沉液質(zhì)調(diào)節(jié)劑與血液質(zhì)調(diào)節(jié)劑對(duì)正常大鼠肝臟能量代謝的相關(guān)因子的影響

買買提艾力·卡的，熊成，艾尼瓦爾·塔力甫()

(1.新疆醫(yī)科大學(xué)，新疆 烏魯木齊；2.新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)醫(yī)院，新疆 烏魯木齊)

0 引言

體液學(xué)說是維吾爾醫(yī)學(xué)最基本而最重要的學(xué)說之一。體液學(xué)說是指認(rèn)識(shí)人體所有的四種體液并運(yùn)用于生理病理現(xiàn)象的學(xué)說。維吾爾醫(yī)認(rèn)為，體液是在火、氣、水、土等自然界四大物質(zhì)和人體氣質(zhì)的影響下，以攝取的各種飲食為基礎(chǔ)，通過肝臟的正常功能所產(chǎn)生的膽液質(zhì)、血液質(zhì)、黏液質(zhì)、沉液質(zhì)等四種體液[1]。調(diào)節(jié)法，是為調(diào)節(jié)非體液型失調(diào)氣質(zhì)或調(diào)節(jié)輕度體液型氣質(zhì)失調(diào)而用的治療方法。調(diào)節(jié)非體液型(熱性、濕性、寒性、干性和干熱性、濕熱性、濕寒性、干寒性)氣質(zhì)失調(diào)用寒化法、熱化法、濕化法及干化法。調(diào)節(jié)體液型(膽液質(zhì)、血液質(zhì)、黏液質(zhì)、沉液質(zhì))氣質(zhì)失調(diào)，則用相應(yīng)的調(diào)節(jié)劑[2]。

調(diào)節(jié)劑是成熟、調(diào)整及加強(qiáng)免疫功能的復(fù)方劑，它是一個(gè)維吾爾傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的特色療法之一，是治療氣質(zhì)失調(diào)性疾病的最重要的過程；具有調(diào)整氣質(zhì)，提高免疫力，補(bǔ)充液體作用之外，有輔助治療作用，提高治療效果；因此在維吾爾醫(yī)臨床上得以廣泛發(fā)的應(yīng)用[3]。本研究通過分別觀察沉液質(zhì)調(diào)節(jié)劑與血液質(zhì)調(diào)節(jié)劑組對(duì)正常大鼠肝臟能量代謝相關(guān)因子的影響，分析它們的作用趨勢(shì)和特點(diǎn)，為維藥調(diào)節(jié)療法及用藥提供理論依據(jù)，為調(diào)節(jié)劑的研究打下基礎(chǔ)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 試驗(yàn)藥物

1.1.1 沉液質(zhì)調(diào)節(jié)劑制備

分別取牛舌草、水龍骨、破布木果、薰衣草、西青果、香青蘭、天山堇菜、刺糖等藥材(藥材均由新疆維吾爾自治區(qū)自治區(qū)維吾爾醫(yī)醫(yī)院草藥房提供，在新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)醫(yī)院藥學(xué)實(shí)驗(yàn)室制備)，加適量水加熱，于60～70℃浸泡4 小時(shí)，濾過；藥渣加水煎煮1 小時(shí)，同時(shí)收集蒸餾液300mL，煎液濾過，與上述浸液合并，靜置，濾過，濾液濃縮至適量，加入蔗糖和防腐劑適量，加熱使溶解，放冷，加入上述蒸餾液，并加水調(diào)至1000mL，攪勻，即得。

1.1.2 血液質(zhì)調(diào)節(jié)劑制備

分別取訶子、毛訶子、余甘子藥材(藥材均由新疆維吾爾自治區(qū)自治區(qū)維吾爾醫(yī)醫(yī)院草藥房提供，在新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)醫(yī)院藥學(xué)實(shí)驗(yàn)室制備)，以1：1：1 劑量比配制成血液質(zhì)調(diào)節(jié)劑組合方，加入10 倍量水，浸泡60min，回流提取60min，倒出藥液，殘?jiān)偌尤? 倍水，回流提取60min。合并2 次藥液，過濾、濃縮后成1.0g 生藥量/L,-20℃放置備用，用前稀釋成相應(yīng)的濃度。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器

Na+-K+ATP 酶、Ca2+-Mg2+ATP 酶、琥珀酸脫氫酶(SDH)、肝糖原(HG)、三碘甲狀腺原氨酸(T3)、四碘甲狀腺原氨酸(T4)和促甲狀腺激素(TSH)均為武漢基因美生物技術(shù)公司提供的批號(hào)為201903 試劑盒。

由美國(guó)塞默飛世爾(Thermo)科技有限公司出廠的超低溫冰箱、臺(tái)式高速離心機(jī)和移液槍；美國(guó)伯樂公司出廠的低溫離心機(jī)、酶標(biāo)儀和熒光定量PCR 儀；槍頭、美國(guó)Axygen 公司出廠的無酶EP 管和八連拍；美國(guó)Scotsman 公司出廠的AF100型制冰機(jī)；上海醫(yī)用恒溫設(shè)備廠出廠的恒溫箱；上海精博器材公司出廠的組織勻漿機(jī)。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

實(shí)驗(yàn)所使用的SD 大鼠均由新疆醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，許可證號(hào)：SCXK(新)2003-2001。30 只2 月齡的SD 大鼠，均為雄性，體重(222.00±17.89)g、所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)開始前3d，在實(shí)驗(yàn)溫室環(huán)境(21±3)℃下進(jìn)行常規(guī)的適應(yīng)性飼養(yǎng)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 動(dòng)物分組及給藥

動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)性喂養(yǎng)3d，30 只大鼠隨機(jī)分成3 組，即：空白對(duì)照組、沉液質(zhì)調(diào)節(jié)劑組、血液質(zhì)調(diào)節(jié)劑組，每組10只。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室環(huán)境為SPF 級(jí)，按晝夜節(jié)律自然照明，室溫22～26℃，相對(duì)濕度40%～70%CRH。

沉液質(zhì)調(diào)節(jié)劑組與血液質(zhì)調(diào)節(jié)劑組動(dòng)物均按《中華人民共和國(guó)藥典》2010 版成人臨床用量換算成大鼠用藥量，成人用藥量乘以0.018，再乘5 倍，灌胃容積為10mL·kg-1·d-1的量進(jìn)行連續(xù)灌胃給藥30d，空白組給予相等容積的生理鹽水。

2.2 指標(biāo)檢測(cè)

禁食、不禁水12h，腹腔注射0.6 mL 2%戊巴比妥鈉進(jìn)行麻醉，取出肝臟，稱重后準(zhǔn)確稱量一定量肝組織，按重量體積比加9 倍生理鹽水，制成10%的勻漿，以1500r/min 離心10 min，收集上清液，嚴(yán)格按照相應(yīng)試劑盒說明書采用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)進(jìn)行肝組織Na+-K+-ATP 酶、Ca2+-Mg2+-ATP 酶以及琥珀酸脫氫酶(SDH)活性、肝糖原(HG)含量及血漿三碘甲狀腺原氨酸(T3)、四碘甲狀腺原氨酸(T4)、促甲狀腺激素(TSH)含量的檢測(cè)。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)用SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料的描述采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，計(jì)量資料如服從正態(tài)分布采用t檢驗(yàn)，不服從正態(tài)分布采用秩和檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4 結(jié)果

4.1 對(duì)Na+- K+ ATP 酶、Ca2+-Mg2+ ATP 酶、SDH 活力及肝糖原的影響

與空白組比較，沉液質(zhì)調(diào)節(jié)劑組、血液質(zhì)調(diào)節(jié)劑組Na+-K+ATP 酶、Ca2+-Mg2+ATP 酶、SDH 活力及肝糖原均明顯升高，有顯著差異(P＜0.05)；沉液質(zhì)調(diào)節(jié)劑組與血液質(zhì)調(diào)節(jié)機(jī)組比較，Na+- K+ATP 酶、Ca2+-Mg2+ATP 酶、SDH 活力及肝糖原均升高，有顯著差異(P＜0.05)，其中Na+- K+ATP 酶、肝糖原差異更明顯(P＜0.01)；(見圖1)。

4.2 對(duì)血清T3、T4、TSH 的影響

與空白組比較，沉液質(zhì)調(diào)節(jié)劑組血清T3、T4、TSH 水平明顯升高，有顯著差異(P＜0.05)；而血液質(zhì)調(diào)節(jié)劑組沒有明顯變化；沉液質(zhì)與血液質(zhì)調(diào)節(jié)劑組比較，T3、T4、TSH 均有顯著差異(P＜0.05)；(見圖2)。

圖1

圖2

5 討論

線粒體是能量代謝的重要場(chǎng)所，食物被消化后進(jìn)入細(xì)胞，被分解成所需要的分子，進(jìn)入線粒體進(jìn)行三羧酸循環(huán)，然后轉(zhuǎn)化成線粒體電子傳遞鏈所需要的底物，促進(jìn)線粒體的呼吸并合成 ATP[4]。細(xì)胞膜上的ATP 酶被稱為離子泵，參與細(xì)胞的逆濃度梯度的主動(dòng)運(yùn)輸，且酶的活性與轉(zhuǎn)運(yùn)強(qiáng)度成正比。當(dāng)Na+-K+ATP 酶和Ca2+-Mg2+ATP 酶的活性降低時(shí)，會(huì)使細(xì)胞內(nèi)的Na+和Ca2+的外排減少，從而導(dǎo)致Na+和Ca2+大量積聚在細(xì)胞內(nèi)，生物膜上的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的平衡被打破，造成肝細(xì)胞的轉(zhuǎn)運(yùn)功能失常，毒素的外排和物質(zhì)的交換受到影響，肝細(xì)胞受損[5-6]。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示：沉液質(zhì)調(diào)節(jié)劑與血液質(zhì)調(diào)節(jié)劑均提高Na+- K+ATP 酶、Ca2+-Mg2+ATP 酶、SDH 活力及肌糖，提高肝臟的能量代謝，防止多余的Na+和Ca2+聚集在細(xì)胞內(nèi)日，從而加快肝臟物質(zhì)交換，使毒素體外保護(hù)肝臟，沉液質(zhì)調(diào)節(jié)劑與血液質(zhì)調(diào)節(jié)也存在明顯的差異，沉液質(zhì)調(diào)節(jié)劑的作用效果更為明顯。

甲狀腺激素水平的增加也會(huì)刺激其他組織器官，如肌肉、肝臟和心臟的線粒體生物合成[7]，甲狀腺素T3、T4 主要是調(diào)節(jié)物質(zhì)代謝，T3、T4 能促進(jìn)體內(nèi)絕大多數(shù)組織細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)氧化，提高耗氧率，增加產(chǎn)熱，使基礎(chǔ)代謝增高，體溫升高，食欲增加等[8]，促甲狀腺激素TSH 是垂體前葉分泌的一種糖蛋白激素，甲狀腺激素的合成及分泌由促甲狀腺激素(TSH)和交感神經(jīng)雙重機(jī)制調(diào)節(jié)，因此TSH 水平能反應(yīng)甲狀腺的功能狀態(tài)[9-10]。結(jié)果表示：沉液質(zhì)調(diào)節(jié)劑組血清T3、T4、TSH 水平明顯升高，有顯著差異(P＜0.05)；與血液質(zhì)調(diào)節(jié)劑組比較，T3、T4、TSH 也均有顯著差異(P＜0.05)；說明沉液質(zhì)調(diào)節(jié)劑除了能加快肝臟能量代謝，也能明顯的提高甲狀腺水平。這證實(shí)了沉液質(zhì)調(diào)節(jié)劑與血液質(zhì)調(diào)節(jié)劑在臨床上的應(yīng)用價(jià)值，也為以后的維吾爾醫(yī)的成熟療法及清除療法奠定了基礎(chǔ)。