清開(kāi)靈注射液用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的可行性

程曉嶺，張旭，郝欣嶺

（神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司，河北 石家莊 051430）

0 引言

清開(kāi)靈注射液主要包括膽酸、板藍(lán)根以及黃芩苷等八味中藥為主，具有清熱解毒、化痰通絡(luò)、醒腦開(kāi)竅的功能作用，因此在臨床上應(yīng)用十分廣泛。但是現(xiàn)階段清開(kāi)靈注射液在2015 年版藥典中依然應(yīng)用家兔法檢查熱原，但是由于家兔法操作起來(lái)十分復(fù)雜，要花費(fèi)較長(zhǎng)的檢查時(shí)間，且成本較高，靈敏度較低，依照2015 年版藥典四部細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法與熱原家兔檢查方法的基本要求，對(duì)此藥物展開(kāi)對(duì)比與研究，結(jié)果證明，清開(kāi)靈注射液可以應(yīng)用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方，進(jìn)而取代家兔方法檢查熱原，但是不可忽視藥物對(duì)于試驗(yàn)本身的干擾性[1]。為了進(jìn)一步探究細(xì)菌內(nèi)速度檢查應(yīng)用清開(kāi)靈注射液的可行性效果，現(xiàn)將探究過(guò)程與結(jié)果進(jìn)行以下幾點(diǎn)分析。

1 材料與設(shè)備

1.1 基本材料。此次試驗(yàn)研究選取鱟試劑2 種規(guī)格，2 個(gè)生產(chǎn)批次（產(chǎn)地：湛江安度斯生物有限公司，靈敏度：0.5 Eu/ml，批次1705412 與1808452，靈敏度0.25 Eu/ml，批次1708642，批次1809167）。細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水（產(chǎn)地：湛江安度斯生物有限公司，規(guī)格：0.5 mL，批次：1704065），細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)物（產(chǎn)地：湛江安度斯生物有限公司，規(guī)格10Eu/支，批次：17040821）[2]。熱原應(yīng)用家兔，生命體征健康，同時(shí)通過(guò)相關(guān)檢測(cè)為合格，清開(kāi)靈注射液（產(chǎn)地：神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字：Z13020880，批次：170117223、18044365）。

1.2 設(shè)備。此次試驗(yàn)選用漩渦式混懸器設(shè)施，由天津藥典標(biāo)準(zhǔn)儀器廠生產(chǎn)，型號(hào)為ZH-2 型；電熱恒溫水浴箱設(shè)備，由江蘇金壇市大儀器廠生產(chǎn)，型號(hào)為420 型；無(wú)熱源移液器設(shè)備，由上海求精生化試劑儀器有限公司生產(chǎn)[3]。

2 檢測(cè)方法和結(jié)果

2.1 明確內(nèi)毒素限值。根據(jù)我國(guó)藥典2015 年版4 部1143 標(biāo)準(zhǔn)要求，明確藥品、生物制品的細(xì)菌內(nèi)素質(zhì)限值為（L），根據(jù)L=K/M，公式進(jìn)行計(jì)算，其K 值為人體每千克體質(zhì)量，在1 小時(shí)內(nèi)最大可承受的內(nèi)霉素計(jì)量，注射劑為K=5 Eu/（kg·h），而M 是人用每千克質(zhì)量1 小時(shí)可最大供試品劑量，清開(kāi)靈注射液的應(yīng)用一次最大限度的注射量為40 mL，依照藥典標(biāo)準(zhǔn)人均體質(zhì)量根據(jù)60 kg 加以計(jì)算，注射時(shí)間為1 小時(shí)，那么M 值為0.667 mL/（kg·h），由此可以得出清開(kāi)靈注射內(nèi)毒素的限值為7.5 Eu/mL。

2.2 最大范圍稀釋倍數(shù)的明確。結(jié)合藥典要求標(biāo)準(zhǔn)，MVD=cL/λ，而c 是供試品溶液的濃度，結(jié)合藥典，c=1.0 mL/mL，基于上一部分的基礎(chǔ)上，已經(jīng)結(jié)合清開(kāi)靈注射液的應(yīng)用說(shuō)明與藥典要求，得出L=7.5 Eu/mL，因此鱟試劑的靈敏度即0.5 Eu/mL，使MVD=15。

2.3 鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)分析，依照2015 年片藥典的基本要求，如若選用新批號(hào)的鱟試劑或者試驗(yàn)基本條件出現(xiàn)變化，都會(huì)對(duì)檢查結(jié)果造成影響，因此應(yīng)該反復(fù)進(jìn)行鱟試劑靈敏度的復(fù)核試驗(yàn)分析。選用10 Eu/支細(xì)菌內(nèi)毒素，應(yīng)用1.0 mL 細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)用水加以溶解，使其在漩渦混合器設(shè)備上混勻15 分鐘以后，根據(jù)制成2λ、1λ、0.5λ 以及0.25λ四個(gè)濃度的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行稀釋。通過(guò)反復(fù)復(fù)核，4 個(gè)批次的鱟試劑濃度最大為2λ 的試管呈陽(yáng)性，濃度最小0.25λ的試管呈陰性，且陰性對(duì)照管以陰性為主，可見(jiàn)此次試驗(yàn)結(jié)果真實(shí)有效，同時(shí)4 個(gè)批次鱟試劑0λC 計(jì)算結(jié)果處于2λ-0.25λ 范圍之內(nèi)，可以將靈敏度為0.5 Eu/mL 作為鱟試劑靈敏度標(biāo)準(zhǔn)。

2.4 干擾試驗(yàn)分析。供試品溶液根據(jù)梯度進(jìn)行稀釋?zhuān)畲筮_(dá)到15 倍的5 個(gè)稀釋等級(jí)溶液，利用標(biāo)記濃度為0.5 Eu/mL鱟試劑結(jié)合我國(guó)藥典2015 年版四部1143 鱟試劑靈敏度進(jìn)行復(fù)核試驗(yàn)分析，確保每個(gè)濃度平行做4 支管，除此之外2 支陰性參照管與2 支試劑品陰性對(duì)照管，2 個(gè)批次供試品結(jié)果一致，詳情如表1 所示。

表1 表示靈敏度0.5Eu/mL 批次1705412 與批次1808452 鱟試劑結(jié)果分析

分析表1 可知，此次試驗(yàn)具有一定的可行性，但是供試品在稀釋15 倍過(guò)程中，針對(duì)1λ 內(nèi)毒素鱟試劑干擾的影響，使其結(jié)果呈陰性，結(jié)合藥典的根本要求，這時(shí)可以對(duì)供試品展開(kāi)更大倍數(shù)的稀釋?zhuān)_(dá)到排除干擾的效果，故此進(jìn)行更大倍數(shù)的稀釋。

通過(guò)觀察發(fā)現(xiàn)，陰性參照管全部平行管呈陰性，2λ 管呈陽(yáng)性，0.25 管呈陰性，試驗(yàn)結(jié)果有效，1λ 管呈陽(yáng)性，可以將干擾排除。由此可見(jiàn)，清開(kāi)靈注射液針對(duì)內(nèi)毒素檢查有一定的干擾性，但是稀釋30 倍后可以將干擾排除。

2.5 家兔方法檢測(cè)。選出6 只健康并經(jīng)過(guò)檢測(cè)合格的家兔，根據(jù)我國(guó)藥典2015 年片一部1142 熱原檢查方法進(jìn)行檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明2 批次供試品熱原都符合要求。

2.6 對(duì)比兩種檢測(cè)結(jié)果。此次試驗(yàn)2 破此供試品達(dá)到30 倍稀釋?zhuān)Y(jié)合2015 年版藥典四部1143 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法，利用0.5 Eu/支鱟試劑進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果呈陰性，依照2015 年版藥典四部1142 熱原檢查方法展開(kāi)檢查，結(jié)果符合標(biāo)準(zhǔn)要求，此兩種檢測(cè)方法結(jié)果相同。

3 討論

清開(kāi)靈注射液由中藥制成，作為臨床常見(jiàn)藥物，現(xiàn)階段沿用家兔方法進(jìn)行熱原檢測(cè)，不僅浪費(fèi)精力與時(shí)間，還有著較高的成本要求。因此為了優(yōu)化細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法，采用清開(kāi)靈注射液加以檢測(cè)，應(yīng)該在實(shí)際的試驗(yàn)中充分考慮藥品自身對(duì)于試劑的干擾性[4-5]。

此次研究結(jié)果表明，清開(kāi)靈注射液稀釋倍數(shù)之后，檢測(cè)結(jié)果和熱原檢查方法的結(jié)果相一致[6-9]。經(jīng)過(guò)反復(fù)復(fù)核研究證實(shí)，試驗(yàn)中采用0.25 Eu/mL 鱟試劑檢驗(yàn)應(yīng)用供試品30 倍稀釋液時(shí)，可以除去藥品根本的干擾性。此研究結(jié)果與張軍霞、郭姣梅、周繼春等人研究結(jié)果相一致[10]，證明此次研究具有可行性特點(diǎn)。

綜上所述，選用清開(kāi)靈注射液通過(guò)30 倍稀釋以后，排除對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的干擾因素，利用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法展開(kāi)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查，可以將固有的熱原檢查方法所取代，可見(jiàn)清開(kāi)靈注射液用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法具有一定的可行性。