深圳市光明區(qū)新生兒耳聾基因篩查結(jié)果分析

諶玉佳 楊江濤 莊利明 柳國勝 游敏玲 吳本清

摘要：目的? 分析深圳市光明區(qū)所屬3家醫(yī)院出生的新生兒耳聾基因檢測結(jié)果，以了解深圳光明區(qū)新生兒耳聾基因的突變攜帶情況。方法? 采集深圳市光明區(qū)2017年5月～2018年11月出生的新生兒足跟血16249份，用PCR+導(dǎo)流雜交法檢測中國人群中常見的4個耳聾易感基因（GJB2、GJB3、SLC26A4、12SrDNA），其中2017年5月～2018年3月收集的標(biāo)本檢測4個常見耳聾基因的9個突變位點(diǎn)，2018年3～11月收集的標(biāo)本檢測4個常見基因的15個突變位點(diǎn)，分析新生兒遺傳性耳聾基因突變攜帶率及突變位點(diǎn)分布情況。結(jié)果? 16249名新生兒中，檢出攜帶突變耳聾基因575例，總陽性率3.53%，其中檢測4基因9位點(diǎn)樣本數(shù)為8448例，突變樣本為262例，突變率為3.10%;檢測4基因15位點(diǎn)樣本數(shù)為7801例，突變樣本為313例，突變率為4.01%。所有突變基因中，GJB2基因（1.96%）和SLC26A4基因的突變率最高（1.21%）。結(jié)論? 深圳市光明區(qū)新生兒遺傳性耳聾基因突變率低于全國平均水平，基因突變主要以GJB2基因、SLC26A4基因?yàn)橹鳎瑪U(kuò)大基因位點(diǎn)數(shù)量的檢測有利于降低漏篩率;早發(fā)現(xiàn)、早干預(yù)可減少耳聾的發(fā)生。

關(guān)鍵詞：遺傳性耳聾;新生兒;基因突變;基因芯片;篩查

中圖分類號：R764.43? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2020.13.039

文章編號：1006-1959（2020）13-0134-04

Analysis of Genetic Screening Results of Newborn Deafness in Guangming District，Shenzhen

CHEN Yu-jia1，2，YANG Jiang-tao3，ZHUANG Li-ming2，LIU Guo-sheng1，YOU Min-ling4，WU Ben-qing2

（1.The First Clinical School of Jinan University，Guangzhou 510632，Guangdong，China;

2.Department of Traditional Chinese Medicine，Shenzhen Hospital，University of Chinese Academy of Sciences，

Shenzhen 518106，Guangdong，China;

3.Shenzhen Aiwan Medical Laboratory，Shenzhen 518000，Guangdong，China;

4.Luohu District Traditional Chinese Medicine Hospital，Shenzhen 518000，Guangdong，China）

Abstract：Objective? To analyze the detection results of deafness genes in neonates born in 3 hospitals in Guangming district of Shenzhen， so as to understand the mutation carrying status of deafness genes in newborns in Shenzhen Guangming district.Methods? Collecting 16249 blood samples of newborns born from May 2017 to November 2018 in Guangming District， Shenzhen， and use PCR + flow-through hybridization to detect 4 common deafness susceptibility genes （GJB2， GJB3， SLC26A4， 12SrDNA）， among which the specimens collected from May 2017 to March 2018 detected 9 mutation sites of 4 common deafness genes， and the specimens collected from March to November 2018 detected 15 mutation sites of 4 common genes，the mutation carrying rate and distribution of mutation sites of hereditary deafness genes in newborns were analyzed.Results? Among 16249 newborns， 575 cases with mutation deafness genes were detected， with a total positive rate of 3.53%， of which 8448 samples were detected for 9 sites of 4 genes， 262 samples were mutated， and the mutation rate was 3.10%; 4 genes were detected 15 the number of loci samples was 7801， the mutation samples were 313， and the mutation rate was 4.01%. Among all the mutated genes， GJB2 gene （1.96%） and SLC26A4 gene had the highest mutation rate （1.21%）.Conclusion? The mutation rate of hereditary deafness genes in the Guangming District of Shenzhen City is lower than the national average. The genetic mutations are mainly GJB2 gene and SLC26A4 gene. Enlarging the detection of gene loci is helpful to reduce the screening rate; early detection and early intervention can reduce the occurrence of deafness.

Key words：Hereditary deafness;Neonate;Gene mutation;Gene chip;Screening

我國每年將新增約2萬名聽力障礙新生兒，占每年出生新生兒的1%，其中60%與遺傳因素有關(guān)[1]。新生兒常見耳聾基因突變篩查已在全國多地區(qū)展開[2，3]。研究顯示，雖然目前已知90多種基因與NSHL有關(guān)，但在我國，80%NSHL患者主要涉及以下4種致聾基因：GJB2、GJB3、SLC26A4、線粒體12SrRNA[4]。通過大規(guī)模新生兒耳聾基因篩查，可以了解區(qū)域耳聾基因致病位點(diǎn)的分布和發(fā)病情況，并給予早期有效的防治措施，目的是早發(fā)現(xiàn)、早干預(yù)、早治療[5]。本研究對深圳市光明區(qū)出生的16249例新生兒的四種耳聾易感基因的檢測結(jié)果進(jìn)行了分析。

1對象與方法

1.1研究對象? 以2017年5月～2018年11月在中國科學(xué)院大學(xué)深圳醫(yī)院（東院區(qū)、西院區(qū)）、深圳市寶田醫(yī)院三家醫(yī)院出生的16249例新生兒為研究對象，其中男性63090例，女性為46841。經(jīng)同監(jiān)護(hù)人知情、同意、自愿參與調(diào)查，并由監(jiān)護(hù)人認(rèn)真閱讀并簽署新生兒耳聾基因篩查知情同意書。

1.2標(biāo)本采集? 新生兒出生后72 h后，充分哺乳8次后采集足跟末梢血3個血斑，每個血斑直徑大于8 mm，自然晾干后置于封口袋內(nèi)，密閉保存于2 ℃～8 ℃冰箱內(nèi)。

1.3方法? 按照耳聾基因檢測試劑盒（PCR+導(dǎo)流雜交法）的操作說明書，對2017年5月～2018年3月所收標(biāo)本檢測4個常見耳聾易感基因（GJB2、SLC26A4、線粒體DNA和GJB3）的9個突變位點(diǎn)，包括235delC、176del16、35delG、299del AT、2168A>G、IVS7-2A>G、1555A>G、1494C>T、538C>T;2018年3～11月所收集標(biāo)本檢測4個常見的耳聾易感基因的15個突變位點(diǎn)，除上述9個位點(diǎn)，還包括IVS15+5G>A、1975G>C、1174A>T、1226G>A、1229C>T、2027T>A。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法? 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件對檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用（%）表示，組間比較采用？字2檢驗(yàn)，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1新生兒遺傳性耳聾基因突變攜帶率? 16249例新生兒中共檢出遺傳性耳聾基因突變575例，攜帶率為3.53%。其中檢測4基因9位點(diǎn)樣本數(shù)為8448例，突變樣本為262例，突變率為3.10%;檢測4基因15位點(diǎn)樣本數(shù)為7801例，突變樣本為313例，突變率為4.01%，見表1。

2.2新生兒遺傳性耳聾基因突變位點(diǎn)分布情況? 16249例新生兒共檢測位點(diǎn)總數(shù)為193047，突變位點(diǎn)總數(shù)為581，其中4個基因9個位點(diǎn)檢測出266個突變位點(diǎn)，4個基因15個位點(diǎn)檢測315個突變位點(diǎn)，見表2。581個突變位點(diǎn)中，GJB2基因突變319例，突變率1.96%（319/16249），高于SLC26A4的1.21%（196/16249）、GJB3的0.098%（16/16249）、線粒體12SrRNA的0.31%（50/575）、復(fù)合基因位點(diǎn)突變的0.037%（6/16249），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。其中基因突變位點(diǎn)頻率最高的為GJB2基因的235delC雜合突變，突變率為1.63%（265/16249），其次為SLC26A4基因的IVS7-2A>G雜合突變，突變率為0.91%（148/16249）及線粒體12SrRNA基因的1555A>G突變，突變率為0.30%（49/16249），見表3、表4。共有復(fù)合基因位點(diǎn)突變6例，突變率為0.037%，見表5。

3討論

耳聾是臨床常見的感覺功能障礙性疾病，嚴(yán)重影響人類生活質(zhì)量，我國患聽力障礙人數(shù)占我國殘障人群14%，而作為新生兒較常見的一種出生缺陷，聽力障礙對新生兒語言發(fā)育系統(tǒng)產(chǎn)生直接的影響，對新生兒身心健康有著重要的影響，同時會增加社會和家庭負(fù)擔(dān)[6]。遺傳性耳聾目前沒有理想的治療措施，新生兒耳聾基因篩查，能夠早期發(fā)現(xiàn)攜帶耳聾基因突變的高危新生兒，通過早期用藥干預(yù)及生活指導(dǎo)，可預(yù)防和避免耳聾的發(fā)生，降低耳聾的發(fā)生率。

本研究共有16249例新生兒進(jìn)行耳聾基因篩選，共篩查出575例新生兒攜帶耳聾基因突變，總攜帶率為3.53%（575/16249）。其中4基因9位點(diǎn)篩查出突變樣本為262例，突變率為3.10%;4基因15位點(diǎn)篩查出突變樣本為313例，突變率為4.01%。相對于9項(xiàng)遺傳性篩查，15項(xiàng)遺傳篩查增加了6項(xiàng)中國人群突變頻率相對較高的位點(diǎn)，突變檢測率增加0.91%，但仍低于深圳市南山區(qū)（4.31%）、福田區(qū)（4.47%）及龍華區(qū)（4.92%）新生兒耳聾基因突變位點(diǎn)攜帶率[7，8]，低于全國基因突變水平的4.39%?？紤]可能與檢測基因位點(diǎn)數(shù)量不同有關(guān)，上述文獻(xiàn)中采用飛行時間質(zhì)譜檢測技術(shù)檢測常見的4個耳聾基因20個位點(diǎn)，因此，擴(kuò)大基因位點(diǎn)數(shù)量的檢測，有利于降低漏篩率，同時早發(fā)現(xiàn)、早干預(yù)，減少耳聾發(fā)生。

GJB2基因是常染色體隱形遺傳，主要編碼跨膜蛋白Cx26，廣泛存在耳蝸的上皮和結(jié)締組織中。Cx26蛋白與其他蛋白形成縫隙連接通道，主要參與內(nèi)耳淋巴液鉀離子的循環(huán)。GJB2基因突變，編碼的Cx26蛋白功能異常，引起鉀離子的回流障礙，影響耳蝸毛細(xì)胞的電生理活動，導(dǎo)致聽力功能損傷[9]。GJB2基因突變引起的聽力損失主要是先天性的，表現(xiàn)為雙耳對稱、中至重度的感音神經(jīng)性聽力障礙。GJB2基因中235delC雜合突變在中國人群中的主要突變位點(diǎn)[10]。本次篩查出318例新生兒攜帶GJB2基因雜合突變，攜帶率為1.96%。由于GJB2為常染色體隱形基因，攜帶者僅攜帶一個致病突變，并不發(fā)病，建議定期隨訪和檢測。本研究篩查1例235delC純和突變，GJB2基因純合突變患者的聽力損失較復(fù)合雜合突變患者重，一般表現(xiàn)為極重度聽力障礙。因其病變部位在耳蝸，植入人工耳蝸具有良好的干預(yù)效果[11]。該患兒可早期通過植入人工耳蝸避免語言發(fā)育受損，從而改善生活質(zhì)量。

GJB3基因是我國夏家輝院士[12]第一個定位克隆的耳聾相關(guān)基因，GJB3基因突變可引起常染色體顯性或隱性遺傳性NSHL。該基因編碼連接蛋白Cx31，存在于相鄰細(xì)胞的細(xì)胞膜內(nèi)，使相鄰細(xì)胞交換離子及其代謝物，維持內(nèi)耳耳蝸內(nèi)穩(wěn)態(tài)，其突變表現(xiàn)為出生時聽力正常，主要引起后天高頻感音神經(jīng)性耳聾。該基因突變率在中國攜帶率較低，本研究有16例GJB3基因538C>T突變的新生兒，應(yīng)高度重視并定期跟蹤隨訪，及時治療。

SLC26A4基因?yàn)槌Ｈ旧w隱形遺傳，主要編碼pendrin跨膜蛋白，該基因突變導(dǎo)致pendrin蛋白合成及功能異常，影響碘/氯離子運(yùn)輸，引起大前庭水管綜合征，顱內(nèi)壓增高引起耳蝸前庭內(nèi)環(huán)境增大，損傷內(nèi)耳毛細(xì)胞。SLC26A4基因最常見的突變類型為IVS7-2A>G，本研究中IVS7-2A>G突變率為0.91%，僅次于235delC的突變率1.63%，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[13]?；純撼錾鷷r多為聽力正常，但在頭部受到劇烈撞擊、噪音或感冒后，逐漸出現(xiàn)聽力損傷。本研究篩查出196例攜帶SLC26A4基因雜合突變的新生兒，攜帶率為1.21%，定期跟蹤隨訪。

線粒體12SrRNA為母系遺傳，線粒體基因突變與耳毒性藥物相關(guān)性耳聾有關(guān)。該基因1494C>T和1555A>G位點(diǎn)突變導(dǎo)致線粒體DNA的空間結(jié)構(gòu)改變，暴露氨基糖苷類藥物的結(jié)合位點(diǎn)暴露，藥物與該基因位點(diǎn)結(jié)合后，可導(dǎo)致耳蝸毛細(xì)胞功能的損傷，導(dǎo)致耳聾的發(fā)生。新生兒攜帶12SrRNA基因突變，出生時大多無聽力障礙，但在使用氨基糖苷類藥物后可能出現(xiàn)不可逆性的聽力損傷。因此，本研究中44例攜帶12SrRNA基因突變的新生兒應(yīng)避免使用氨基糖苷類藥物，降低耳聾發(fā)生率。

本次篩查出6例新生兒攜帶GJB2和SLC26A4基因復(fù)合雜合突變，研究表明[14]，GJB2和SLC26A4多雜合突變引起的新生兒聽力損失呈現(xiàn)異質(zhì)性，新生兒出生可表現(xiàn)為單耳輕度異常，也可表現(xiàn)為雙耳中度、重度感音神經(jīng)性耳聾，或者新生兒出生時聽力正常，而出現(xiàn)遲發(fā)性耳聾。本研究6例攜帶多基因突變新生兒應(yīng)引起高度重視，進(jìn)行宣教，定期監(jiān)測和隨訪，預(yù)防耳聾發(fā)生。

目前我國新生兒耳聾基因篩查仍有局限性，對于篩查“陰性”者，并不能除外未攜帶耳聾相關(guān)基因突變。引起NSHL基因廣泛，新生兒篩查僅僅包括常見四個耳聾基因，仍有幾十個與遺傳性耳聾有關(guān)基因尚未篩查。目前常見的遺傳性耳聾檢測方法包括Sanger法、基因芯片法、限制性酶切法、變性高效液相色譜法、飛行時間質(zhì)譜法及高通量測序技術(shù)等。相信隨著技術(shù)推廣，針對非綜合性遺傳性耳聾篩查會覆蓋多基因多位點(diǎn)在我國廣泛開展，從而更有效的降低耳聾發(fā)病率。

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收稿日期：2020-04-02;修回日期：2020-04-11

編輯/成森

基金項(xiàng)目：深圳市科技創(chuàng)新員會項(xiàng)目（編號：JCYJ20180502163111336）

作者簡介：諶玉佳（1988.12-），女，江西南昌人，博士，主治醫(yī)師，主要從事兒科學(xué)和新生兒科科研工作

通訊作者：吳本清（1965.10-），男，湖南邵陽人，博士，主任醫(yī)師，主要從事小兒內(nèi)科臨床與科研工作