丙泊酚注射液對(duì)靶動(dòng)物犬的安全性評(píng)價(jià)

王 琴，曾少群，石達(dá)友，岳 峰*

(1. 廣東嘉博制藥有限公司，廣東清遠(yuǎn) 511517；2. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，廣州 510642)

丙泊酚(Propofol)是一種新型烷基酸類短效靜脈麻醉藥，具有起效迅速、誘導(dǎo)平穩(wěn)、恢復(fù)完全、無(wú)蓄積性等優(yōu)點(diǎn)[1-2]。在寵物臨床中，采取適宜的麻醉方案可消除動(dòng)物疼痛，確保診斷、治療及外科手術(shù)的順利開展[3]。1996年丙泊酚注射液獲FDA批準(zhǔn)用于犬誘導(dǎo)麻醉與麻醉維持，與其他動(dòng)物麻醉藥相比，丙泊酚注射液麻醉效果好且不良反應(yīng)少[4-5]，因此廣泛應(yīng)用于臨床診斷中動(dòng)物鎮(zhèn)靜及小裂傷縫合、子宮蓄膿、腫瘤切除、絕育等多種外科手術(shù)的麻醉[6]。為考察寵物用新獸藥丙泊酚注射液對(duì)靶動(dòng)物犬的安全性，本研究參照《寵物用藥物對(duì)靶動(dòng)物安全性試驗(yàn)指導(dǎo)原則》相關(guān)要求[7]開展試驗(yàn)，通過(guò)考察不同劑量丙泊酚注射液對(duì)試驗(yàn)犬的誘導(dǎo)麻醉效果、各項(xiàng)生理指標(biāo)及組織學(xué)的影響，記錄試驗(yàn)期間不良反應(yīng)等異常情況，為其臨床安全用藥及注意事項(xiàng)提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器設(shè)備 XS-1000I全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀，希森美康醫(yī)用電子(上海)有限公司；BS-380全自動(dòng)生化分析儀，深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司；Masimo Radical 7血氧心率監(jiān)護(hù)儀：美國(guó)邁心諾公司；Vet20獸用血壓計(jì)，順泰醫(yī)療器械(深圳)有限公司；JX7800A動(dòng)物呼吸麻醉機(jī)：北京金新斯盛遠(yuǎn)科技有限公司；GM1358噪音計(jì)，深圳市聚茂源科技有限公司。

1.2 受試藥物 丙泊酚注射液，批號(hào)：160501，規(guī)格：20 mL∶200 mg，廣東嘉博制藥有限公司。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物 健康貴賓犬32只，18～30月齡，雌雄各半，體重約4.0±0.5 kg，由廣州雷米高犬場(chǎng)提供，基礎(chǔ)日糧不含任何藥物添加劑，自由采食和飲水，飼養(yǎng)1周后經(jīng)臨床檢查為健康的作為試驗(yàn)犬。

1.4 分組及給藥 試驗(yàn)犬隨機(jī)分成4組，每組8只，雌雄各半，飼養(yǎng)觀察1周，臨床觀察健康后開展試驗(yàn)，試驗(yàn)前12 h禁食，6 h禁水，試驗(yàn)分組及給藥方案見表1。

1.5 試驗(yàn)觀察指標(biāo)

1.5.1 臨床觀察 試驗(yàn)過(guò)程中觀察麻醉后試驗(yàn)犬氣管插管情況及臨床表現(xiàn)，根據(jù)試驗(yàn)犬的吞咽、閉眼、痛覺(jué)、四肢活動(dòng)等反射指標(biāo)[8]，對(duì)誘導(dǎo)麻醉深度(生物反射遲鈍程度、鎮(zhèn)靜效果、鎮(zhèn)痛效果、肌松效果)進(jìn)行評(píng)分[9]，監(jiān)測(cè)心率、血氧飽和度及血壓變化，并記錄不良反應(yīng)及試驗(yàn)犬蘇醒(試驗(yàn)犬出現(xiàn)吞咽反射)時(shí)間。

1.5.2 血液學(xué)檢查 分別于麻醉前、麻醉后1 min、蘇醒后1 min對(duì)各組試驗(yàn)犬進(jìn)行橈靜脈采血，采集血樣進(jìn)行血常規(guī)檢查，檢測(cè)指標(biāo)包括：紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(RBC)、血紅蛋白(HGB)、紅細(xì)胞壓積(HCT)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、血小板計(jì)數(shù)(PLT)等。

1.5.3 血液生化檢查 分別于麻醉前、麻醉后1 min、蘇醒后1 min對(duì)各組試驗(yàn)犬進(jìn)行橈靜脈采血，采集血樣進(jìn)行血液生化檢查，檢測(cè)指標(biāo)包括：丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、血糖(GLU)、總膽固醇(CHOL)、尿素氮(BUN)、肌酐(CREA)等。

表1 試驗(yàn)分組及給藥方案Tab 1 The test group and drug administration

1.5.4 剖檢與組織病理學(xué)檢查 試驗(yàn)結(jié)束后，對(duì)空白對(duì)照組與5倍推薦劑量組試驗(yàn)犬進(jìn)行安樂(lè)死并剖檢，其他劑量組部分進(jìn)行剖檢，觀察各臟器組織變化情況，測(cè)定主要臟器系數(shù)，并對(duì)空白對(duì)照組與5倍推薦劑量組試驗(yàn)犬的肝、心、脾、肺、腎等進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床觀察 根據(jù)誘導(dǎo)麻醉深度評(píng)分結(jié)果，麻醉后1 min各劑量組試驗(yàn)犬均達(dá)到誘導(dǎo)麻醉效果，滿足氣管插管要求(試驗(yàn)犬會(huì)厭反射消失)并順利完成氣管插管，各評(píng)分指標(biāo)與空白對(duì)照組差異均極顯著。1倍推薦劑量組在麻醉后4 min內(nèi)可維持麻醉狀態(tài)，麻醉后8 min基本恢復(fù)與空白對(duì)照組一致；3倍、5倍推薦劑量組試驗(yàn)犬在麻醉后8 min鐘內(nèi)均可維持麻醉狀態(tài)，具體結(jié)果見表2。各劑量組試驗(yàn)犬蘇醒時(shí)間分別370.88±102.90 s、993.38±186.83 s、1492.25±335.97 s。

2.2 心率及血壓變化 麻醉后8 min內(nèi)，各劑量組試驗(yàn)犬心率變化呈先升高后下降趨勢(shì)，血氧飽和度及血壓變化呈先下降后升高趨勢(shì)；麻醉后8 min各組試驗(yàn)犬心率、血氧飽和度及血壓均恢復(fù)與空白對(duì)照組基本一致。試驗(yàn)犬心率、血氧飽和度及血壓變化見圖1-圖3。

2.3 血液學(xué)檢查 各劑量組試驗(yàn)犬麻醉后1 min，RBC、HGB、HCT、PLT略微下降，WBC略微上升，但與空白對(duì)照組差異均不顯著性(P>0.05)；試驗(yàn)犬蘇醒后1 min，各血液學(xué)指標(biāo)基本恢復(fù)與空白對(duì)照組一致。具體結(jié)果見表3。

表2 誘導(dǎo)麻醉深度評(píng)分Tab 2 Score of anesthesia induction

同時(shí)間點(diǎn)數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)；字母相同或無(wú)字母肩標(biāo)表示差異不顯著(P>0.05)

圖1 試驗(yàn)犬心率變化Fig 1 Changes of heart rate in dogs

圖2 試驗(yàn)犬血氧飽和度變化Fig 2 Changes of oxygen saturation in dogs

圖3 試驗(yàn)犬血壓變化Fig 3 Changes of blood pressure in dogs

表3 試驗(yàn)犬血液學(xué)指標(biāo)檢查結(jié)果Tab 3 Hematology parameters of

同時(shí)間點(diǎn)數(shù)據(jù)無(wú)字母肩標(biāo)表示差異不顯著(P>0.05)

2.4 血生化檢查 各劑量組試驗(yàn)犬麻醉后1 min，TP、CREA、CHOL明顯下降，GLU明顯上升，蘇醒后1 min各指標(biāo)均恢復(fù)與空白對(duì)照組無(wú)顯著差異(P>0.05)，具體結(jié)果見表4-表6。

表4 麻醉前試驗(yàn)犬血生化指標(biāo)檢查結(jié)果Tab 4 Biochemistry parameters of dogs before

同一指標(biāo)數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)；不同小寫字母表示差異顯著(0.010.05)。下同

表5 麻醉后1min試驗(yàn)犬血生化指標(biāo)檢查結(jié)果Tab 5 Biochemistry parameters of dogs after

表6 蘇醒后1min試驗(yàn)犬血生化指標(biāo)檢查結(jié)果Tab 6 Biochemistry parameters of dogs after recovery(1 min)

2.5 剖檢與組織病理學(xué)檢查 剖檢結(jié)果顯示，空白對(duì)照組與5倍推薦劑量組試驗(yàn)犬的肝、心、脾、肺、腎、胃、十二指腸、回腸、直腸、胸腺、頸淋巴結(jié)等臟器顏色正常，邊緣整齊，未見出血點(diǎn)或壞死病灶等異常情況。各組試驗(yàn)犬主要臟器系數(shù)測(cè)定結(jié)果見表7。組織病理學(xué)結(jié)果顯示，5倍推薦劑量組試驗(yàn)犬各臟器細(xì)胞形態(tài)基本正常，未觀察到異常病理變化，見圖4-圖13。

表7 試驗(yàn)犬臟器系數(shù)測(cè)定結(jié)果Tab 7 The results of organ coefficient in

臟器指數(shù)=臟器重量/犬體重*100

圖4 空白對(duì)照組-肝(H.E.染色,100×)Fig4 Blank-liver(H.E.,100×)圖5 5倍劑量組-肝(H.E.染色,100×)Fig5 5timesofrecommendeddosage-liver(H.E.,100×)圖6 空白對(duì)照組-心(H.E.染色,100×)Fig6 Blank-heart(H.E.,100×)圖7 5倍劑量組-心(H.E.染色,100×)Fig7 5timesofrecommendeddosage-heart(H.E.,100×)圖8 空白對(duì)照組-脾(H.E.染色,100×)Fig8 Blank-spleen(H.E.,100×)圖9 5倍劑量組-脾(H.E.染色,100×)Fig9 5timesofrecommendeddosage-spleen(H.E.,100×)

圖10 空白對(duì)照組-肺(H.E.染色,100×)Fig10 Blank-lung(H.E.,100×)圖11 5倍劑量組-肺(H.E.染色,100×)Fig11 5timesofrecommendeddosage-lung(H.E.,100×)圖12 空白對(duì)照組-腎(H.E.染色,100×)Fig12 Blank-kidney(H.E.,100×)圖13 5倍劑量組-腎(H.E.染色,100×)Fig13 5timesofrecommendeddosage-kidney(H.E.,100×)

3 討論與結(jié)論

邵賀[10]研究了丙泊酚麻醉對(duì)犬生理機(jī)能的影響，按3.5～4.5 mg/kg·bw的劑量對(duì)試驗(yàn)犬進(jìn)行誘導(dǎo)麻醉，麻醉后1 min、3 min可維持較好的鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛和肌松效果，麻醉后9 min、11 min基本恢復(fù)至麻醉前狀態(tài)。本試驗(yàn)中各劑量組試驗(yàn)犬麻醉后1 min均可達(dá)到誘導(dǎo)麻醉深度，滿足氣管插管要求(會(huì)厭反射消失)并順利完成氣管插管。1倍推薦劑量組在麻醉后4 min內(nèi)可維持麻醉狀態(tài)，麻醉后8 min基本恢復(fù)與空白對(duì)照組一致；3倍、5倍推薦劑量組試驗(yàn)犬在麻醉后8 min內(nèi)均可維持麻醉狀態(tài)，試驗(yàn)犬蘇醒時(shí)間隨劑量增加而延長(zhǎng)。

FDA 報(bào)道的丙泊酚注射液對(duì)比格犬的安全性研究中，試驗(yàn)犬預(yù)先給予初始劑量6.5 mg/kg·bw，隨后按2.5 mg/kg·bw逐漸遞增劑量直至出現(xiàn)嚴(yán)重不良反應(yīng)，結(jié)果顯示丙泊酚對(duì)犬心率的影響呈劑量相關(guān)，大約在麻醉后1～4 min心率增加達(dá)到峰值然后逐漸降低，麻醉20 min后降至略低于基線；當(dāng)劑量達(dá)到或超過(guò)16.5 mg/kg·bw時(shí)，整個(gè)麻醉期間試驗(yàn)犬動(dòng)脈壓在可接受范圍內(nèi)逐漸降低；單次劑量16.5 mg/kg·bw丙泊酚對(duì)犬是耐受的，不會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的副作用[11]。本試驗(yàn)中試驗(yàn)犬麻醉后1 min心率增加至峰值，然后逐漸下降，血壓呈與劑量相關(guān)先下降后上升變化趨勢(shì)，麻醉后8 min試驗(yàn)犬基本恢復(fù)至麻醉前狀態(tài)。

丙泊酚注射液最主要的副作用為呼吸抑制[12-13]，Muir等[14]研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)丙泊酚的劑量大于14 mg/kg·bw時(shí)，呼吸暫停的持續(xù)時(shí)間呈劑量依賴性增加。在本試驗(yàn)中，3倍與5倍推薦劑量組部分試驗(yàn)犬出現(xiàn)了呼吸抑制，但通過(guò)氣管插管做正壓呼吸后均可恢復(fù)自主呼吸，試驗(yàn)期間未觀察到死亡等其他異常情況。

綜上所述，丙泊酚注射液按臨床推薦劑量(5.5 mg/kg·bw)使用，對(duì)靶動(dòng)物犬是安全的。