超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定氟噻唑吡乙酮及其代謝產(chǎn)物在熱帶水果中的殘留量

張 月*，韓丙軍，李萍萍，黃海珠

(中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院分析測試中心/海南省熱帶果蔬產(chǎn)品質(zhì)量安全重點實驗室，海南?？?571101)

氟噻唑吡乙酮(Oxathiapiprolin)化學(xué)名稱1-(4-[4-[(5RS)-5-(2,6-二氟苯基)-4,5-二氫-1,2-噁唑-3-基]-1,3-噻唑-2-基]-1-哌啶基)-2-[5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]乙酮(CAS號：1003318-67-9，分子式：C24H22F5N5O2S)，是杜邦公司開發(fā)的一種新型哌啶類殺菌劑[1]。其創(chuàng)制于默克公司報道的醫(yī)學(xué)活性化合物(Ⅳ)，經(jīng)高通量篩選發(fā)現(xiàn)具有較好殺菌活性化合物(Ⅴ)，進而優(yōu)化研究發(fā)現(xiàn)了對霜霉病有特效的氟噻唑吡乙酮。該分子結(jié)構(gòu)中活性成分包含噁唑環(huán)、吡唑環(huán)、噻唑環(huán)，能顯著加強對土豆、葡萄、蔬菜等特產(chǎn)農(nóng)作物病害的防治[2，3]。Ju等[4]采用液-質(zhì)檢測中國典型土壤、水和沉積物中的氟噻唑吡乙酮及其代謝產(chǎn)物；張立等[5]采用液相色譜法檢測氟噻唑吡乙酮原藥。超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)具有更高的檢測靈敏度和選擇性，較短的分析時間，已成為檢測各種基質(zhì)中痕量農(nóng)藥的一種強有力的技術(shù)[6 - 12]。目前，未見熱帶水果中氟噻唑吡乙酮和代謝產(chǎn)物(IN-E8S72)殘留量檢測的報道，而國際上對水果中氟噻唑吡乙酮和代謝產(chǎn)物殘留量的測定方法也沒有標準。熱帶水果營養(yǎng)豐富，富含糖類、有機酸、膳食纖維以及各種維生素[13 - 16]，基質(zhì)相對復(fù)雜，采用常規(guī)的色譜檢測有一定的難度。

本文采用UPLC-MS/MS同時檢測熱帶水果中氟噻唑吡乙酮及其代謝產(chǎn)物(IN-E8S72)殘留量。該方法簡便，靈敏度和準確度均能滿足農(nóng)藥殘留檢測的要求。

1 實驗部分

1.1 主要儀器、試劑及材料

ACQUITY UPLC H-Class超高效液相色譜儀(美國，Waters公司)；API 4000+三重四極桿質(zhì)譜儀(美國，AB Sciex公司)；IKAT25高速分散勻漿機(上海萬捷科技有限公司)；GL-10C型高速冷凍離心機(上海安亭科學(xué)儀器廠)。

農(nóng)藥標準物質(zhì)：氟噻唑吡乙酮(純度98.5%)，IN-E8S72(純度：99.8%)，均由先正達(中國)投資有限公司提供。乙腈、甲酸(色譜純)，NaCl(分析純)。

實驗選擇典型的熱帶水果：荔枝、芒果、菠蘿和香蕉為代表樣品。

1.2 實驗方法

1.2.1 標準溶液的配制分別稱取0.01 g的農(nóng)藥標準物質(zhì)，置于10 mL容量瓶中，用乙腈溶液定容，配制成1 000 μg/mL儲備液，取0.1 mL儲備液于10 mL容量瓶中，用乙腈溶液定容，配成10 μg/mL標準溶液。

1.2.2 基質(zhì)混合標準工作溶液配制農(nóng)藥基質(zhì)標準工作溶液是用樣品空白溶液分別配制0.001、0.005、0.01、0.05、0.1 μg/mL的基質(zhì)標準工作溶液,用于繪制標準工作曲線?；|(zhì)標準工作溶液現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.2.3 樣品處理分別稱取10 g荔枝、芒果、菠蘿和香蕉樣品于50 mL離心管中，加入10 mL乙腈，0.1 mL甲酸，放置10 min后勻漿2 min，加入7 g NaCl，在10 000 r/min下離心5 min，靜止30 min，取上層清液過0.2 μm微孔濾膜，供UPLC-MS/MS測定。同時按上述步驟制備樣品空白提取液,用于配制基質(zhì)混合標準工作溶液。

1.2.4 液相色譜-質(zhì)譜條件Waters ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱(50 mm×2.1 mm,1.7 μm)。流動相：A為0.01%甲酸水溶液，B為0.05%甲酸甲醇溶液。流動相梯度洗脫：0～0.1 min,95%A;0.1～3.5 min,1%A:3.5～5.0 min,95%。柱溫：35 ℃；進樣體積：5 μL。

質(zhì)譜條件：氟噻唑吡乙酮采用電噴電離正離子掃描(ESI+)，以多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式檢測，IN-E8S72采用ESI-電離方式，多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式檢測。碰撞氣(CAD)：6 psi；氣簾氣(CUR)：20 psi；霧化氣(GS1，GS2)：50 psi；噴霧電壓(IS)：5 500 V；離子源溫度：600.0 ℃。優(yōu)化的碰撞能量(CE)、錐孔電壓(DP)等質(zhì)譜參數(shù)見表1。

表1 串聯(lián)質(zhì)譜監(jiān)測模式下待測化合物的檢測條件

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜-質(zhì)譜條件優(yōu)化

本研究中采用乙腈為提取溶劑，通過實驗發(fā)現(xiàn)在乙腈中加入甲酸，可以增強提取效果，提高提取率，同時流動相采用0.01%甲酸水溶液，可以改善峰形。因此，選擇在乙腈中加入甲酸為提取溶劑。

以0.1 μg/mL氟噻唑吡乙酮和IN-E8S72為研究對象。采用流動注射泵注射，將0.1 μg/mL的2種農(nóng)藥標準溶液在ESI+和ESI-模式下進行全掃描以選擇適當?shù)姆肿与x子峰和電離方式。結(jié)果表明：氟噻唑吡乙酮在ESI+全掃描模式下，[M+H]+為最強峰，IN-E8S72在ESI-全掃描模式下，[M-H]-為最強峰，分別對2種農(nóng)藥的分子離子峰進行二級質(zhì)譜分析(子離子掃描)，得到碎片離子信息。

2.2 基質(zhì)效應(yīng)

基質(zhì)是指樣品中被分析物以外的組分，基質(zhì)常常對分析物的分析過程有顯著的干擾，并影響分析結(jié)果的準確性。本文配制基質(zhì)混合標準工作溶液，繪制基質(zhì)匹配校正工作曲線，消除基質(zhì)干擾?；|(zhì)不變，建立校正曲線。計算基質(zhì)效應(yīng)(ME%)[17]，結(jié)果見表2。

2.3 線性范圍和檢出限

在本方法所確定的色譜、質(zhì)譜條件下，對2種農(nóng)藥的線性范圍進行了測定，并以峰面積(Y)對應(yīng)的農(nóng)藥質(zhì)量濃度(X,μg/L)作圖，2種農(nóng)藥的濃度與對應(yīng)的峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。2種農(nóng)藥的檢出限(LOD)、定量限(LOQ)、線性范圍和相關(guān)系數(shù)見表2。表2表明：2種農(nóng)藥在荔枝、芒果、菠蘿和香蕉樣品中均有基質(zhì)影響，其中IN-E8S72在芒果、菠蘿和香蕉中是基質(zhì)增強，在荔枝中為基質(zhì)減弱，氟噻唑吡乙酮在4種基質(zhì)中均為基質(zhì)減弱。

表2 氟噻唑吡乙酮及IN-E8S72的基質(zhì)標準曲線、相關(guān)系數(shù)、檢出限、定量限及基質(zhì)效應(yīng)

2.4 方法的精密度和準確度

分別制備3組荔枝、芒果、菠蘿和香蕉空白樣品，每組5個重復(fù)。在空白樣品中分別添加這2種農(nóng)藥的混合標準溶液，添加水平分別為0.001、0.01和0.1 mg/kg，每個濃度做5個平行，計算添加回收率和相對標準偏差(RSD)，結(jié)果見表3。該方法具有較好的精密度和準確度，符合農(nóng)藥殘留分析要求。

表3 樣品中的回收率和相對標準偏差(n=5)

2.5 實際樣品的檢測

按本研究建立的方法對市場購買的荔枝、芒果、菠蘿和香蕉樣品各10份進行檢測。結(jié)果表明：荔枝樣品檢出氟噻唑吡乙酮，最高濃度為6.28×10-3mg/kg；芒果樣品檢出氟噻唑吡乙酮，最高濃度為4.25×10-3mg/kg；菠蘿和香蕉樣品均沒有檢出氟噻唑吡乙酮。IN-E8S72在4種基質(zhì)中均沒有檢出。

3 結(jié)論

建立了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜同時檢測熱帶水果中的氟噻唑吡乙酮及其代謝產(chǎn)物(IN-E8S72)的分析方法。方法的靈敏度、準確度和精密度均能滿足殘留分析的要求。同時應(yīng)用該方法，檢測市場中隨機抽取的荔枝、芒果、菠蘿和香蕉樣品，結(jié)果有檢出但檢出量均低于0.01 mg/kg。此方法的建立為水果中農(nóng)藥殘留的檢測研究提供了方法參考。