單糖高效液相色譜法檢測技術(shù)應(yīng)用研究進(jìn)展

劉欣欣

摘要：高效液相色譜法具有靈敏度高、時(shí)效高以及操作簡單等多種優(yōu)點(diǎn)，能夠很好的對單糖進(jìn)行有效分析。由此，本文將詳細(xì)闡述通過高效液相色譜法檢測單糖的幾種方法，主要包括：柱前衍生法、柱后衍生法、蒸發(fā)光散射檢測法、示差折光檢測法、電噴霧檢測法等。并從這幾種方法的精確度、靈敏度以及操作方法等方面進(jìn)行分析，詳細(xì)闡述這幾種方法的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)，希望可以為相關(guān)工作人員提供參考。

關(guān)鍵詞：檢測技術(shù);高效液相色譜法;應(yīng)用方法;研究進(jìn)展;單糖

碳水化合物就是我們眾所周知的“糖”，這種物質(zhì)是維持生命正?；顒?dòng)的主要能量，在自然界中有著廣泛的分布。而糖類有著4種存在形式，分別是多糖、單糖、低聚糖以及雙糖。其中，多糖具有抗腫瘤、美白保濕、降血糖、抗腫瘤、抑菌、降血脂以及抗感染等多種功效。所以，通過對多糖中的單糖組分進(jìn)行研究，??????對研究其生物活性有著十分重要的作用;而通過高效液相色譜法進(jìn)行檢測，能夠獲取更為準(zhǔn)確的信息，也在相關(guān)研究中得到廣泛應(yīng)用。

一、柱前衍生法

1.鄰氨苯甲酸衍生法

因?yàn)猷彴北郊姿岽嬖谥欢ǖ拇碳ば砸约岸拘裕粌H會對人體造成危害，還會對環(huán)境帶來破壞，導(dǎo)致其在實(shí)際中很少應(yīng)用。有發(fā)達(dá)國家的研究人員通過將鄰氨苯甲酸作為單糖的衍生試劑進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)其具有靈敏度高、操作簡單以及易獲得等多種優(yōu)點(diǎn)。還有國內(nèi)的研究人員通過使用其作為衍生劑，結(jié)合高效液相色譜法對單糖進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)這種方法具有很高的回收率，還具有可重復(fù)操作性的特點(diǎn)。但是，因?yàn)槠鋵α鲃?dòng)相有著很高的要求，再加上這一衍生劑具有毒性，在使用這種方法時(shí)需要按照相關(guān)流程操作，避免出現(xiàn)意外，故其使用范圍受到一定限制。

2.對氨基苯甲酸衍生法

由于對氨基苯甲酸屬于苯甲酸的苯環(huán)上對位被氨基取代后所形成的的一種化合物，存在中等程度的毒性。通過其能夠與單糖產(chǎn)生反應(yīng)，獲取一種可以被檢測的物質(zhì)，這種檢測方法均有靈敏度高、操作簡單的特點(diǎn)，能夠快速并準(zhǔn)確對樣品進(jìn)行檢測。然而，由于其存在著一定的毒性，所以在現(xiàn)實(shí)中的應(yīng)用比較少。有研究人員通過這種方法對9種單糖進(jìn)行檢測，并適當(dāng)?shù)膶ρ苌鷹l件進(jìn)行了一定的優(yōu)化。發(fā)現(xiàn)通過對衍生條件進(jìn)行優(yōu)化后，測得9種單糖的RSD值均低于4%，r2均大于0.997，有著十分良好的線性關(guān)系，單糖衍生化產(chǎn)物的峰面積也沒有出現(xiàn)較大變化。然而，其中也存在幾種單糖分離度不佳的問題，所以，通過對HPLC-FID法對酸漿多糖進(jìn)行檢測，并開展梯度洗脫，從中分離的幾種單糖效果較好，而且靈敏度也比較高，但是操作步驟比較繁瑣[1]。

二、柱后衍生法

現(xiàn)如今有關(guān)柱后衍生法的參考資料并不是很多，只有小部分研究人員采用這種方法開展對單糖的檢測。有國內(nèi)研究人員基于柱后衍生法，結(jié)合高效液相色譜熒光法對4種單糖（D-果糖、山梨醇、D-葡萄糖、D-阿拉伯糖）進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)這種檢測方法有陣令人滿意的靈敏度，然而這種檢測方法過于復(fù)雜，再加上1-萘硼酸有著一定的毒性，這就極大的影響了該方法的使用范圍[2]。

雖然柱前衍生法具有檢測成本低的優(yōu)點(diǎn)，但是其在衍生時(shí)，很容易引入部分雜質(zhì)，這就會對色譜分離造成極大的影響，甚至?xí)?dǎo)致試驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)誤差。而柱后衍生法即使產(chǎn)生了副產(chǎn)物，也不會對試驗(yàn)的結(jié)果造成影響，并且其對穩(wěn)定性沒有很高的要求，但是需要有相關(guān)的設(shè)備，這樣會提高成本投入，再加上反應(yīng)條件存在限制，所以未得到廣泛應(yīng)用。

三、示差折光檢測法

液相色譜示差折光檢測法是我國目前單糖測定的標(biāo)準(zhǔn)方法。這種方法需要使用專門的示差折光檢測器進(jìn)行檢測，通過這種方法對單糖進(jìn)行檢測不需要衍生處理，所以能夠有效提高檢測效率，并能夠很好的對各種組分進(jìn)行分離，得到了十分廣泛的應(yīng)用。然而，這種方法很容易受到流速、流動(dòng)相以及溫度環(huán)境等多種因素的影響，導(dǎo)致其靈敏度不佳，還無法使用梯度洗脫。

四、蒸發(fā)光散射檢測法

液相色譜蒸發(fā)光散射檢測法也是需要使用相關(guān)的儀器進(jìn)行檢測，主要是蒸發(fā)光散射檢測器，這是一種基于示差折光檢測器而誕生的儀器。這種檢測方法的優(yōu)點(diǎn)在于不僅能夠保留示差折光檢測器的優(yōu)點(diǎn)，還可以彌補(bǔ)其存在的弊端，如無法被梯度洗脫、靈敏度不佳等，還可以有效的消除溫度以及流動(dòng)相對其造成的影響。有研究人員使用這種方法對10種蜂蜜中的單糖進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)檢出限為每升10毫克，確認(rèn)其能夠很好的彌補(bǔ)示差折光檢測器的不足[3]。

電噴霧檢測法

液相色譜電噴霧檢測法是近年來一種新興技術(shù)，其是一種基于蒸發(fā)光散射檢測器而誕生的儀器，是一種通用型質(zhì)量檢測器。其較蒸發(fā)光檢測器靈敏度在同一化合物的檢測限可高出一個(gè)數(shù)量級，且重現(xiàn)性好、檢測范圍更寬，且其工作溫度基本在常溫下完成，對活性物質(zhì)的熱穩(wěn)定性影響較小，在一定程度上彌補(bǔ)了蒸發(fā)光散射檢測器的不足，在單糖檢測方面已開始應(yīng)用，有待進(jìn)一步拓展[4]。

六、結(jié)束語

總而言之，近些年來在單糖的分析中高效液相色譜法得到了十分廣泛的應(yīng)用，通過對其使用的現(xiàn)狀進(jìn)行分析，可以發(fā)現(xiàn)未來的研究方向應(yīng)該有兩點(diǎn)：首先，在柱前衍生中，PMO柱前衍生的使用范圍最為廣泛，然而在進(jìn)行操作時(shí)需要加入衍生劑，這就會導(dǎo)致部分雜質(zhì)融入其中，影響到試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。所以，就需要解決掉誤差問題。其次，蒸發(fā)光散射檢測法及電噴霧檢測法具有靈敏度較高無需衍生的特點(diǎn)，但是正是因?yàn)椴恍枰苌鷮?dǎo)致其保留及各單糖組分間分離度較差，這就需要想辦法提高其保留及分離度，才能夠更好的得到應(yīng)用。

【參考文獻(xiàn)】

方宏， 曾健智. 高效液相色譜法檢測蔗渣光纖維素水解物中的單糖[J]. 廣西科學(xué)院學(xué)報(bào)， 2018，16（3）：124-126.

[2]熱孜萬古力·賽買提， 陳士恩， 高丹丹，等. 單糖高效液相色譜法檢測技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 食品與機(jī)械， 2018，v.34;No.196（2）：191-196.

[3]?田靈敏， 邱雪梅， 潘子敬， 等. 新型糖組成高效液相色譜分析技術(shù)的構(gòu)建及其在水飛薊多糖質(zhì)控中的應(yīng)用[J]. 藥學(xué)學(xué)報(bào)，2018，（4）：90-96.

[4]李心怡，蔣運(yùn)斌，馬逾英.電噴霧檢測器在藥物HPLC分析中的優(yōu)勢及應(yīng)用進(jìn)展[J]. 中國藥房，2017，28（15）：2152-2155.