏肌營(yíng)養(yǎng)不良癥和失神經(jīng)引起的肌肉萎縮癥。miR-92a的過度表達(dá)可能導(dǎo)致肌肉肥大。據(jù)報(bào)道，與炎癥相關(guān)的miRNA miR-93與多種心血管疾病的發(fā)病機(jī)制有關(guān)。血漿樣品的微陣列篩選顯示與健康對(duì)照組相比，肺動(dòng)脈高壓患者的miR-93水平降低。此外，這些患者的血漿miR-93水平是存活率的重要預(yù)測(cè)指標(biāo)[8]。不穩(wěn)定型心絞痛患者的血清中miR-93也失調(diào)。通過應(yīng)用包括miR-132，miR-93和miR-186的miRNA面板，明顯提高了不穩(wěn)定型心絞痛的診斷準(zhǔn)確性[9]。此外，轉(zhuǎn)錄因子cMyb，NOTCH3受體和非轉(zhuǎn)移性黑色素瘤蛋白B是miR-93的潛在靶標(biāo)。這兩個(gè)miRNA的調(diào)節(jié)異常可能與心臟損害以外的病理狀況有關(guān)[10]。

本研究顯示，病例組發(fā)病4h、發(fā)病8h、發(fā)病12h、發(fā)病24h、發(fā)病48h血漿miR-92a水平降低，miR-93水平升高；同時(shí)，時(shí)間分布顯示，miR-92a于STEMI發(fā)病4h開始降低；miR-93于STEMI發(fā)病4h開始升高；且miR-92a與HDL-C，miR-93與TG、LDL-C、hs-CRP、NT-proBNP正相關(guān)關(guān)系明顯；miR-92a與TG、LDL-C、hs-CRP、NT-proBNP，miR-93與HDL-C負(fù)相關(guān)關(guān)系明顯；這提示，miR-92a、miR-93在STEMI早期即可發(fā)生變化，具有較高的敏感性；此外，ROC分析表明，這兩種miR-92a、miR-93可能是STEMI的診斷標(biāo)志物。預(yù)后比較顯示，miR-92a高表達(dá)組MACE發(fā)生率高于miR-92a低表達(dá)組，miR-93高表達(dá)組MACE發(fā)生率低于miR-93低表達(dá)組；高水平miR-93及低水平miR-92a均為急性ST段抬高型心肌梗死患者發(fā)生MACE的危險(xiǎn)因素；這說明，高水平的miR-93以及低水平的miR-92a均為急性ST段抬高型心肌梗死患者不良預(yù)后危險(xiǎn)因素。

綜上所述，急性ST段抬高型心肌梗死患者血漿miR-92a降低，miR-93升高；miR-92a、miR-93可作為診斷急性ST段抬高型心肌梗死的早期敏感生物標(biāo)志物；高水平的miR-93以及低水平的miR-92a均為急性ST段抬高型心肌梗死患者不良預(yù)后危險(xiǎn)因素。