呼吸道合胞病毒核酸分型檢測(cè)性能驗(yàn)證

俞敏

摘 要：呼吸道合胞病毒核酸分型檢測(cè)已經(jīng)成為患兒診斷、治療及預(yù)后情況的重要檢測(cè)手段。在文章中，將采用實(shí)驗(yàn)分析的方法，對(duì)呼吸道合胞病毒核酸分型檢測(cè)性能進(jìn)行評(píng)估，希望能為指導(dǎo)臨床工作提供一定的支持。

關(guān)鍵詞：呼吸道合胞病毒;核酸分型檢測(cè);性能驗(yàn)證

呼吸道合胞病毒（Respiratory Syncytial Virus Pneumonia，RSV）是兒童呼吸道感染的主要病原體，可引起間質(zhì)性肺炎及毛細(xì)支氣管炎?；純喊l(fā)病后臨床常表現(xiàn)為輕度的中耳炎或者上呼吸道感染，隨著病情的發(fā)展，可演變?yōu)橄潞粑栏腥镜?，?yán)重的會(huì)危及患兒生命，因此需要尋找一種能夠有效診斷呼吸道合胞病毒的方法，保證患兒能夠得到及時(shí)的診斷和治療。

1 ? ?性能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

1.1 ?實(shí)驗(yàn)材料選擇

以某醫(yī)院于2018年4月份提供的咽拭子樣本為研究對(duì)象，樣本在經(jīng)過(guò)免疫熒光法抗原分型檢測(cè)后，發(fā)現(xiàn)抗原檢測(cè)為陽(yáng)性的樣本數(shù)為20份，抗原檢測(cè)為陰性的樣本數(shù)為20份，其中呼吸道合胞病毒感染患者在經(jīng)過(guò)抗病毒治療有效后，檢測(cè)結(jié)果為陰性的患者無(wú)病毒感染癥狀。

1.2 ?實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 ?符合率驗(yàn)證

向咽拭子標(biāo)本中添加500 μL生理鹽水進(jìn)行渦旋洗脫，相關(guān)試劑為上海之江生物科技有限公司生產(chǎn)的全自動(dòng)核酸提取儀及其配套試劑盒，按照操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。使用RSV分型核酸檢測(cè)試劑盒以及熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)儀測(cè)量核酸，其中的基本操作程序均按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

從患者的咽拭子中提取核酸，檢測(cè)核酸AB分型以及陰陽(yáng)分型的情況，記錄檢測(cè)結(jié)果;擴(kuò)增產(chǎn)物送至生物醫(yī)藥科技有關(guān)公司做高通量測(cè)量。測(cè)量結(jié)果與美國(guó)國(guó)立生物技術(shù)信息中心（National Center for Biotechnology Information，NCBI）標(biāo)準(zhǔn)序列進(jìn)行對(duì)比，根據(jù)對(duì)比結(jié)果判斷是否滿足呼吸道合胞病毒分型標(biāo)準(zhǔn)。在得到測(cè)量試劑盒的測(cè)試結(jié)果與測(cè)序結(jié)果后，判斷精準(zhǔn)度，記錄測(cè)量結(jié)果的符合率。在本次研究中，以測(cè)序結(jié)果為正確結(jié)果，當(dāng)結(jié)果顯示分型以及測(cè)試結(jié)果分型符合率大于等于90%時(shí)就可以認(rèn)為合格[1]。

1.2.2 ?驗(yàn)證精密度

選擇一份呼吸道合胞病毒A型與B型的陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行混合，在稀釋到CT值呈弱陽(yáng)性之后，配置一份呼吸道合胞病毒A型與B型核酸檢測(cè)結(jié)果為陰性的樣本，每次測(cè)量4次，連續(xù)測(cè)量5天后共獲得20次結(jié)果，若結(jié)果為陽(yáng)性則記錄CT值，檢測(cè)結(jié)果陰性與陽(yáng)性的符合率超過(guò)90%，且陽(yáng)性標(biāo)本中批內(nèi)與批間CT值的CV值≤5%的情況下判定為合格。

2 ? ?實(shí)驗(yàn)結(jié)果研究

2.1 ?符合率檢驗(yàn)

在本次研究中，發(fā)現(xiàn)20份陽(yáng)性樣本的標(biāo)本分型結(jié)果與測(cè)序結(jié)果的分型是相同的，其中包括A型分型結(jié)果13例，B型分型結(jié)果7例，與測(cè)試結(jié)果相比，符合率達(dá)到100%，明顯超過(guò)了90%的準(zhǔn)確度標(biāo)準(zhǔn)，證明本次驗(yàn)證結(jié)果順利通過(guò)。

2.2 ?精密度驗(yàn)證結(jié)果

在本次實(shí)驗(yàn)中，精密度的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示。

從表1的相關(guān)數(shù)據(jù)可以發(fā)現(xiàn)，從第1天到第5天的驗(yàn)證結(jié)果均小于5%，因此認(rèn)為驗(yàn)證結(jié)果是通過(guò)的。

3 ? ?研究結(jié)果分析

呼吸道合胞病毒是引起兒童急性呼吸系統(tǒng)疾病的主要病原體，每年有超過(guò)3 000萬(wàn)5歲以下的兒童感染呼吸道合胞病毒，近幾年該病癥的發(fā)病率呈逐年升高的趨勢(shì)，已經(jīng)嚴(yán)重影響了兒童的身體健康。又因?yàn)楹粑篮习《靖腥镜脑缙谂R床癥狀不明顯，所以易出現(xiàn)漏診和誤診等情況，實(shí)驗(yàn)室檢查是診斷呼吸道合胞病毒的主要方法。

病毒是兒童社區(qū)獲得性肺炎（Community Acquired Pneumonia，CAP）的主要病原體，也是兒童社區(qū)獲得性肺炎病原學(xué)區(qū)別于成人的主要特征，而呼吸道合胞病毒則是引起兒童CAP的首位病毒，發(fā)病率較高。在該病癥的早期診斷中，通過(guò)呼吸道標(biāo)本病毒抗原快速檢測(cè)是臨床診斷呼吸道合胞病毒的常見(jiàn)方法，文章選擇醫(yī)療機(jī)構(gòu)提供的呼吸道合胞病毒抗原測(cè)試咽拭子，并將其作為早期診斷的重要依據(jù)。呼吸道標(biāo)本的病毒抗原快速檢測(cè)，已經(jīng)成為醫(yī)療機(jī)構(gòu)早期診斷病毒感染的主要方法，而病毒檢測(cè)作為臨床診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，受資金、設(shè)備以及技術(shù)等因素影響而無(wú)法大面積推廣，從現(xiàn)有技術(shù)發(fā)展來(lái)看，成熟的呼吸道合胞病毒檢查方法包括免疫熒光法、酶免疫法等，能夠有效檢測(cè)患兒呼吸道分泌物中的病毒特異性抗原，具有設(shè)備要求低、簡(jiǎn)單快速的優(yōu)點(diǎn)[2]。但是實(shí)際上標(biāo)本的來(lái)源、質(zhì)量以及采集等都是影響檢測(cè)結(jié)果的重要因素，在檢驗(yàn)過(guò)程中就可能出現(xiàn)結(jié)果不準(zhǔn)確的情況。而分子生物學(xué)方法已經(jīng)成為檢測(cè)呼吸道分泌物病毒特異性基因片段的有效方法。文章利用上海之江生物科技有限公司生產(chǎn)的全自動(dòng)核酸提取儀及其配套試劑盒，詳細(xì)研究了呼吸道合胞病毒核酸分型檢測(cè)方法的應(yīng)用效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該核酸檢測(cè)方法具有準(zhǔn)確率高（準(zhǔn)確率達(dá)到100%）等優(yōu)點(diǎn)，并且精密度驗(yàn)證結(jié)果顯示，不同分型結(jié)果5天內(nèi)CV均小于5%，說(shuō)明精密度高，滿足呼吸道合胞病毒臨床診斷需求。結(jié)合文章的研究結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，該方法具有特異度高、靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)，在臨床上具有滿意的應(yīng)用效果，是一種科學(xué)有效的診斷方法。

4 ? ?結(jié)語(yǔ)

在呼吸道合胞病毒核酸分型檢測(cè)性能中，利用上海之江生物科技有限公司生產(chǎn)的全自動(dòng)核酸提取儀及其配套試劑盒，通過(guò)檢測(cè)某醫(yī)院提供的研究樣本，研究了呼吸道合胞病毒核酸分型檢測(cè)方法的準(zhǔn)確度和精密度，證明該方法滿足臨床分子生物學(xué)的檢驗(yàn)要求，可以為臨床診斷、治療及預(yù)后判斷提供必要的依據(jù)，提高了疾病的檢出率，為保證患兒的預(yù)后奠定了基礎(chǔ)，因此值得進(jìn)一步推廣。

[參考文獻(xiàn)]

[1]姜梨梨，王瑞芳，周海群，等.亳州地區(qū)2846例兒童急性呼吸道感染病原IgM抗體檢測(cè)結(jié)果分析[J].重慶醫(yī)學(xué)，2017（25）：3569-3570.

[2]于娟，李紅，饒華祥，等.流感高發(fā)季節(jié)150例流感病毒核酸陰性的流感樣病例鼻咽分泌物呼吸道病毒檢測(cè)分析[J].山東醫(yī)藥，2018（31）：40-43.