老鴉珠提取物對草酸鈣型腎結(jié)石形成的抑制作用研究

李先梅，肖金龍，勞斌章，歐曉鳳，謝紹輝，李大寧，張劍光，陸 洋

（欽州市衛(wèi)生學(xué)校，廣西 欽州 535000）

薏苡Coix lacryma.jobi.Linn.為禾本科薏苡屬一年生或多年生草本，在廣西各地均有分布，資源非常豐富，其種仁和根均可藥用。薏苡仁為薏苡的成熟種仁，具有健脾利濕、除痹止瀉、清熱排膿、健胃解痙等功效，用于治療水腫、小便不利、脾虛泄瀉等［1］。老鴉珠為薏苡的干燥根，民間常用于治療泌尿系統(tǒng)結(jié)石，取得了一定的效果，但關(guān)于其治療泌尿系統(tǒng)結(jié)石的藥理作用研究目前尚無報道。本文通過復(fù)制泌尿系統(tǒng)結(jié)石動物模型，檢測小鼠尿液中草酸和鈣的含量，以及在顯微鏡下觀察草酸鈣晶體在小鼠腎臟沉積的情況，初步研究老鴉珠提取物對草酸鈣型腎結(jié)石小鼠的影響。

1 實驗材料

1.1 藥物 老鴉珠采集于廣西浦北，由廣西中醫(yī)藥大學(xué)劉壽養(yǎng)副教授鑒定為禾本科薏苡Coix lacryma.jobi.Linn.的干燥根。

1.2 動物 昆明種雄性小鼠，體質(zhì)量18～22 g，由廣西醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，許可證號：SCXK桂2009-0002。

1.3 試劑 凈石靈膠囊（吉林省銀諾克藥業(yè)有限公司，批號20160103）；溴百里草酚藍（國藥集團化學(xué)試劑有限公司，批號20180228）；鹽酸（廉江市愛廉化試劑有限公司，批號20171105）；氫氧化鈉（國藥集團化學(xué)試劑有限公司，批號20180131）；甲基紅（國藥集團化學(xué)試劑有限公司，批號20170804）；鉻酸鉀（國藥集團化學(xué)試劑有限公司，批號20171201）；氧氯化鋯（天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所，批號20170221）；鉻黑T（天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所，批號20180308）；鈣羧酸（國藥集團化學(xué)試劑有限公司，批號20180104）。

1.4 儀器 760CRT型雙光束紫外分光光度計（上海安亭科學(xué)儀器廠）；FA2204B型電子天平（上海天美天平儀器有限公司）；DM2000型LED顯微鏡（LEI?CA，德國）。

2 實驗方法

2.1 老鴉珠提取物的制備 取老鴉珠適量，加水8倍，煎煮3次，第一次煎煮1 h，第二、三次各煎煮0.5 h，過濾，合并濾液，濃縮至稠膏，備用。

2.2 陽性對照組灌胃溶液的制備 取凈石靈膠囊適量，臨用前加水溶解，混勻，作為陽性對照藥。

2.3 動物分組及給藥 參照文獻［2］采用誘石液（0.75%乙二醇+0.75%氯化銨）制作動物結(jié)石模型。取雄性昆明種小鼠60只，隨機分為6組：空白對照組，模型對照組，陽性對照組（予凈石靈膠囊灌胃，劑量為3.75 g/kg），老鴉珠高、中、低劑量組（予老鴉珠提取物灌胃，劑量為60 g/kg、30 g/kg、15 g/kg），10只/組?？瞻讓φ战M、模型對照組灌胃給予自來水，其余各組灌胃給予相應(yīng)的藥物，1次/天，給藥容量為20 ml/kg，連續(xù)4周。

2.4 觀察指標(biāo)及檢測 參照尿液中草酸、鈣含量的測定方法［3］，分別于第1、2、3、4周測定小鼠尿液中草酸含量及鈣含量；采用HE染色，于顯微鏡下觀察草酸鈣晶體在小鼠腎臟中的分布情況，參照判定標(biāo)準(zhǔn)［4］，對結(jié)晶進行分級。

2.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 19.0軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間差異用t檢驗（方差不齊時采用t檢驗校正公式）；等級資料采用Ridit分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié) 果

3.1 老鴉珠提取物對草酸鈣型腎結(jié)石小鼠尿液中草酸含量的影響 見表1。

表1 老鴉珠提取物對草酸鈣型腎結(jié)石小鼠尿液中草酸含量的影響 （±s）

表1 老鴉珠提取物對草酸鈣型腎結(jié)石小鼠尿液中草酸含量的影響 （±s）

注：與空白對照組比較，①P<0.01；與模型對照組比較，②P<0.01

組 別空白對照組模型對照組陽性對照組老鴉珠高劑量組老鴉珠中劑量組老鴉珠低劑量組尿液中草酸含量（μmol/ml）第4周0.011±0.003 0.040±0.008①0.024±0.008②0.026±0.004②0.024±0.005②0.023±0.007②n 劑量（g/kg）10 10 10 10 10 10——3.75 60 30 15第1周0.006±0.001 0.022±0.001①0.010±0.001②0.009±0.002②0.009±0.001②0.008±0.001②第2周0.008±0.002 0.020±0.008①0.010±0.005②0.010±0.003②0.010±0.005②0.009±0.003②第3周0.010±0.003 0.031±0.005①0.015±0.004②0.016±0.004②0.015±0.004②0.015±0.002②

表1結(jié)果表明，與空白對照組比較，模型對照組小鼠尿液中草酸的含量明顯升高（P<0.01）；與模型對照組比較，老鴉珠高、中、低劑量組及陽性對照組均能明顯降低小鼠尿液中草酸的含量（P<0.01）。

3.2 老鴉珠提取物對草酸鈣型腎結(jié)石小鼠尿液中鈣含量的影響 見表2。

表2 老鴉珠提取物對草酸鈣型腎結(jié)石小鼠尿液中鈣含量的影響 （±s）

表2 老鴉珠提取物對草酸鈣型腎結(jié)石小鼠尿液中鈣含量的影響 （±s）

注：與空白對照組比較，①P<0.01；與模型對照組比較，②P<0.05，③P<0.01

組 別空白對照組模型對照組陽性對照組老鴉珠高劑量組老鴉珠中劑量組老鴉珠低劑量組尿液中鈣含量（μmol/ml）第4周1.00±0.09 1.52±0.15①1.26±0.29②1.30±0.19②1.43±0.21 1.55±0.13 n 劑量（g/kg）10 10 10 10 10 10——3.75 60 30 15第1周0.35±0.15 0.67±0.16①0.75±0.11 0.43±0.15③0.58±0.10 0.63±0.16第2周0.36±0.19 1.14±0.31①0.98±0.25 0.50±0.11③0.93±0.31 1.08±0.18第3周0.54±0.23 1.08±0.34①1.25±0.12 0.52±0.26③0.76±0.20②0.86±0.26

表2結(jié)果表明，與空白對照組比較，模型對照組小鼠尿液中鈣的含量明顯升高（P<0.01）；與模型對照組比較，老鴉珠高劑量組能明顯降低小鼠尿液中鈣的含量，差異有顯著性意義（P<0.05或P<0.01）。

3.3 老鴉珠提取物對草酸鈣型腎結(jié)石小鼠腎臟草酸鈣晶體形成的影響 見圖1、表3。

圖1 老鴉珠提取物對腎結(jié)石小鼠草酸鈣結(jié)晶形成的影響 （×40）

圖1表明，空白對照組小鼠腎小管未見擴張且未見任何草酸鈣晶體沉積。模型對照組小鼠腎臟組織腫脹，表面分布點狀白色結(jié)晶，鏡下見腎小管管腔明顯擴張，腎皮質(zhì)、髓質(zhì)、上皮細(xì)胞明顯腫脹、變性、壞死，草酸鈣晶體主要位于近曲小管和遠(yuǎn)曲小管，皮質(zhì)多于髓質(zhì)，晶體體積大，有明顯慢性炎性細(xì)胞浸潤，細(xì)胞排列不整齊。老鴉珠提取物高、中、低劑量組鏡下觀察草酸鈣晶體主要位于髓質(zhì)部，細(xì)胞腫脹比模型對照組輕，草酸鈣晶體體積小。

表3 各組小鼠腎組織草酸鈣結(jié)晶分級情況 （n=10）

4 討論

正常情況下，腎小管尿液中新生的草酸鈣結(jié)晶很快被尿流沖走，無法停留在腎小管中聚集形成結(jié)石。因此，在結(jié)石形成過程中，草酸鈣結(jié)晶滯留在腎小管內(nèi)是必要的前提條件［5］。而草酸鈣結(jié)晶的滯留會對腎小管造成損傷，會增加草酸鈣結(jié)晶在腎小管的黏附，形成草酸鈣結(jié)石。在本次實驗中，老鴉珠提取物有降低草酸鈣型腎結(jié)石小鼠尿液中草酸及鈣含量的作用（P<0.05或P<0.01），形成的晶體體積小，可減少草酸鈣晶體在小鼠腎臟中的沉積，從而對乙二醇及氯化銨誘導(dǎo)草酸鈣晶體結(jié)石的形成有抑制作用。但該作用是否是通過溶石作用或抑制晶體形成而產(chǎn)生則有待進一步的研究。