冠心病患者血清Hcy水平與氧化應(yīng)激反應(yīng)及冠脈病變的相關(guān)性

楊曉華

冠心病是因冠狀動脈發(fā)生粥樣硬化性改變致血管部分或完全堵塞，心肌供血供氧驟然減少、中斷，造成心肌缺血性壞死，是心內(nèi)科常見性疾病，亦是導(dǎo)致我國中老年人群死亡的重要原因。冠心病的發(fā)生發(fā)展與氧化應(yīng)激反應(yīng)密切相關(guān)，氧化應(yīng)激反應(yīng)所引起的自由基損傷、血管內(nèi)皮功能損傷等均是冠狀動脈粥樣硬化的病理基礎(chǔ)。冠脈管腔狹窄、閉塞時(shí)，氧化應(yīng)激反應(yīng)更加劇烈，并產(chǎn)生大量的氧自由基，氧自由基可對細(xì)胞膜產(chǎn)生毒性，使其發(fā)生損傷。同時(shí)，氧化應(yīng)激還可刺激多種炎癥因子、粘附因子合成和分泌，使炎癥反應(yīng)更為劇烈，進(jìn)而造成血管平滑肌細(xì)胞快速增殖，引起血管肥厚，使冠脈進(jìn)一步狹窄。超氧化物歧化酶(SOD)是氧化應(yīng)激反應(yīng)的標(biāo)志物之一，其可直接反映機(jī)體的抗氧化能力，SOD水平降低提示機(jī)體清除自由基能力降低，氧化應(yīng)激反應(yīng)愈加嚴(yán)重[1]。同型半胱氨酸(Hcy)是由半胱氨酸、蛋氨酸在代謝過程中產(chǎn)生。近年來研究發(fā)現(xiàn)Hcy與冠狀動脈粥樣硬化密切相關(guān)，Hcy水平升高成為動脈發(fā)生粥樣硬化病理性改變的危險(xiǎn)因素之一[2]。因此，推測Hcy與冠心病患者的氧化應(yīng)激反應(yīng)、冠脈病變可能存在相關(guān)性。本研究選126例冠心病患者及100例健康查體者進(jìn)行比照研究，探討Hcy與冠心病患者血清SOD與冠脈病變支數(shù)、冠脈病變程度的關(guān)系，旨在揭示冠心病患者血清Hcy與氧化應(yīng)激反應(yīng)與冠脈病變的相關(guān)性，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2018年1月至2019年1月收治的126例冠心病患者作為研究組，另選100例健康查體者設(shè)為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合《中國慢性穩(wěn)定性心絞痛診斷與治療指南》[3]中有關(guān)冠心病的診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)年齡≥18歲；(3)近半年無重大手術(shù)史；(4)近三個(gè)月無不良腦血管事件者，如腦梗死、腦出血等；(5)近一個(gè)月未使用激素類、抗生素及免疫抑制劑藥物。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并全身急慢性感染者；(2)惡性腫瘤者；(3)肺、腎、肝等功能不全者；(4)繼發(fā)性心絞痛、充血性心力衰竭、心肌病、瓣膜性心臟病者；(5)凝血功能障礙者；(6)病理性骨折者；(7)內(nèi)分泌疾病者(除糖尿病)。

1.2 方法

1.2.1 一般資料收集:收集患者年齡、性別、血壓等資料。

1.2.2 一般生化指標(biāo)測定:空腹抽取靜脈血5 ml，離心，-80℃冰箱凍存。使用酶聯(lián)免疫吸附法測定總膽固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、空腹血糖、糖化血紅蛋白、尿酸、肌酐，檢測儀器購自山東國康生物科技有限公司，HCC200全自動生化分析儀。

1.2.3 SOD測定:使用酶聯(lián)免疫吸附法測定SOD濃度，主要步驟為在抗-SOD固相抗體中加入SOD，形成SOD復(fù)合物，洗滌后通過催化形成帶藍(lán)色復(fù)合物，進(jìn)行酸反應(yīng)轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色，使用美國BIO-RAD伯樂酶標(biāo)儀在450 nm波長下讀取吸光度，計(jì)算SOD濃度值。

1.2.4 Hcy測定:使用循環(huán)液相法測定Hcy，試劑盒購自北京九強(qiáng)公司，儀器為HCC200全自動生化分析儀?？崭钩槿§o脈血5 ml，4 000 r/min離心，-80℃冰箱凍存。取13 μl樣本，加入含腺苷甲硫氨酸、三一羥乙基膦的試劑240 μl，室溫靜置5 min，加入含α-同戊二酸、谷氨酸脫氫酶、腺苷脫氫酶的試劑，分別于 2.5 min、5 min后測定吸光度值，計(jì)算吸光度差值，建立吸光度-濃度工作曲線，讀取Hcy濃度值。

1.2.5 Gensini評分:管壁狹窄1%～25%計(jì)1分，26%～50%計(jì)2分，51%～75%計(jì)4分，76%～90%計(jì)8分，91%～99%計(jì)16分，完全閉塞計(jì)32分；病變部位在第二對角支、左心室后側(cè)支計(jì)0.5分，第一對角支、后降支、右冠、回旋支遠(yuǎn)段、心尖部、鈍緣支計(jì)1分，前降支中段計(jì)1.5分，前降支近段、回旋支近段計(jì)1分，左主干計(jì)5分。評分計(jì)算方法：病變積分×病變部位分值，分值越高表明冠脈病變程度越嚴(yán)重。

2 結(jié)果

2.1 2組一般資料比較 2組年齡、總膽固醇、低密度脂蛋白、尿酸、肌酐差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，2組性別比、空腹血糖、糖化血紅蛋白、高密度脂蛋白、合并高血壓差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

項(xiàng)目研究組(n=126)對照組(n=100)t(χ2)值P值性別(例,男/女)101/2563/378.0040.000年齡(歲)58.63±11.4561.27±10.821.7640.079總膽固醇(mmol/L)4.13±0.884.15±0.820.1750.861低密度脂蛋白(mmol/L)2.51±0.732.54±0.790.2960.768高密度脂蛋白(mmol/L)1.23±0.181.15±0.203.1590.002空腹血糖(mmol/L)5.25±1.034.80±0.783.6210.000糖化血紅蛋白(%)6.31±1.165.91±0.573.1580.002尿酸(μmol/L)280.45±68.67264.48±55.631.8860.061肌酐(μmol/L)65.35±13.8763.74±13.180.8860.377高血壓(例,有/無)76/5042/5811.5110.000

2.2 2組Hcy、SOD水平比較 研究組Hcy水平顯著高于對照組，SOD水平顯著低于對照組(P<0.05)。見表2，圖1、2。

2.3 冠心病各亞組間的Hcy、SOD水平比較 不同病變支數(shù)的Hcy、SOD水平差異顯著，隨著病變支數(shù)增加，Hcy水平升高，SOD水平下降(P<0.05)，但雙支

組別Hcy(μmol/L)SOD(U/ml)研究組(n=126)19.75±5.34158.59±7.68對照組(n=100)8.69±2.54166.97±6.35t值19.0648.785P值0.0000.000

病變與三支病變的SOD水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

圖1 2組Hcy水平比較圖2 2組SOD水平比較

類別Hcy(μmol/L)SOD(U/ml)單支病變(n=49)13.13±3.66161.07±7.48雙支病變(n=50)19.75±5.21157.49±7.05三支病變(n=27)27.36±6.14156.76±7.23F值13.8872.167P值0.0000.019

2.4 不同冠心病Gensini評分的Hcy、SOD水平比較 不同冠心病Gensini評分的Hcy、SOD水平差異顯著，隨著Gensini評分增加，Hcy水平升高，SOD水平下降(P<0.05)。見表4。

類別Hcy(μmol/L)SOD(U/ml)Gensini評分(分)<30分(n=41)10.49±3.13162.93±7.3227.71±2.2630～60分(n=46)20.28±5.69159.04±7.3846.33±5.02>60分(n=39)29.64±6.07154.51±7.3055.56±5.11 F值16.7122.05313.780 P值0.0000.0260.000

2.5 冠心病患者血清Hcy與SOD、冠脈病變的相關(guān)性 Hcy與SOD呈負(fù)相關(guān)，與Gensini評分、病變支數(shù)呈正相關(guān)(P<0.05)。見表5，圖3～5。

表5 冠心病患者血清Hcy與SOD、冠脈病變的相關(guān)性

圖3 Hcy與SOD相關(guān)性

3 討論

冠心病多見于中老年人群，是導(dǎo)致人群死亡的重要病因。冠心病發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，致病危險(xiǎn)因子較多，包括血脂血糖代謝異常、高血壓、年齡、性別、遺傳因素等。本研究中納入的對象統(tǒng)計(jì)結(jié)果也顯示，冠心病病人的空腹血糖、糖化血紅蛋白、高密度脂蛋白高于健康人群，性別比例、合并高血壓占比與正常人群的人口學(xué)資料也存在顯著性差異。充分說明此類因素與冠心病發(fā)病有關(guān)。鑒于冠心病的發(fā)病特點(diǎn)，臨床上常將血脂指標(biāo)、高血壓等作為冠心病發(fā)病的重要預(yù)警因子，但關(guān)于冠心病病變程度、病變支數(shù)等相關(guān)的預(yù)測因子較少。氧化應(yīng)激反應(yīng)、脂質(zhì)代謝異常、炎性反應(yīng)等參與了冠狀動脈粥樣硬化病變過程，與冠心病發(fā)生、轉(zhuǎn)歸息息相關(guān)[4]。近年來研究發(fā)現(xiàn)血清Hcy與冠心病發(fā)病及進(jìn)展密切相關(guān)[5-7]。因此，本研究進(jìn)一步揭示血清Hcy與冠心病氧化應(yīng)激反應(yīng)、冠脈病變潛在的相關(guān)性。

圖4 Hcy與病變支數(shù)相關(guān)性

圖5 Hcy與Gensini評分相關(guān)性

Hcy是由半胱氨酸、蛋氨酸代謝產(chǎn)生的一種血管損傷氨基酸，與外周血管動脈粥樣硬化程度密切相關(guān)[8]。Hcy參與了冠狀動脈粥樣硬化的過程，Hcy水平升高是導(dǎo)致冠心病發(fā)生的高危因素之一[9]。Hcy參與冠心病發(fā)生發(fā)展過程機(jī)制包括：(1)Hcy可加快血管平滑肌細(xì)胞的細(xì)胞周期，使細(xì)胞由靜止期轉(zhuǎn)為增殖期，促進(jìn)其增殖。(2)Hcy可干擾脂質(zhì)代謝過程，使低密度脂蛋白發(fā)生過氧化反應(yīng)，形成氧化修飾低密度脂蛋白，形成泡沫細(xì)胞，該類細(xì)胞中含有大量脂肪，是導(dǎo)致動脈硬化的重要原因。(3)Hcy可通過增加氧化修飾低密度脂蛋白生成，促進(jìn)一氧化氮(NO)合成，NO直接導(dǎo)致DNA鏈交聯(lián)、斷裂，從而使血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生損傷。Hcy還可抑制前列環(huán)素產(chǎn)生，前列環(huán)素有抗血小板和舒張血管作用，其含量減少可導(dǎo)致血栓形成，加重冠心病心肌缺血程度。動物實(shí)驗(yàn)顯示，高蛋氨酸飲食誘導(dǎo)的高Hcy小鼠模型的組織蛋白酶L(人組織蛋白酶V同源)在胸主動脈內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)上調(diào)，介導(dǎo)白介素-6、腫瘤壞死因子α等炎性因子的表達(dá)，引起血管炎癥[10]。臨床研究實(shí)驗(yàn)顯示，非ST段抬高型急性冠脈綜合征(NSTE-ACS)患者中非ST段抬高型心肌梗死者及不穩(wěn)定型心絞痛者的血清Hcy表達(dá)水平均較非冠心病患者明顯上調(diào)，且NSTE-ACS患者血清Hcy水平隨全球急性冠狀動脈事件注冊(GRACE)評分危險(xiǎn)程度增加而升高，呈正性相關(guān)[11]。表明Hcy與冠脈病變存在相關(guān)性。

SOD是一種金屬蛋白酶，其廣泛分布于機(jī)體中，參與機(jī)體多個(gè)生理過程。SOD能夠催化超氧陰離子自由基(O2-)發(fā)生歧化反應(yīng)，包括Zn-SOD(含鋅)、Cu-SOD(含銅)、Ni-SOD(含鑷)等多種類型，不同種類具有不同的活性。機(jī)體氧代謝過程可產(chǎn)生氧自由基(O2-)、過氧化氫、羥自由基(OH-)等活性氧物質(zhì)，這些物質(zhì)活性極高[12]。正常的活性氧物質(zhì)含量具有維持細(xì)胞生長、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用。當(dāng)活性氧物質(zhì)大量生成時(shí)，可對機(jī)體產(chǎn)生損傷，包括破壞細(xì)胞膜、損傷DNA等。而SOD的作用主要是清除活性氧物質(zhì)中的O2-、過氧化氫等，使機(jī)體氧代謝處于平衡狀態(tài)，維持機(jī)體的正常生理功能[13]。當(dāng)SOD水平降低時(shí)，則表明機(jī)體抗氧化能力下降，機(jī)體氧代謝平衡狀態(tài)被打破，氧化應(yīng)激反應(yīng)加重[14]。病變冠脈發(fā)生狹窄、閉塞后導(dǎo)致心肌供血供氧不足，引起氧化應(yīng)激反應(yīng)，氧代謝狀態(tài)失衡，使機(jī)體中的O2-大量堆積，并對細(xì)胞產(chǎn)生毒性損傷，而SOD被大量消耗，含量減少。動物實(shí)驗(yàn)研究顯示，冠狀動脈粥樣硬化模型大鼠經(jīng)治療后，血脂水平、SOD水平均下降[15]。臨床研究實(shí)驗(yàn)亦表明，與健康體檢者相較而言，冠心病患者血清SOD表達(dá)水平上調(diào)，通過抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)能夠降低冠心病患者的頸動脈內(nèi)-中膜厚度及斑塊面積，起到抗抗動脈粥樣硬化的效果[16]。

Gensini評分是量化冠狀動脈病變嚴(yán)重程度的方法，評分越高則表明冠狀動脈病變程度越嚴(yán)重。本研究結(jié)果表明，冠心病患者血清Hcy水平高于健康對照組，血清SOD水平低于對照組，不同病變支數(shù)的Hcy、SOD水平差異顯著，隨著病變支數(shù)增加，Hcy水平升高，SOD水平下降，但雙支病變與三支病變的SOD水平差異不明顯。分析原因，可能為冠心病血管病變支數(shù)可作為判斷病變程度的方法之一，但并不能全面反映病變程度，病變部位、狹窄程度亦是影響血管病變嚴(yán)重程度的指標(biāo)。表明與健康人群比較，冠心病患者存在氧化應(yīng)激反應(yīng)，且多支血管病變患者氧化應(yīng)激反應(yīng)比單支病變患者更嚴(yán)重。進(jìn)一步進(jìn)行線性相關(guān)研究顯示，冠心病患者血清Hcy與SOD水平呈負(fù)性相關(guān)，與Gensini評分、病變支數(shù)呈正性相關(guān)。提示，Hcy水平升高與冠心病患者氧化應(yīng)激反應(yīng)程度、冠脈病變嚴(yán)重程度密切相關(guān)，可作為預(yù)測冠心病患者機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng)程度、血管病變嚴(yán)重程度的參考指標(biāo)。

綜上所述，冠心病患者血清Hcy與氧化應(yīng)激、冠脈病變存在相關(guān)性，隨著Hcy升高，抗氧化能力越低，氧化應(yīng)激反應(yīng)越劇烈，冠脈病變程度越嚴(yán)重。Hcy可作為預(yù)測冠心病患者氧化應(yīng)激反應(yīng)與血管病變嚴(yán)重程度的因子。