幽門螺桿菌感染病人胃癌組織中MMP-7、VEGF的表達及相關(guān)性研究

任 志，馬振增，王啟之

胃癌是常見的消化道惡性腫瘤，胃癌的發(fā)生是一個多步驟、多因素進行發(fā)展的過程。癌癥的高發(fā)因素中，基質(zhì)金屬蛋白酶-7(MMP-7)與血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)已引起廣泛重視，國內(nèi)外的相關(guān)文獻中有多次報道，但在胃癌的誘發(fā)因素中，MMP-7及VEGF與幽門螺桿菌(Hp)的相互關(guān)系卻鮮有研究;本實驗選取60例胃癌病人，通過用熒光定量PCR法及免疫組織化學(xué)檢測分別測定其中的MMP-7與VEGF的表達，統(tǒng)計分析其表達水平與各臨床病理特征之間有無相關(guān)性，從而探求三者與胃癌之間的相互關(guān)系，以探求胃癌發(fā)生及轉(zhuǎn)移檢測的特異、敏感指標，以助于胃癌病人早期診療及預(yù)后評價。

1 資料與方法

1.1 一般資料 實驗所用胃組織來源于2015年1月至2018年11月蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院普外科手術(shù)室、腫瘤外科手術(shù)室，并由病理醫(yī)生根據(jù)組織切片獨立作出病理診斷。手術(shù)切除組織后，立即取組織置入RNAlater(Ambion,Austin,TX，USA)的EP管內(nèi)，并放入-80 ℃冰箱中，隔日轉(zhuǎn)入液氮中保存?zhèn)溆?。均為?jīng)過影像學(xué)及病理學(xué)檢查確診的胃癌病人60例，其中男43例，女27例，年齡42～83歲。所有病人在術(shù)前均未接受化療、放療等其他針對腫瘤的特殊治療以及針對Hp的治療。

1.2 方法 60例胃癌病人術(shù)前經(jīng)快速尿素酶實驗及C呼氣實驗檢測來判定Hp的感染狀態(tài)，即快速尿素酶實驗及C呼氣實驗檢測均陽性入組Hp陽性組，快速尿素酶實驗及C呼氣實驗檢測均陰性入組Hp陰性組。采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法，對2組胃組織標本中MMP-7及VEGF的mRNA表達水平進行檢測，結(jié)果依據(jù)2-△△Ct計算相對定量結(jié)果；應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)檢測各組胃組織標本中MMP-7及VEGF的蛋白表達水平。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用t(或t′)檢驗、Pearson相關(guān)性分析和Spearman秩相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 Hp陽性與Hp陰性組中MMP-7、VEGF mRNA表達結(jié)果比較 Hp陽性組MMP-7、VEGF mRNA表達均高于Hp陰性組(P<0.01)(見表1)。

分組nMMP-7VEGFHp陰性組301.000±0.0921.000±0.094Hp陽性組301.422±0.0881.465±0.093t—18.1619.26P—<0.01<0.01

2.2 漿膜侵犯、淋巴轉(zhuǎn)移不同的胃癌病人MMP-7和VEGF mRNA表達結(jié)果比較 有漿膜層浸潤、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌病人MMP-7和VEGF mRNA表達量均高于無漿膜層浸潤、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病人(P<0.01)(見表2)。

2.3 MMP-7與VEGF mRNA相關(guān)性 60例標本中MMP-7與VEGF mRNA表達值之間呈正相關(guān)(r=0.498，P<0.01)。

2.4 MMP-7與VEGF免疫組織化學(xué)結(jié)果 MMP-7、VEGF在癌旁正常胃黏膜組織中幾乎不表達或弱表達，表達則呈淺黃色。均定位于細胞質(zhì)，呈棕黃色(見圖1～4)。MMP-7、VEGF蛋白在胃癌組織中的陽性率高于癌旁正常胃組織(61.6%vs 5.3% 56.6% vs 11.3%)，Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示，Hp與MMP-7及VEGF表達呈正相關(guān)，MMP-7和VEGF的表達呈正相關(guān)(P<0.05～P<0.01)(見表3～4)。

分組nMMP-7VEGF無漿膜層浸潤191.000±0.1121.000±0.082有漿膜層浸潤411.315±0.0831.422±0.098t—12.2116.29P—<0.01<0.01無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組191.000±0.1241.000±0.121有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組411.342±0.0801.391±0.087t—11.01?14.26P—<0.01<0.01

*示t′值

表3 Hp與MMP-7、VEGF在胃癌中蛋白表達的相關(guān)性

表4 VEGF與MMP-7在胃癌中蛋白表達的相關(guān)性

3 討論

胃癌是全球癌癥相關(guān)死亡的主要原因之一，排在全部惡性腫瘤的第5位[1]。在中國，隨著人口老齡化的加劇總發(fā)病數(shù)還將隨而增加[2]。國際癌癥機構(gòu)(IARC)已于1994提出Hp是胃癌第Ⅰ類致癌原[3]，Hp感染與胃癌密切相關(guān)已得到全世界的認可[4-5]； SUGIMOTO等[6]研究認為MMPs于胃黏膜炎癥反應(yīng)和Hp相關(guān)疾病的發(fā)生有關(guān)，MMP-7與Hp之間有著相互促進的關(guān)系[7-9]。VEGF在新生血管和淋巴管的生成中發(fā)揮重要作用，因此許多學(xué)者認為VEGF與腫瘤細胞新生血管的生成亦密切相關(guān)；VEGF與MMP-7與腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)移等關(guān)系在肺癌、結(jié)腸癌等腫瘤中已有報道，但在胃癌中鮮有報道[10]；胃癌高發(fā)因素中，MMP-7 與VEGF已引起廣泛的重視[11-14]，但三者之間相互關(guān)系研究報道較少。

本研究結(jié)果顯示，胃癌組織中的MMP-7 與VEGF均高表達，明顯高于同標本來源的正常組織，說明上述因子可能參與了胃癌的發(fā)生、發(fā)展。其中Hp陽性組MMP-7及VEGF表達值與Hp陰性組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，提示在胃癌的發(fā)生、發(fā)展過程中Hp與MMP-7及VEGF可能起到了相互協(xié)同的作用，從而促進了胃癌的進程發(fā)展。實驗中發(fā)現(xiàn)，MMP-7與VEGF表達值兩者之間呈正相關(guān)性，提示兩者存在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中可能也起到了相互協(xié)同的作用。免疫組織化學(xué)結(jié)果中MMP-7、VEGF蛋白在胃癌組織中的陽性率顯著高于癌旁正常胃組織，亦可說明上述因子參與了胃癌的發(fā)生、發(fā)展。經(jīng)Spearman等級相關(guān)分析亦顯示， Hp與MMP-7和VEGF之間呈正相關(guān)性，推測Hp導(dǎo)致胃癌發(fā)生、發(fā)展可能與MMP-7、VEGF過表達相關(guān)。且MMP-7與VEGF表達具有高度一致性，MMP-7可水解包括Ⅳ型膠原蛋白、層黏連蛋白、纖維連接蛋白、酪蛋白等在內(nèi)的多種組織蛋白，VEGF在新生血管和淋巴管的生成中發(fā)揮重要作用，結(jié)合兩者表達的高度一致性提示兩者在胃癌的轉(zhuǎn)移、侵襲等過程中可能存在相互作用，共同促進了腫瘤的轉(zhuǎn)移與浸潤。本研究MMP-7和VEGF在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組及漿膜浸潤組表達值較高，亦表明兩指標與腫瘤轉(zhuǎn)移可能相關(guān)。

綜上，MMP-7、VEGF在胃癌組織中均有較高的表達，均與Hp感染密切相關(guān)，兩者在腫瘤的發(fā)展過程中起著非常重要的作用，且兩者具有相關(guān)性，同時檢測可以從不同角度更好地監(jiān)測腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。