不同貯藏方式對四大藥材品質(zhì)的影響

肖淑賢，方玉強，李飛鶴，侯沁文，雷振宏，王玉龍*，王旭峰

(1.山西振東道地藥材開發(fā)有限公司，山西 長治 047100； 2.君安百合倉儲科技(北京)有限公司，北京 100020；3.山西振東制藥股份有限公司，山西 長治 047100； 4.長治學院，山西 長治 047100)

黨參、黃芪、地黃、款冬花均為山西道地藥材，考慮黨參、黃芪等4種藥材在長期貯藏過程中會出現(xiàn)返潮、發(fā)霉、蟲蛀、泛糖、成分降解等問題[1]，品質(zhì)難以長期保持，故研究不同貯藏條件下的四大藥材品質(zhì)影響，具有重要實際意義和實用價值。

低溫和氣調(diào)是國際公認的綠色貯藏技術(shù)，可較好地保持糧食品質(zhì)，抑制糧食有害生物的生長。氣調(diào)貯藏主要應(yīng)用在小麥、稻谷和玉米上，而藥材上應(yīng)用較少。君合百安倉儲科技(北京)有限公司生產(chǎn)的氣調(diào)劑，則是利用物理反應(yīng)，通過增加氮氣，置換出空氣中的氧氣，在包裝袋中形成低氧或絕氧狀態(tài)，降低呼吸消耗，殺滅害蟲，抑制霉菌的生長，從而達到保證藥材品質(zhì)。目前，鮮見對不同的含水量、溫度、貯藏時間、貯藏方式等對黨參有效成分的影響交互研究[2]。本文研究了不同貯藏方式和貯藏時間下，氣調(diào)貯藏、常規(guī)貯藏和密封貯藏3種方式對黨參、黃芪、地黃、款冬花4個藥材貯藏品質(zhì)的影響，為實際生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試樣品

供試黨參、黃芪、地黃、款冬花均由山西振東道地藥材開發(fā)有限公司提供樣品。試驗于2015年3月20日至2017年10月20日在山西振東道地藥材開發(fā)有限公司指定倉庫進行，試驗地海拔1 052 m。

1.2 儀器與試劑

沃特世UPLC高效液相色譜儀；PDA檢測器；Kromasil 100-5-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；C18保護柱(20 mm×4.6 mm，5 μm)；Empower II色譜工作站(美國Waters公司)；高速萬能粉碎機(北京中興偉業(yè)儀器有限公司)；DK-S26電熱恒溫水浴鍋(上海森信實驗儀器有限公司)；電熱鼓風干燥箱 (上海實驗儀器有限公司)；UV-1800紫外-可見分光光度計(上海美譜達儀器有限公司)；超純水儀(上海優(yōu)普超純水公司)；超聲波清洗機(浙江寧波超聲波儀器公司)。

試劑對照品蒼術(shù)內(nèi)酯Ⅲ(20 mg；純度為>98%，上海融禾醫(yī)藥科技有限公司)。甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純，水為超純水。本試驗所用其他試劑均為分析純。

1.3 檢測方法

1.3.1 色譜條件

蒼術(shù)內(nèi)酯Ⅲ色譜柱為Agilent C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相為甲醇∶水(65∶35，V/V)，流速1.0 mL·min-1，檢測波長為220 nm。黨參炔苷色譜柱為Agilent C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相為乙腈∶水(28∶72，V/V)，流速1.0 mL·min-1，檢測波長為267 nm。在選定條件下，色譜峰能達到基線分離，蒼術(shù)內(nèi)酯Ⅲ和黨參炔苷與相鄰色譜峰的分離度大于1.5。

1.3.2 檢測波長選擇

對蒼術(shù)內(nèi)酯Ⅲ及黨參炔苷的甲醇溶液作全波長掃描。結(jié)果顯示，對照品蒼術(shù)內(nèi)酯Ⅲ在220 nm處有最大吸收峰，將蒼術(shù)內(nèi)酯Ⅲ檢測波長定為220 nm，黨參炔苷檢測波長定為267 nm。

1.3.3 線性范圍考察

對照品制備。精密稱取對照品蒼術(shù)內(nèi)酯Ⅲ 6.22 mg，置于100 mL量瓶中，甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得0.062 2 mg·mL-1蒼術(shù)內(nèi)酯Ⅲ溶液，進樣體積分別為1、3、5、7、10、15 μL。以峰面積(y)對進樣量(x)進行回歸，得回歸方程y=44.67x-0.257 1，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 9，以峰面積值(y)對進樣量(x)作圖得到直線，說明蒼術(shù)內(nèi)酯Ⅲ在0.06～1.0 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性。

1.3.4 供試品溶液制備

將黨參藥材粉碎過0.425 mm篩，16種藥材共制樣品粉末16份。

蒼術(shù)內(nèi)酯Ⅲ供試品溶液制備。精密稱取黨參粉末5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL后稱重，超聲處理30 min，冷卻后再稱重，用甲醇補充減失的重量搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25 mL，減壓蒸干，殘渣用甲醇溶解并轉(zhuǎn)至5 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 m)過濾，取續(xù)濾液即得。

黨參炔苷供試品溶液制備。精密稱取黨參粉末0.5 g，加入25 mL甲醇，精密稱重。超聲處理30 min，放冷稱重，加甲醇補足減失的重量。搖勻靜置，取上清液，用微孔濾膜(0.45 μm)過濾，取續(xù)濾液即得。

1.4 處理設(shè)置

以黨參等4種藥材飲片為試驗材料，貯藏方式分為自然存放(C1)、常規(guī)密封(C2)、氣調(diào)密封(C3)3個處理，每處理又設(shè)3個不同貯藏時間6個月(S1)、12個月(S2)、18個月(S3)，裂區(qū)設(shè)計，貯藏方式為主區(qū)，貯藏時間為副區(qū)，共9個處理，每處理重復(fù)3次，具體處理及編號見表1。6個月為從2015年6月至2015年12月，12個月為從2015年6月至2016年6月，18個月為從2015年6月至2016年12月。隨機選取色澤正常、無蟲霉現(xiàn)象的黨參、地黃、黃芪藥材各3.5 kg，用切片機切成0.5 cm左右厚度均勻的片，充分混勻，然后從中隨機稱取3 kg的藥材片，平均分成10份，每份0.3 kg，隨機各選擇3份分別進行氣調(diào)密封(加氣調(diào)劑)、常規(guī)密封和自然存放處理(常規(guī)密封后進行扎眼處理)，剩余1份作為留樣?？疃ㄖ苯臃殖?0份，其后操作如同黨參。

1.5 指標測定

1.5.1 貯存過程中外觀性狀變化分析

氣調(diào)貯存試驗期間，要對各試驗處理藥材的變色、蟲蛀、發(fā)霉、泛油等變質(zhì)現(xiàn)象進行動態(tài)觀察。詳細記錄各試驗處理下的藥材的變質(zhì)程度。變質(zhì)程度大致分為輕微、一般、較重、嚴重4個程度等級，其中個別出現(xiàn)變質(zhì)現(xiàn)象的記錄為輕微等級，1/3以內(nèi)出現(xiàn)的記錄為一般等級，1/2以內(nèi)出現(xiàn)變質(zhì)現(xiàn)象的記錄為較重等級，1/2以上則記錄為嚴重等級。

1.5.2 貯存過程中主要成分變化分析

分別測定氣調(diào)密封、常規(guī)密封和自然存放處理間主要成分含量，比較不同處理對4個藥材主要活性成分的影響。黨參、黃芪、地黃、款冬花檢測指標依次為黨參水分、黨參浸出物、蒼術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、黃芪水分、毛蕊異黃酮葡萄、地黃水分、梓醇、毛蕊花糖苷、款冬花水分、款冬花浸出物。

1.6 數(shù)據(jù)分析

通過Excel 2019、SPSS 19.0軟件進行整理作圖，采用Duncan’s新復(fù)極差法進行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 貯藏前后樣品外觀對比

貯藏6和12個月時，個別黨參樣品輕微變質(zhì)，其他藥材貯藏完好。藥材貯藏前無變色、蟲蛀、發(fā)霉、泛油現(xiàn)象，貯藏后樣品外觀情況見表1。

表1 貯藏后樣品的外觀品質(zhì)

2.2 不同藥材主要成分含量

2.2.1 描述性統(tǒng)計結(jié)果

表2可見，不同貯藏方式和時間處理下的黨參、黃芪、地黃、款冬花主要成分含量和水分主要指標差異不同，變異系數(shù)在2.1%～30.0%，從大到小依次為毛蕊花糖苷(30.0%)>梓醇(14.5%)>款冬酮(13.2%)>毛蕊異黃酮葡萄(11.8%)>黃芪水分(10.9%)>蒼術(shù)內(nèi)酯Ⅲ(10.4%)>款冬花水分(8.5%)>地黃水分(8.2%)>黨參水分(5.9%)>黨參浸出物(2.6%)>款冬花浸出物(2.1%)。

表2 指標的描述性統(tǒng)計結(jié)果

2.2.2 不同貯藏方式和時間對4種藥材水分的影響

方差分析表明，不同貯藏方式和時間交互作用對黨參、黃芪、款冬花、地黃含水分影響差異不同，其中黨參(F=50.917*)、地黃(F=18.811*)、款冬花(F=3.994*)水分含量在0.05水平差異顯著。

采用Duncan’s新復(fù)極差法進行多重比較。由圖1可見，黨參水分在常規(guī)密封和氣調(diào)密封12個月顯著高于6和18個月的水分，而自然存放下水分隨時間的增加而顯著升高。黃芪水分在自然存放與常規(guī)密封6和12個月時差異不顯著，而氣調(diào)密封18個月顯著高于12個月的水分。3種貯藏方式下，地黃水分貯藏6個月顯著高于12和18個月。自然存放與氣調(diào)密封貯藏6和12個月時款冬花水分差異均不顯著，常規(guī)密封貯藏6個月的水分含量顯著高于12個月。

2.2.3 不同貯藏方式和時間對4種藥材含量的影響

圖2表明，自然存放條件下，黨參浸出物隨著時間的增加呈持續(xù)下降趨勢，但差異不顯著；常規(guī)密閉條件下，黨參浸出物表現(xiàn)出先增后降的趨勢，但3個時間段浸出物差異不顯著；氣調(diào)貯藏下黨參浸出物先增后降，貯藏12個月與6和18個月間差異顯著。隨著貯藏時間的增加，3種貯藏方式下的黨參蒼術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、浸出物含量均有所下降，但均達藥典標準，所以貯藏時間不宜超過18個月。

圖2 不同貯藏方式和時間對4種藥材成分含量的影響

款冬花在3種貯藏方式下貯藏6個月時，款冬酮較貯藏前有所降低，且均低于藥典標準0.07%，貯藏12個月時款冬酮含量接近或高于藥典標準。黃芪自然存放和常規(guī)密封12個月的毛蕊異黃酮葡萄顯著高于18個月，而氣調(diào)密封貯藏下毛蕊異黃酮葡萄的差異不顯著。地黃梓醇不同貯藏時間和方式間差異均不顯著。3種貯藏方式下，地黃貯藏6和12個月的毛蕊花糖苷差異不顯著，貯藏18個月時，氣調(diào)密封和常規(guī)密封的地黃毛蕊花糖苷顯著高于自然存放。

2.2.4 相關(guān)性

相關(guān)性分析見表3，貯藏時間與黃芪毛蕊異黃酮葡萄呈顯著負相關(guān)，與地黃水分和款冬花水分呈極顯著負相關(guān)，與黨參水分、款冬花的款冬酮呈極顯著正相關(guān)。貯藏方式與地黃水分呈顯著正相關(guān)。黨參浸出物與蒼術(shù)內(nèi)酯Ⅲ呈顯著正相關(guān)。黨參水分與地黃水分呈顯著負相關(guān)，與款冬花水分呈極顯著負相關(guān)，與款冬酮呈極顯著正相關(guān)。

柱間無相同小寫字母表示組間差異顯著(P<0.05)，圖2同。圖1 貯藏方式和時間對4種藥材水分含量的影響

表3 各指標的相關(guān)性

3 小結(jié)

黨參藥材含水量的多少，是影響其貯藏過程中品質(zhì)變化的主要因素，對黨參藥材發(fā)生霉變、蟲蛀、泛糖、有效成分降低、外觀品質(zhì)改變等影響較為明顯[3]。晉小軍[4]研究發(fā)現(xiàn)，黨參含水量低于15%時貯藏是安全的；當含水量超過17%～18%時，貯藏2個月即開始霉變；含水量繼續(xù)升高時，不到10 d即發(fā)生霉變。陳瞾等[5]也指出，真空貯藏黨參的最高含水量控制在13%以下可有效防止霉變的發(fā)生。中藥材含水量越高，蟲蛀現(xiàn)象就越嚴重，如果把含水量控制在一定范圍內(nèi)，即可抑制蟲蛀或減少蟲蛀的發(fā)生[6]。黨參含糖量高、貯存條件不適宜時，糖及糖酸物質(zhì)可被分解，產(chǎn)生糖醛及其類似化合物，而出現(xiàn)顏色變深、質(zhì)地變軟和糖分外滲等現(xiàn)象[6]。禹娟紅[2]研究表明，黨參藥材宜貯藏于通風干燥處，安全相對濕度在65%～75%，安全含水量在10%～13%，而2015版藥典規(guī)定含水量在16%以下[7]。

本研究發(fā)現(xiàn)，不同貯藏方式和貯藏時間交互作用下，4種藥材含水量存在差異。黨參水分在自然存放、常規(guī)密封、氣調(diào)密封3種貯藏方式下的不同貯藏期間均有顯著差異，常規(guī)密封和氣調(diào)密封貯藏12個月顯著高于6和18個月的水分，自然存放狀態(tài)下黨參的水分隨時間的增加而升高，但均低于安全含水量13%，常規(guī)密封和氣調(diào)密封貯藏更利于保持藥材水分穩(wěn)定。黃芪水分在自然存放與常規(guī)密封6和12個月時差異不顯著，氣調(diào)密封18個月顯著高于12個月的水分。3種貯藏方式下，貯藏6個月的地黃水分顯著高于12和18個月，地黃貯藏12個月時，自然存放、常規(guī)密封方式水分最低，貯藏18個月時的水分較貯藏前依次降低30.97%、32.64%、27.73%，氣調(diào)密封降低最少?？疃ㄋ仲A藏6和12個月時，3種貯藏方式差異均不顯著，隨著時間增加水分依次降低。

自然存放條件下，黨參浸出物隨著時間的增加呈持續(xù)下降趨勢，但差異不顯著；常規(guī)密閉條件下，黨參浸出物表現(xiàn)出先增后降的趨勢，但3個時間段浸出物差異不顯著；氣調(diào)貯藏下黨參浸出物先增后降，貯藏12個月與6和18個月間差異顯著。隨著貯藏時間的增加，3種貯藏方式下的黨參蒼術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、浸出物含量均有所下降，但均達藥典標準，所以貯藏時間不宜超過18個月。

在自然存放、常規(guī)密封狀態(tài)下，貯藏12個月的黃芪毛蕊異黃酮葡萄顯著高于貯藏18個月，與氣調(diào)貯藏方式的毛蕊異黃酮葡萄差異不顯著。自然存放狀態(tài)下，黃芪毛蕊異黃酮葡萄較氣調(diào)密封狀態(tài)下降的更快，所以適宜采用氣調(diào)密封貯藏，貯藏時間至少為18個月。

地黃梓醇不同貯藏時間和方式間差異均不顯著。3種貯藏方式下，地黃貯藏6和12個月的毛蕊花糖苷差異不顯著，貯藏18個月時，氣調(diào)密封和常規(guī)密封的地黃毛蕊花糖苷顯著高于自然存放。

款冬花貯藏6個月時，3種貯藏方式的款冬酮低于藥典標準，可能與夏季高溫天氣有關(guān)，所以款冬花冬季采收后自然存放和氣調(diào)貯藏均不宜超過6個月。貯藏期影響藥材品質(zhì)的外界因素除溫度、濕度外，還有光照、空氣、微生物、害蟲等8]。款冬花藥材品質(zhì)受貯藏方式、水分和貯藏期等多種因素影響，在貯藏過程中，款冬酮含量不達藥典標準還需進一步研究。