非小細(xì)胞肺癌患者外周血游離DNA 的EGFR 基因突變與靶向藥物治療療效的相關(guān)性研究

溫堅(jiān)， 何志江， 劉傳勇， 劉云軍

（茂名市人民醫(yī)院 腫瘤二科， 廣東 茂名525000）

肺癌是當(dāng)前最常見(jiàn)的惡性腫瘤疾病之一， 同時(shí)也是對(duì)人類(lèi)健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一， 肺癌具有較高的致死率。 隨著全球氣候條件的惡化及空氣質(zhì)量的變化， 肺癌的發(fā)病率呈不斷上升的趨勢(shì)。 在肺癌多種病理類(lèi)型中， 非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer， NSCLC） 是一種十分常見(jiàn)的類(lèi)型，占肺癌的85%以上［1］。 因該病早期具有隱匿性， 在確診時(shí)， 患者往往已處于疾病晚期， 存在較大的治療難度。 本研究選擇我院收治的非小細(xì)胞肺癌患者為對(duì)象， 探討非小細(xì)胞肺癌患者外周血游離DNA 的表皮生長(zhǎng)因子受體 （epidermal growth factor receptor， EGFR） 基因突變與靶向藥物治療療效的相關(guān)性， 現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料抽取我院2018 年1 月至2019 年6 月期間收治的60 例NSCLC 患者為研究對(duì)象， 所有患者均經(jīng)病理、 影像學(xué)檢查確診為局部晚期或晚期非小細(xì)胞肺癌。 其中男性38 例，女性22 例； 年齡52 ～78 歲， 平均 （62.75 ± 3.88） 歲； 56 例為腺癌， 4 例為鱗癌。 患者均行外周血游離DNA EGFR 基因檢測(cè)， 根據(jù)檢測(cè)結(jié)果分組， EGFR 突變型為觀察組 （n = 13），EGFR 野生型為對(duì)照組 （n = 47）， 男性突變率21.1% （8／38），女性突變率22.7% （5／22）； 所有患者均予吉非替尼行EGFRTKI 治療， 所有患者KPS 評(píng)分均≥60 分。 經(jīng)影像學(xué)檢查符合骨、 腎上腺、 肝臟、 肺等早期單發(fā)或多發(fā)轉(zhuǎn)移灶， 治療前所有患者均停用化療藥物， 所有患者均自愿參與本研究， 家屬知情并已簽署知情同意書(shū)， 臨床資料完整。 排除意識(shí)、 精神障礙者， 嚴(yán)重系統(tǒng)性疾病者， 無(wú)法配合本研究者， 中途退出者。

1.2 方法①所有患者均選擇靶向藥物吉非替尼行EGFR 酪氨酸激酶抑制劑 （EGFR-TKI） 治療， 口服250 mg／次， 1 次／d，服藥時(shí)間最短1 個(gè)月。 抽取患者外周靜脈血， 4 mL／份， 室溫放置2 h 后以低溫高速3 000 r／min 離心10 min， 取上層血漿，1 mL／份， 置于2 mL 試管中凍存， 選擇磁珠法提取DNA 基因。②外周血游離DNA EGFR 基因突變檢測(cè)： DNA 抽提完成后，RCR 擴(kuò)增目的片段行EGFR 檢測(cè)， 其中EGFR 外顯子19 上游引物為5'-AACGTCTTCTCCCTTCTCTCTCTGTCA-3'， 下游引物為5'-CCACACAGCAAAGCAGAAACT-3'， 產(chǎn)物片段大小為150 bp； EGFR 外顯子21 上游引物為5'-TCTTCTCGTTTTCAGGGC-3'， 下游引物為5'-GGCTGACCTAAAGCCACCTC-3'， 產(chǎn)物片段大小為196 bp。 ③確定產(chǎn)物及其他情況后， 執(zhí)行擴(kuò)增操作， 經(jīng)變性、 延伸、 瓊脂糖凝膠電泳、 染色攝片， 對(duì)陽(yáng)性擴(kuò)增條帶的樣本分離純化后， 執(zhí)行基因測(cè)序， 測(cè)序引物需采集各外顯子的上游引物為參照。

1.3 觀察指標(biāo)按照實(shí)體腫瘤WHO 客觀療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)， 分為完全緩解 （CR）、 部分緩解 （PR）、 疾病穩(wěn)定 （SD） 和疾病進(jìn)展（PD）。 客觀緩解率 （ORR） = CR + PR， 疾病控制率 （DCR） =CR + PR + SD。 無(wú)疾病進(jìn)展時(shí)間 （PFS） 定義 為從第一次EGFR-TKI 給藥至疾病進(jìn)展或死亡的時(shí)間。 總生存期 （OS） 定義為從開(kāi)始口服靶向治療藥物至患者死亡或末次隨訪的時(shí)間。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理使用SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)， 計(jì)數(shù)資料以n （%） 表示， 比較采用χ2檢驗(yàn)， 影響因素采用多元Logistic 回歸分析法， P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 客觀療效治療后， 兩組的ORR 比較無(wú)顯著差異 （P＞0.05）， 觀察組的DCR 顯著高于對(duì)照組 （P＜0.05）。 見(jiàn)表1。

表1 兩組的客觀療效比較 ［n， n （%）］

2.2 EGFR 基因突變與EGFR-TKI 治療療效的相關(guān)性Logistic回歸分析結(jié)果顯示， EGFR 基因突變是EGFR-TKI 治療療效的重要影響因素 （P＜0.05）。 見(jiàn)表2。

表2 EGFR 基因突變與EGFR-TKI 療效的Logistic 回歸分析結(jié)果

3 討論

非小細(xì)胞肺癌 （NSCLC） 是肺癌的主要類(lèi)型， 因其細(xì)胞生長(zhǎng)分裂較慢， 擴(kuò)散轉(zhuǎn)移相對(duì)較晚， 因此在臨床上具有較高的治療難度。 隨著近年來(lái)空氣質(zhì)量的惡化， 非小細(xì)胞肺癌的發(fā)病率持續(xù)上升， 目前非小細(xì)胞肺癌約占所有肺癌的85%， 同時(shí)， 我國(guó)肺癌的發(fā)病率和死亡率占第一［2］。 因此選擇一種有效的臨床治療方式， 提升非小細(xì)胞肺癌的臨床治療效果至關(guān)重要。

目前臨床上針對(duì)中晚期非小細(xì)胞肺癌， 多以化療為主， 但第三代化療藥物的臨床效果并不理想， 預(yù)后較差。 隨著臨床醫(yī)療水平的提升， 靶向藥在NSCLC 的臨床治療中逐漸凸顯其優(yōu)勢(shì)。 因晚期腫瘤無(wú)法準(zhǔn)確獲取檢測(cè)EGFR 基因突變的肺癌組織標(biāo)本， 影響了臨床檢測(cè)效果。 而相關(guān)研究［3］顯示， 外周血游離DNA EGFR 基因突變狀態(tài)與腫瘤組織的EGFR 基因突變狀態(tài)存在較高的關(guān)聯(lián)性。 同時(shí)， 非小細(xì)胞肺癌發(fā)病初期并無(wú)明顯癥狀， 因此早期診斷效果并不理想， 隨著病情發(fā)展， 患者會(huì)出現(xiàn)咳嗽 （刺激性咳嗽、 干咳）、 咳痰、 痰中帶血或血痰、 胸痛、發(fā)熱、 氣促等癥狀， 同時(shí)伴隨有消瘦、 乏力等全身性癥狀［4］。臨床研究［5］表明， 非小細(xì)胞肺癌的癌細(xì)胞侵犯或轉(zhuǎn)移至其他部位時(shí)， 會(huì)出現(xiàn)相應(yīng)的臨床癥狀， 如聲音嘶啞 （侵犯喉返神經(jīng)）、 頭痛頭暈 （轉(zhuǎn)移至頭部） 等。 同時(shí)， 非小細(xì)胞肺癌可通過(guò)局部浸潤(rùn)、 淋巴系統(tǒng)、 血液系統(tǒng)轉(zhuǎn)移至其他部位， 常見(jiàn)轉(zhuǎn)移部位有肺內(nèi)、 縱隔淋巴結(jié)或淺表淋巴結(jié)、 肝臟、 肺臟、 骨、 腦等。 因此， 在復(fù)查或隨訪時(shí)需注意上述部位的檢查。 隨著醫(yī)療技術(shù)和藥品研發(fā)的進(jìn)步， 很多患者都可能實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)期帶瘤生存［6］。根據(jù)確診時(shí)分期的不同， 治療方案也有所差異。 原則上早中期以手術(shù)治療為主， 術(shù)后根據(jù)病理分期確定是否聯(lián)合化療或者放療， 早中期手術(shù)治療能夠盡可能達(dá)到治愈的效果。

EGFR 是目前抗癌藥物中關(guān)注度較高的靶點(diǎn)分子之一， 能夠有效與EGFR 激酶功能區(qū)的ATP 結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合， 從而抑制激酶活性， 阻斷癌細(xì)胞的增殖與轉(zhuǎn)移。 而通過(guò)檢測(cè)血清游離DNA中的EGFR 基因， 能夠間接反映腫瘤組織EGFR 基因的突變情況， 從而為臨床選擇靶向藥物提供更加全面的參考信息， 規(guī)避治療風(fēng)險(xiǎn)， 提升治療效果。 本研究結(jié)果顯示， 外周血游離DNA的EGFR 基因突變型患者接受吉非替尼治療的疾病控制率顯著高于野生型 （P＜0.05）， EGFR 基因突變是EGFR-TKI 治療療效的重要影響因素 （P＜0.05）。

綜上所述， 非小細(xì)胞肺癌患者外周血游離DNA 的EGFR基因突變與靶向藥物治療療效具有相關(guān)性， 其檢測(cè)結(jié)果能夠?yàn)榕R床提供有效的指導(dǎo)作用。