CD146 表達(dá)在肺大細(xì)胞神經(jīng)內(nèi)分泌癌中的意義

樸一翠，李群根，陳宏哲，王巖，劉楊，孫長松，姜久仰，薛華*

(1.黑龍江省醫(yī)院老年，黑龍江 哈爾濱；2.哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院胸外科，黑龍江 哈爾濱)

0 引言

肺大細(xì)胞神經(jīng)內(nèi)分泌癌(large cell neuroendocrine cancer，LCNEC)起初沒有與其他非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)區(qū)分開[1]。然而，在1980 年代后期，根據(jù)Hammond 等人的病理學(xué)研究中，LCNEC 被認(rèn)為是獨特的臨床病理學(xué)實體[2]。有學(xué)者證明了它們形成了形態(tài)各異的高級神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤組，與小細(xì)胞肺癌(SCLC)的形態(tài)不同，但是在臨床上具有相似的行為特征[3]?；谂R床和形態(tài)學(xué)特征，他們被提出作為非典型類癌和小細(xì)胞肺癌之間的一種類型。其表示為具有神經(jīng)內(nèi)分泌形態(tài)并通過免疫組織化學(xué)和/或電子顯微鏡表達(dá)神經(jīng)內(nèi)分泌分化特征的細(xì)胞。LCNEC 的發(fā)病率為2.1%-3.5%。[4,5]隨著LCNEC 發(fā)病率以及死亡率的不斷提高，人們對于LCNEC 的關(guān)注度也不斷提高，對于LCNEC 的研究也不斷增多。CD146在血管內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行表達(dá)，是對腫瘤新生血管生成進(jìn)行研究的重要抗體[6]。本研究對1995 年01 月到2019 年11 月來我院進(jìn)行治療的LCNEC 患者132 例標(biāo)本收集，通過免疫組化方法對CD146 在LCNEC 組織中表達(dá)進(jìn)行觀察，對其與LCNEC組織中的表達(dá)以及其臨床病理特征進(jìn)行探討。

1 材料及方法

1.1 材料

1.1.1 標(biāo)本收集

選取1995 年01 月到2019 年11 月來我院進(jìn)行治療的LCNEC 患者的組織標(biāo)本132 例，取正常的肺組織20 例作為對照。患者男性83 例，女性49 例，年齡31～85 歲，平均年齡(65±8)歲。所有患者在進(jìn)行標(biāo)本取樣時未進(jìn)行治療。

1.1.2 主要實驗試劑

免疫組織化學(xué)法所使用的CD146 單克隆抗體以及需要使用到的SP 試劑盒都購買于北京中杉公司。

1.1.3 主要儀器和設(shè)備

普通光學(xué)顯微鏡：購自上海光學(xué)儀器廠；-20℃冰箱：購自青島海爾有限公司；高速臺式冷凍離心機(jī)：湖南湘儀實驗室儀器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 病理學(xué)檢查

將收集到的每例患者的標(biāo)本取組織塊9～15 塊，將這些組織塊經(jīng)10%的甲醛進(jìn)行固定，然后對其進(jìn)行石蠟切片，利用HE 以及免疫組化法對其進(jìn)行染色，之后通過顯微鏡進(jìn)行觀察。

1.2.2 免疫組化染色

通過免疫組織化學(xué)SP 法對切片進(jìn)行染色。將LCNEC 以及正常的肺組織標(biāo)本進(jìn)行切片，其厚度為4μm，通過抗原對其進(jìn)行修復(fù)，然后對其染色，染色方法參照說明書。

1.2.3 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)

在組織切片后，通過光學(xué)顯微鏡的觀察顯示，血管內(nèi)皮細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)呈現(xiàn)黃棕色代表陽性。微血管密度(microvessel density，MVD) 測量標(biāo)準(zhǔn)參考Weidner 等人的方法并加以改進(jìn)[7]。任何CD146 陽性的內(nèi)皮細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)，不論是否形成管腔，都應(yīng)被視為可測量微血管，條件是它們與周圍的微血管明顯分離。對于每一個標(biāo)本，首先從低倍鏡(×100)進(jìn)行觀察，選取3 個微血管數(shù)量最多的區(qū)域，然后在這些區(qū)域通過高倍鏡(×400) 計數(shù)1 個血管的數(shù)量，并得出平均值為MVD。

1.2.4 統(tǒng)計學(xué)方法

本研究所涉及數(shù)據(jù)均表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差的形式。多組間的比較采用單因素方差分析(ANOVA) 和Dunnet's post-hoc 檢驗來實現(xiàn)。其中P＜0.05 視為具有統(tǒng)計學(xué)意義。有統(tǒng)計分析使用JMP 11.0.0 軟件進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 CD146 的表達(dá)

CD146 在正常的肺組織以及LCNEC 中都有表達(dá)，陽性呈現(xiàn)黃棕色，在LCNEC 組織中陽性表達(dá)更多，但是其血管結(jié)構(gòu)相對不完整，并且管腔比較不規(guī)則，呈現(xiàn)出索條狀或點狀。相比較而言，正常肺部組織陽性表達(dá)量較少，血管結(jié)構(gòu)基本完整，并且其形狀呈現(xiàn)出圓形或者條形(圖1)。CD146 在LCNEC 中陽性表達(dá)率為87.9%，顯著高于正常肺組織陽性率10.0%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

表1 CD146 在LCNEC 以及正常肺組織中表達(dá)

2.2 MVD 值的比較

肺LCNEC 組織中的MVD 值為23.98±4.87，正常肺組織中MVD 為7.56±2.12。與正常肺組織相比較，肺LCNEC 組織的MVD 明顯偏高，組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，結(jié)果見表2。

圖1 LCNEC 組織與正常肺組織中CD146 陽性表達(dá)

表2 肺LCNEB 組織以及正常肺組織MVD 值

2.3 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與MVD 值的比較

有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的組織CD146 陽性MVD 值為23.12±3.13，而無淋巴結(jié)組織轉(zhuǎn)移的CD146 陽性的MVD 值為14.33±2.47，相比較而言，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的CD146 陽性MVD 值明顯偏高(P＜0.01)，見表3。

表3 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織MVD 值

3 討論

腫瘤的增長需要新的血管供給氧氣和營養(yǎng)，而細(xì)胞代謝物則被排泄。血管腫瘤主要通過周圍組織的傳播獲得營養(yǎng)物質(zhì)并將其代謝物進(jìn)行排泄。[8,9]當(dāng)腫瘤長到一定程度時，開始形成新的血管，進(jìn)入血管階段；與正常的成熟血管相比，新生血管的結(jié)構(gòu)不完整，更容易被腫瘤細(xì)胞破壞，腫瘤細(xì)胞會沿著新生血管開啟的膠原裂縫侵襲新生血管。腫瘤組織中新生血管的增多表明腫瘤的生長速度加快，滲透和轉(zhuǎn)移的可能性增加，病人的存活時間也在縮短，作為血管內(nèi)分泌細(xì)胞的標(biāo)記，CD146 已成為國內(nèi)外科學(xué)家的熱點。[10,11]CD146 是免疫球蛋白(IG)超級家族的一部分，是一種附著分子，其跨膜結(jié)構(gòu)近年來已被發(fā)現(xiàn)。大量數(shù)據(jù)表明，CD146 可以促進(jìn)腫瘤和血液轉(zhuǎn)移的生長。它最初是在黑素瘤細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的，可以通過腫瘤細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和與腫瘤有關(guān)的抗原的標(biāo)準(zhǔn)或非標(biāo)準(zhǔn)粘合來進(jìn)行調(diào)節(jié)[12]。正常情況下，人體血管的生成是處于平衡，但是當(dāng)腫瘤出現(xiàn)后，這種平衡狀態(tài)被打破，而CD146 參與了新生血管的生成，其是腫瘤生長以及轉(zhuǎn)移的必須營養(yǎng)物質(zhì)的來源。

CD146 是一種容易滲透的葡萄糖鏈蛋白，是免疫球蛋白超級家族的一員，與許多細(xì)胞粘合分子同源[13]。CD146，又叫做黑素瘤細(xì)胞粘合分子，最初是黑素瘤細(xì)胞中腫瘤的抗原，通過腫瘤細(xì)胞和腫瘤內(nèi)膜細(xì)胞之間的同質(zhì)或異質(zhì)粘合[14,15]。一些研究機(jī)構(gòu)對不同組織中的CD146 表達(dá)方式給出了不同的名稱，如Muc18、MCAM、抗原A32 和S-Endo-1。CD146 作為Ca2 ＋非依耐性CAM，它參與分離細(xì)胞和細(xì)胞外粘附作用，促進(jìn)腫瘤生長以及血流轉(zhuǎn)移，并與腫瘤和轉(zhuǎn)移狀態(tài)密切相關(guān)，它可以用作腫瘤和轉(zhuǎn)移狀態(tài)的相關(guān)標(biāo)記[16,17]。

本研究通過研究CD146 于內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)的特征對LCNEC 新生血管形成進(jìn)行研究，通過對CD146 的MVD 值的測定，進(jìn)而觀察LCNEC 的發(fā)生、轉(zhuǎn)移以及其預(yù)后關(guān)系。本研究結(jié)果表明，相比較正常肺組織，LCNEC 組織中CD146 表達(dá)更高，并且其MVD 值也更高；LCNEC 組織中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的CD146 表達(dá)遠(yuǎn)高于無轉(zhuǎn)移。因此，推斷LCNEC 組織中，CD146 的MVD 值越高，新生血管的生成也就越多，并且更容易出現(xiàn)淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移，生存的時間也會相應(yīng)越短。

腫瘤的生長以及其擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移都和微血管有著密切的聯(lián)系，不管是原發(fā)性的腫瘤還是轉(zhuǎn)移性腫瘤都依賴微血管增加進(jìn)行擴(kuò)散以及轉(zhuǎn)移[18]。通過研究我們發(fā)現(xiàn)，CD146 在LCNEC組織中的新生血管中的表達(dá)量都較高，進(jìn)而使得新生血管生成減少，使得其有可能能夠成為治療LCNEC 的新方法。