• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    番茄內(nèi)生枝孢霉Wx103對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)毒性的研究

    2020-07-04 03:05:52姚玉榮霍建飛郝永娟劉春艷王萬(wàn)立
    山東農(nóng)業(yè)科學(xué) 2020年2期
    關(guān)鍵詞:根結(jié)線蟲(chóng)內(nèi)生真菌防效

    姚玉榮 霍建飛 郝永娟 劉春艷 王萬(wàn)立

    摘要:本研究從番茄根結(jié)中分離得到一株根結(jié)線蟲(chóng)的內(nèi)生生防真菌Wx103,經(jīng)鑒定為Acremonium sclerotigenum。該菌株發(fā)酵液對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)2齡幼蟲(chóng)具有較強(qiáng)的毒殺活性,發(fā)酵液處理24 h后的校正死亡率為90.25%,處理7 d對(duì)卵孵化抑制率為41.04%;盆栽試驗(yàn)中孢子液處理線蟲(chóng)防效為68.72%,與3%阿維菌素微囊懸浮劑處理無(wú)顯著差異。本研究豐富了根結(jié)線蟲(chóng)生物防治的微生物資源,可為該菌株的開(kāi)發(fā)利用提供一定的理論基礎(chǔ)。

    關(guān)鍵詞:內(nèi)生真菌;根結(jié)線蟲(chóng);Wx103;防效

    中圖分類號(hào):S476.1 ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào):A ?文章編號(hào):1001-4942(2020)02-0101-05

    Abstract A strain of endophytic fungus Wx103 was screened from tomato with high efficacy against root knot nematode and was identified as Acremonium sclerotigenum. Its fermentation solution had stronger lethal activity against the two-instar larva, and the corrected mortality was 90.25% after treated for 24 hours. Furthermore, the Wx103 strain exhibited higher ovicidal efficacy of 41.04% after treated for 7 days. In the pot experiment, the root galls caused by Meloidogyne incognita decreased by 68.72%, which was not significantly different from 3% abamection micro-capsule SC. The finding of the study enriched the microbial resources against root-knot nematode, and provided references for development and utilization of this strain.

    Keywords Endophytic fungus; Root-knot nematode; Wx103; Control effect

    根結(jié)線蟲(chóng)(Meloidogyne spp.)是一類主要侵染植物的病原微生物,也是世界各國(guó)對(duì)外檢疫的重要對(duì)象,它給全球農(nóng)業(yè)生產(chǎn)帶來(lái)了極大危害[1]。自1932年首次報(bào)道番茄根結(jié)線蟲(chóng)病害發(fā)生以來(lái),我國(guó)發(fā)生省區(qū)已超過(guò)十個(gè)。近年來(lái)保護(hù)地蔬菜的迅猛發(fā)展加速了該病害的發(fā)生,致使該病害成為限制保護(hù)地蔬菜發(fā)展的主要因素,防控形勢(shì)相當(dāng)嚴(yán)峻[2]。

    植物內(nèi)生真菌是指生活史的某一階段或者全部階段生活在健康植物組織內(nèi)部,但并不引起宿主植物病害癥狀的一類真菌[3]。內(nèi)生真菌能夠通過(guò)提高寄主植物抗性、改變寄主植物對(duì)病蟲(chóng)害的應(yīng)答反應(yīng)來(lái)提高寄主植物對(duì)逆境及病蟲(chóng)害的抵抗。內(nèi)生真菌防治植物寄生線蟲(chóng)具有明顯優(yōu)勢(shì),其存活于植物體內(nèi),可避免與土壤微生物競(jìng)爭(zhēng),并與寄生線蟲(chóng)處于相似的生態(tài)位,能夠更充分地發(fā)揮作用,從而提高生物防治微生物的靶向性和高效性。 West等[4]研究表明,內(nèi)生尖孢鐮刀菌Fosurium oxysporum能夠顯著降低南方根結(jié)線蟲(chóng)(Meloidogyne incognita)對(duì)番茄的侵染率,與對(duì)照相比線蟲(chóng)數(shù)量減少36.0%~55.9%。根部?jī)?nèi)生真菌印度梨形孢(Piriformospora indica)不僅能夠顯著降低大豆胞囊線蟲(chóng)的種群密度,還能提高寄主植物生物和非生物抗性[5]。目前已經(jīng)報(bào)道的防治線蟲(chóng)的內(nèi)生真菌主要從屬于枝孢霉屬(Acremonium)[4,6]、毛殼菌屬(Chaetomium)[7]、鐮刀菌屬(Fusarium)[8-10]、黑盤(pán)孢屬(Melanconium)[11]、青霉菌屬(Penicillium)[12]、擬莖點(diǎn)霉屬(Phomopsis)[11]等。生產(chǎn)中根結(jié)線蟲(chóng)的防治通常采用化學(xué)農(nóng)藥防治、生物防治及抗病品種利用等,化學(xué)農(nóng)藥主要包括阿維菌素、噻唑膦等。

    本研究擬從番茄根結(jié)中分離根結(jié)線蟲(chóng)生防菌,繼而對(duì)篩選得到的生防菌株進(jìn)行形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定,再分別利用菌株發(fā)酵液浸泡和盆栽試驗(yàn)測(cè)定其對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)的防治效果,以期為根結(jié)線蟲(chóng)病的防治提供新的生防資源。

    1 材料與方法

    1.1 樣品采集

    番茄根結(jié)樣品采集地點(diǎn)為天津市武清區(qū)下伍旗溫室大棚。該棚種植番茄多年,根結(jié)線蟲(chóng)病發(fā)病嚴(yán)重。

    1.2 真菌菌株Wx103的分離鑒定

    采用常規(guī)組織分離法。將新鮮的番茄根結(jié)清洗干凈,用無(wú)菌刀片削除根結(jié)表皮,0.5%次氯酸鈉浸泡30 s,無(wú)菌水清洗3次,滅菌紙吸干水分后切成小塊,再置于含有0.1 g/L氨芐青霉素的PDA培養(yǎng)基上。之后于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3~4 d,待長(zhǎng)出菌絲后進(jìn)行單孢純化,并將分離得到的菌株保存?zhèn)溆谩F渲?,一株真菌命名為Wx103。

    依據(jù)形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)方法分別對(duì)菌株 Wx103進(jìn)行鑒定。參考《中國(guó)真菌志》進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定,分子生物學(xué)鑒定則采用ITS序列分析。將分離得到的菌株接種到PDA培養(yǎng)基上,置于25℃培養(yǎng),收集菌絲,后用CTAB法提取總DNA。利用真菌ITS序列通用引物ITS1(ITS1: 5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′)和ITS4 (ITS4: 5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′)[13]進(jìn)行PCR擴(kuò)增。擴(kuò)增體系:2×EsTaq Master Mix(Dye)25 μL,上下游引物各2 μL,DNA模板2 μL,ddH2O 19 μL。擴(kuò)增程序:94℃ 4 min;94℃ 30 s,58℃ 30 s,72℃ 50 s,共35個(gè)循環(huán);72℃ 10 min。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1.2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)后送天津金唯智生物科技有限公司測(cè)序。測(cè)序結(jié)果用BLAST進(jìn)行同源性分析,并通過(guò)MEGA 5.0軟件用鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù),在分子水平上鑒定菌株種類。

    1.3 Wx103發(fā)酵液的制備

    挑選PDA平板上生長(zhǎng)良好的菌落,取直徑0.5 cm的菌餅接種于含PDB的三角瓶中,28℃、120 r/min培養(yǎng)5 d得到真菌發(fā)酵液,再經(jīng)5 000 r/min離心15 min,得發(fā)酵上清液(以下稱發(fā)酵原液)。

    1.4 南方根結(jié)線蟲(chóng)卵及其二齡幼蟲(chóng)J2的制備

    南方根結(jié)線蟲(chóng)來(lái)源于天津市植物保護(hù)研究所蔬菜病害室。將感染南方根結(jié)線蟲(chóng)的辣椒苗病根洗凈,解剖鏡下挑取新鮮卵塊,用0.5% NaClO表面消毒,清水洗凈。一部分卵塊經(jīng)0.5% NaClO振蕩解離后,收集游離卵制備卵懸浮液(每毫升卵量約1 000個(gè)),另一部分卵在28℃孵化出南方根結(jié)線蟲(chóng)二齡幼蟲(chóng)J2。

    1.5 Wx103發(fā)酵液對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)毒力測(cè)定

    1.5.1 對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)卵的生物活性 試驗(yàn)設(shè)置3個(gè)處理,分別為:Wx103發(fā)酵原液、陽(yáng)性對(duì)照(3%阿維菌素微囊懸浮液稀釋2 000倍)、對(duì)照(無(wú)菌水)。取100 μL濾液于96孔板的小孔中,每處理加入約100個(gè)南方根結(jié)線蟲(chóng)卵,重復(fù)3次。置25℃孵化,于3、5、7 d統(tǒng)計(jì)根結(jié)線蟲(chóng)孵化量,計(jì)算卵孵化抑制率:

    抑制率(%)=(對(duì)照線蟲(chóng)孵化量-處理線蟲(chóng)孵化量)/對(duì)照線蟲(chóng)孵化量×100 。

    1.5.2 對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)二齡幼蟲(chóng)的生物活性 處理設(shè)置同1.5.1,采用觸殺法進(jìn)行殺線蟲(chóng)活性測(cè)定。取100 μL濾液于96孔板的小孔中,每處理加入約100條南方根結(jié)線蟲(chóng),重復(fù)5次,置25℃培養(yǎng),分別于24、48 h后統(tǒng)計(jì)死亡線蟲(chóng)數(shù)量(將線蟲(chóng)在清水中恢復(fù)2 h,線蟲(chóng)僵直,針刺不動(dòng)視為死亡),計(jì)算校正死亡率:

    校正死亡率(%)=(處理死亡率-對(duì)照死亡率) /(1-對(duì)照死亡率) ×100 。

    1.6 Wx103孢子液對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)防效的盆栽鑒定

    將菌株Wx103接種于200 mL PDB溶液(含有100 mg/mL氨芐青霉素鈉)中,28℃、150 r/min恒溫培養(yǎng)3 d后,過(guò)濾菌絲,收集孢子,統(tǒng)計(jì)孢子濃度并將其調(diào)至107 cfu/mL。每千克土加入100 mL菌液,混勻。待番茄幼苗兩片真葉完全展開(kāi)后移栽到拌好孢子液的土壤中,14 d后每株接線蟲(chóng)1 000條,每處理15株,重復(fù)3次。接種線蟲(chóng)45 d后清洗番茄根部,根據(jù)蔬菜根結(jié)線蟲(chóng)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)計(jì)根結(jié)情況,計(jì)算菌株對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)的防效[14]:

    防效=(空白對(duì)照根結(jié)數(shù)-處理根結(jié)數(shù))/空白對(duì)照根結(jié)數(shù)×100% 。

    1.7 數(shù)據(jù)分析

    使用Microsoft Excel 2010軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì), SAS 9.1軟件進(jìn)行方差分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 菌株鑒定

    試驗(yàn)用菌株Wx103在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)5 d后,菌落呈現(xiàn)白色(圖1)。

    通過(guò)對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行BLAST序列比對(duì)發(fā)現(xiàn),分離菌株在進(jìn)化樹(shù)上與枝孢霉Acremonium sclerotigenum isolate HB2同源性達(dá)到99.8%(圖2),結(jié)合菌株形態(tài)特征,將菌株鑒定為Acremonium sclerotigenum strain Wx103。

    2.2 Wx103發(fā)酵原液對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)卵的生物活性

    由圖3可以看出,與對(duì)照(抑制率為零)相比,發(fā)酵原液對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)卵囊孵化具有抑制作用。發(fā)酵原液處理3 d對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)卵囊孵化的抑制率達(dá)到70.06%,但顯著低于3%阿維菌素微囊懸浮劑處理的抑制率92.09%;處理5、7 d時(shí),發(fā)酵液對(duì)卵孵化的抑制率分別為57.02%和41.04%,均顯著低于同期的3%阿維菌素微囊懸浮劑處理。

    2.3 Wx103發(fā)酵原液對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)二齡幼蟲(chóng)J2的生物活性

    由圖4可以看出,菌株Wx103發(fā)酵原液處理根結(jié)線蟲(chóng)J2,其24 h的校正死亡率達(dá)到90%以上,與3%阿維菌素微囊懸浮劑處理的致死活性相當(dāng)。發(fā)酵原液稀釋2、4、10倍后,殺線蟲(chóng)活性并未顯著降低,表明真菌Wx103發(fā)酵原液中含有高效殺線蟲(chóng)活性物質(zhì)。

    2.4 Wx103孢子液對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)防效的盆栽試驗(yàn)

    由圖5可以看出,Wx103孢子液處理的番茄根結(jié)平均數(shù)量為28.55個(gè),3%阿維菌素微囊懸浮劑處理的為23.71個(gè),對(duì)照則高達(dá)91.29個(gè)。孢子液和3%阿維菌素微囊懸浮劑處理對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)的防效分別為68.72%和74.09%,兩者并無(wú)顯著差異(圖6)。觀察發(fā)現(xiàn),孢子液處理的番茄根結(jié)數(shù)量少、根系發(fā)達(dá)、植株健壯,而對(duì)照根結(jié)較多、須根少,這表明菌株Wx103不僅能夠降低根結(jié)線蟲(chóng)的侵染,同時(shí)能夠促進(jìn)番茄生長(zhǎng)。

    3 討論與結(jié)論

    大多數(shù)內(nèi)生真菌對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)的影響是通過(guò)產(chǎn)生次級(jí)代謝產(chǎn)物作用于線蟲(chóng)體內(nèi)的酶系或代謝反應(yīng)抑制或者殺死線蟲(chóng)[15]。內(nèi)生尖孢鐮刀菌Fusarium oxysporum FO162發(fā)酵液處理線蟲(chóng)60 min后,90%的線蟲(chóng)喪失活力,處理24 h后的線蟲(chóng)死亡率高達(dá)100%[8]。Schwarz等[11]報(bào)道了內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)生的3-Hydroxypropionic acid物質(zhì)對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)的毒殺活性。Tian等[16]利用從番茄根結(jié)上分離的內(nèi)生真菌交枝頂孢Acremonium implicatum處理南方根結(jié)線蟲(chóng)48 h后,線蟲(chóng)死亡率可達(dá)96%以上,盆栽試驗(yàn)中該菌株對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)的防效達(dá)到66.7%。Kpcke等[17]證實(shí)內(nèi)生子囊菌代謝產(chǎn)生的次級(jí)代謝物內(nèi)酯類化合物對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)具有良好的致死活性。

    本研究從番茄根結(jié)中分離得到一株內(nèi)生真菌,經(jīng)鑒定為Acremonium sclerotigenum,其發(fā)酵液對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)J2具有較強(qiáng)毒性,能夠抑制根結(jié)線蟲(chóng)卵囊孵化。盆栽試驗(yàn)結(jié)果顯示該菌株孢子液顯著降低了根結(jié)數(shù)量,對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)的防治效果與3%阿維菌素微囊懸浮劑相當(dāng)??梢酝茰y(cè)在菌株孢子液中存在對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)具有較強(qiáng)毒性的代謝產(chǎn)物,這種物質(zhì)多為次級(jí)代謝產(chǎn)物。因此,番茄內(nèi)生真菌Acremonium sclerotigenum strain Wx103對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)具有生防作用,在后續(xù)的研究中應(yīng)深入挖掘發(fā)酵液中活性的物質(zhì)成分,為該菌株生防菌劑的開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。

    參 考 文 獻(xiàn):

    [1] Abad P, Gouzy J, Aury J M, et al. Genome sequence of the metazoan plant-parasitic nematode Meloidogyne incognita[J]. Nature Biotechnology, 2008, 26(8):909-915.

    [2] 張桂娟, 何立月, 許淑紅, 等.大興區(qū)蔬菜根結(jié)線蟲(chóng)(Meloidogyne incognita)病的發(fā)生特點(diǎn)、防治現(xiàn)狀與治理對(duì)策[M]//廖金鈴,彭德良,段玉璽.中國(guó)線蟲(chóng)學(xué)研究(第3卷). 北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)出版社,2010:157-160.

    [3] 田雪亮,郎劍鋒,陸寧海,等.一株番茄根結(jié)內(nèi)生真菌對(duì)根結(jié)線蟲(chóng)的防效鑒定[J].河南科技學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2012,40(2):27-30.

    [4] West C P, Izekor E, Oosterhuis D M, et al. The effect of Acremonium coenophialum on the growth and nematode infestation of tall fescue[J]. Plant and Soil, 1988, 112(1): 3-6.

    [5] Daneshkhah R, Cabello S, Rozanska E, et al. Piriformospora indica antagonizes cyst nematode infection and development in Arabidopsis roots[J]. Journal of Experimental Botany, 2013, 64(12): 3763-3774.

    [6] Elmi A A, West C P, Robbins R T, et al. Endophyte effects on reproduction of a root-knot nematode (Meloidogyne marylandi) and osmotic adjustment in tall fescue[J]. Grass and Forage Science, 2000, 55(2): 166-172.

    [7] Hu Y, Zhang W, Zhang P, et al. Nematicidal activity of chaetoglobosin A poduced by Chaetomium globosum NK102 against Meloidogyne incognita[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2013, 61(1): 41-46.

    [8] Hallmann J, Sikora R A. Toxicity of fungal endophyte secondary metabolites to plant parasitic nematodes and soil-borne plant pathogenic fungi[J]. European Journal of Plant Pathology, 1996, 102(2): 155-162.

    [9] Dababat A E A, Sikora R A. Induced resistance by the mutualistic endophyte, Fusarium oxysporum strain 162, toward Meloidoyne incognita on tomato[J]. Biocontrol Science and Technology, 2007, 17(9):969-975.

    [10] Vu T, Sikora R, Hauschild R. Fusarium oxysporum endophytes induced systemic resistance against Radopholus similis on banana[J]. Nematology, 2006, 8:847-852.

    [11] Schwarz M, Kpcke B, Weber R W S, et al. 3-Hydroxypropionic acid as a nematicidal principle in endophytic fungi[J]. Phytochemistry, 2004, 65(15): 2239-2245.

    [12] 鄭喜, 李國(guó)紅,王芯, 等. 昆明山海棠內(nèi)生真菌ThF-11化學(xué)成分抗菌殺線蟲(chóng)作用的研究[J]. 中國(guó)藥理學(xué)通報(bào), 2014, 30(12):1709-1713.

    [13] Van Nguyen N, Kim Y J, Oh K T, et al. The role of chitinase from Lecanicillium antillanum B-3 in parasitism to root-knot nematode Meloidogyne incognita eggs[J]. Biocontrol Science and Technology, 2007, 17(10): 1047-1058.

    [14] Moosavi M R, Zare R, Zamanizadeh H R, et al. Pathogenicity of Pochonia species on eggs of Meloidogyne javanica[J]. Journal of Invertebrate Pathology, 2010, 104(2): 125-133.

    [15] Schouten A. Mechanisms involved in nematode control by endophytic fungi[J]. Annu. Rev. Phytopathol., 2016.54:121-142.

    [16] Tian X, Yao Y, Chen G, et al. Suppression of Meloidogyne incognita by the endophytic fungus Acremonium implicatum from tomato root galls[J]. International Journal of Pest Management, 2014, 60(4): 239-245.

    [17] Kpcke B, Johansson M, Sterner O, et al. Biologically active secondary metabolites from the Ascomycete A111-95.1 production, isolation and biological activities[J]. The Journal of Antibiotics, 2002, 55(1):36-40.

    猜你喜歡
    根結(jié)線蟲(chóng)內(nèi)生真菌防效
    黃草烏根部?jī)?nèi)生真菌的分離與鑒定
    鴨腳樹(shù)星室木虱的防治藥劑篩選試驗(yàn)
    30%苯甲·丙環(huán)唑不同施藥期對(duì)水稻紋枯病防效及產(chǎn)量效應(yīng)的試驗(yàn)研究
    不同藥劑拌種防治水稻病蟲(chóng)害藥效試驗(yàn)初報(bào)
    除草劑混劑對(duì)水稻田雜草防效探究
    內(nèi)生真菌在中藥現(xiàn)代化中的作用
    大棚蔬菜根結(jié)線蟲(chóng)病害調(diào)查研究以及防治對(duì)策
    科技視界(2016年7期)2016-04-01 09:10:06
    茶樹(shù)內(nèi)生真菌研究進(jìn)展
    不同氮源對(duì)海洋真菌BH0531發(fā)酵液殺線蟲(chóng)活性的影響
    披針葉黃華中2株蠕形分生孢子內(nèi)生真菌的鑒定
    国产成人午夜福利电影在线观看| 青春草视频在线免费观看| 97人妻天天添夜夜摸| 亚洲综合色网址| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 久久精品国产亚洲av涩爱| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 99热全是精品| 春色校园在线视频观看| 日日摸夜夜添夜夜爱| 国产亚洲欧美精品永久| 色婷婷av一区二区三区视频| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 男女下面插进去视频免费观看| 99精国产麻豆久久婷婷| 亚洲久久久国产精品| 日韩在线高清观看一区二区三区| 国产亚洲精品第一综合不卡| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 午夜激情av网站| 日本欧美国产在线视频| 精品少妇内射三级| 久久97久久精品| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 波多野结衣一区麻豆| 国产在线视频一区二区| 国产av一区二区精品久久| 国产亚洲精品第一综合不卡| 亚洲精品一区蜜桃| 精品人妻一区二区三区麻豆| 国产一级毛片在线| 婷婷色av中文字幕| 麻豆乱淫一区二区| 国产精品免费视频内射| 亚洲一区中文字幕在线| 免费观看无遮挡的男女| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 一级毛片电影观看| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 国产日韩一区二区三区精品不卡| 精品久久蜜臀av无| av又黄又爽大尺度在线免费看| 国产麻豆69| 久久久久精品久久久久真实原创| 69精品国产乱码久久久| 观看av在线不卡| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 丝袜人妻中文字幕| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 天天操日日干夜夜撸| 国产av码专区亚洲av| 女人久久www免费人成看片| 国产毛片在线视频| 亚洲,欧美精品.| 免费看不卡的av| 日韩在线高清观看一区二区三区| 蜜桃在线观看..| 秋霞伦理黄片| 亚洲人成网站在线观看播放| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 午夜影院在线不卡| 丁香六月天网| 午夜影院在线不卡| 国产色婷婷99| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 国产xxxxx性猛交| 一区福利在线观看| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 大陆偷拍与自拍| 国产精品二区激情视频| 18禁国产床啪视频网站| 欧美激情 高清一区二区三区| 亚洲欧美成人精品一区二区| 免费看不卡的av| 午夜福利,免费看| 国产一区二区三区综合在线观看| 国产探花极品一区二区| 欧美激情 高清一区二区三区| 欧美人与善性xxx| 欧美激情极品国产一区二区三区| av有码第一页| 成人亚洲欧美一区二区av| 久久久久精品人妻al黑| 久久久久国产网址| 黄色一级大片看看| 国产精品.久久久| 国产成人精品福利久久| 国产在线视频一区二区| 亚洲中文av在线| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产精品国产av在线观看| 日本91视频免费播放| 美女午夜性视频免费| 精品人妻在线不人妻| 国产伦理片在线播放av一区| 国产成人一区二区在线| 久久精品国产亚洲av涩爱| 国产成人精品福利久久| 国产精品一区二区在线观看99| 亚洲成人av在线免费| 午夜福利网站1000一区二区三区| 久久免费观看电影| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 青草久久国产| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 亚洲欧洲国产日韩| 国产成人免费观看mmmm| 午夜激情久久久久久久| www.熟女人妻精品国产| 国产成人av激情在线播放| 亚洲色图综合在线观看| 嫩草影院入口| 99久国产av精品国产电影| 国产精品久久久久久精品电影小说| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 久久精品国产a三级三级三级| 99久久人妻综合| 欧美av亚洲av综合av国产av | videos熟女内射| 亚洲欧美色中文字幕在线| 亚洲第一av免费看| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 久久亚洲国产成人精品v| 欧美+日韩+精品| 午夜福利在线免费观看网站| 成年美女黄网站色视频大全免费| 边亲边吃奶的免费视频| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 99香蕉大伊视频| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 可以免费在线观看a视频的电影网站 | 亚洲中文av在线| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 2022亚洲国产成人精品| 看非洲黑人一级黄片| 国产成人免费观看mmmm| 日韩av免费高清视频| 搡老乐熟女国产| 久久 成人 亚洲| 欧美日韩av久久| 热re99久久精品国产66热6| 九九爱精品视频在线观看| 一区福利在线观看| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 人成视频在线观看免费观看| 日本午夜av视频| 七月丁香在线播放| 久久久久人妻精品一区果冻| 99久久综合免费| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 欧美成人午夜精品| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 久久久a久久爽久久v久久| 日韩一区二区视频免费看| 99re6热这里在线精品视频| 最近中文字幕2019免费版| 国产成人精品久久二区二区91 | 亚洲国产看品久久| 午夜免费男女啪啪视频观看| 99re6热这里在线精品视频| 熟女电影av网| 1024视频免费在线观看| av福利片在线| av网站在线播放免费| 91久久精品国产一区二区三区| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 美国免费a级毛片| 国产精品嫩草影院av在线观看| 日韩一区二区三区影片| 亚洲少妇的诱惑av| 免费看不卡的av| 丝袜美腿诱惑在线| av在线观看视频网站免费| 国产成人91sexporn| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 午夜免费观看性视频| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | av国产久精品久网站免费入址| 9热在线视频观看99| 美女视频免费永久观看网站| 欧美97在线视频| 国产成人精品福利久久| 国产福利在线免费观看视频| 中文字幕人妻熟女乱码| 欧美中文综合在线视频| 美女福利国产在线| 九色亚洲精品在线播放| 丝瓜视频免费看黄片| 男女无遮挡免费网站观看| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 又大又黄又爽视频免费| 久久久精品94久久精品| 午夜91福利影院| 久久精品夜色国产| 国产乱人偷精品视频| 两个人免费观看高清视频| 性高湖久久久久久久久免费观看| 久久久久久久久久久久大奶| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 亚洲精品av麻豆狂野| a 毛片基地| av在线app专区| 99国产精品免费福利视频| 亚洲一码二码三码区别大吗| 日韩精品有码人妻一区| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 国产精品久久久久久av不卡| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 老熟女久久久| 尾随美女入室| 亚洲欧美精品自产自拍| 欧美bdsm另类| 色哟哟·www| 亚洲四区av| 国产精品蜜桃在线观看| 亚洲三区欧美一区| 老熟女久久久| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 欧美av亚洲av综合av国产av | 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 水蜜桃什么品种好| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 黄色配什么色好看| 久久久亚洲精品成人影院| 丝袜人妻中文字幕| 国产精品欧美亚洲77777| 免费观看无遮挡的男女| 一边摸一边做爽爽视频免费| 精品人妻一区二区三区麻豆| 亚洲国产日韩一区二区| 日韩av不卡免费在线播放| 亚洲精品乱久久久久久| 久久97久久精品| 国产精品国产三级国产专区5o| 欧美精品高潮呻吟av久久| 看免费成人av毛片| 18在线观看网站| 夫妻午夜视频| 在现免费观看毛片| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 国产成人精品无人区| 少妇的丰满在线观看| 免费观看性生交大片5| 丰满饥渴人妻一区二区三| 国产xxxxx性猛交| 国产av精品麻豆| 日本wwww免费看| 久久97久久精品| 亚洲精品成人av观看孕妇| 国产一区有黄有色的免费视频| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 街头女战士在线观看网站| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 99久久精品国产国产毛片| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 国产毛片在线视频| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 99九九在线精品视频| 中文字幕制服av| 高清视频免费观看一区二区| 最新的欧美精品一区二区| 亚洲综合色网址| 日韩免费高清中文字幕av| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 国产毛片在线视频| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 多毛熟女@视频| 国产精品嫩草影院av在线观看| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 老司机影院毛片| 少妇被粗大猛烈的视频| 色哟哟·www| 亚洲欧美一区二区三区久久| 亚洲美女搞黄在线观看| 两个人免费观看高清视频| 久久久久久久久久久久大奶| 777米奇影视久久| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 久久精品国产亚洲av天美| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 婷婷色综合大香蕉| 色视频在线一区二区三区| 激情视频va一区二区三区| 国产成人午夜福利电影在线观看| 成人毛片60女人毛片免费| 亚洲av福利一区| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 蜜桃国产av成人99| 亚洲,欧美精品.| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 亚洲内射少妇av| 亚洲国产精品成人久久小说| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 亚洲久久久国产精品| 中文欧美无线码| 成人漫画全彩无遮挡| 热re99久久精品国产66热6| 国产伦理片在线播放av一区| 只有这里有精品99| 在线观看国产h片| 国产精品国产三级国产专区5o| 亚洲,欧美精品.| 国产精品偷伦视频观看了| 中国国产av一级| 性色av一级| 免费在线观看完整版高清| 街头女战士在线观看网站| 人人妻人人澡人人看| 国产精品欧美亚洲77777| 国产精品嫩草影院av在线观看| 国产免费又黄又爽又色| 国产成人精品久久二区二区91 | 精品酒店卫生间| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 日本爱情动作片www.在线观看| 性色av一级| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 美女主播在线视频| 国产免费视频播放在线视频| 久久久久久久大尺度免费视频| 成年人免费黄色播放视频| 日本午夜av视频| 美女福利国产在线| 伊人久久国产一区二区| 99精国产麻豆久久婷婷| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 成人亚洲欧美一区二区av| 久久久亚洲精品成人影院| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 亚洲av日韩在线播放| 一级毛片电影观看| 一级a爱视频在线免费观看| 国产午夜精品一二区理论片| 久久免费观看电影| 欧美另类一区| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 亚洲在久久综合| 精品国产乱码久久久久久小说| 丝袜美足系列| 新久久久久国产一级毛片| 亚洲欧美精品自产自拍| 日韩av免费高清视频| 亚洲五月色婷婷综合| 91精品三级在线观看| 国产极品粉嫩免费观看在线| 99九九在线精品视频| 一级爰片在线观看| 国产精品 国内视频| 青春草亚洲视频在线观看| 亚洲成人一二三区av| 欧美+日韩+精品| 免费在线观看黄色视频的| 久久韩国三级中文字幕| 涩涩av久久男人的天堂| 制服丝袜香蕉在线| 日韩av免费高清视频| 国产日韩欧美视频二区| 欧美日本中文国产一区发布| 99热国产这里只有精品6| 国产在视频线精品| 久久这里有精品视频免费| 久久99蜜桃精品久久| 黄色毛片三级朝国网站| videos熟女内射| 边亲边吃奶的免费视频| 国产高清国产精品国产三级| 999精品在线视频| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 曰老女人黄片| 亚洲国产精品999| 日韩中字成人| 午夜91福利影院| 午夜福利乱码中文字幕| 久久精品亚洲av国产电影网| 天美传媒精品一区二区| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 久久人妻熟女aⅴ| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 成年av动漫网址| 国产成人精品久久二区二区91 | 成人毛片60女人毛片免费| 精品一区在线观看国产| 超碰97精品在线观看| 国产男女超爽视频在线观看| 精品久久蜜臀av无| 一级黄片播放器| 成人免费观看视频高清| 777米奇影视久久| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 黄色配什么色好看| 最近最新中文字幕免费大全7| 久久精品夜色国产| 黄色配什么色好看| av又黄又爽大尺度在线免费看| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 国产一区二区三区综合在线观看| 色婷婷av一区二区三区视频| 五月天丁香电影| 欧美黄色片欧美黄色片| 国产麻豆69| 久久久久网色| 18禁国产床啪视频网站| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 免费少妇av软件| 香蕉国产在线看| 国产在视频线精品| 久久毛片免费看一区二区三区| 男人操女人黄网站| 国产精品久久久久成人av| 午夜福利,免费看| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 人妻少妇偷人精品九色| 亚洲精品美女久久av网站| 大码成人一级视频| 成人二区视频| 精品国产露脸久久av麻豆| 国产高清国产精品国产三级| 国产又爽黄色视频| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 高清不卡的av网站| 日韩精品免费视频一区二区三区| 欧美精品高潮呻吟av久久| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 男男h啪啪无遮挡| 一区二区日韩欧美中文字幕| 观看av在线不卡| 热99国产精品久久久久久7| 精品人妻在线不人妻| 五月伊人婷婷丁香| av女优亚洲男人天堂| 美女高潮到喷水免费观看| 精品午夜福利在线看| 婷婷色av中文字幕| 国产成人精品久久久久久| 黄色怎么调成土黄色| 老女人水多毛片| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 亚洲四区av| 人妻一区二区av| 大码成人一级视频| 飞空精品影院首页| 久久99一区二区三区| av在线播放精品| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 日韩一区二区三区影片| 色网站视频免费| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 国产野战对白在线观看| 久久精品亚洲av国产电影网| 中文字幕精品免费在线观看视频| 99re6热这里在线精品视频| 日韩三级伦理在线观看| 国产精品蜜桃在线观看| 成人毛片60女人毛片免费| 大片免费播放器 马上看| 亚洲人成网站在线观看播放| 国产成人91sexporn| 一边摸一边做爽爽视频免费| 欧美激情高清一区二区三区 | 国产精品三级大全| 极品少妇高潮喷水抽搐| 日本午夜av视频| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 成人亚洲欧美一区二区av| 成人影院久久| 国产免费又黄又爽又色| 99热国产这里只有精品6| 精品少妇一区二区三区视频日本电影 | 国产一区二区 视频在线| 精品亚洲成a人片在线观看| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 咕卡用的链子| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | tube8黄色片| 欧美日韩一级在线毛片| 9热在线视频观看99| 丝袜美腿诱惑在线| 免费观看性生交大片5| 少妇被粗大的猛进出69影院| 国产极品天堂在线| 日本av手机在线免费观看| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 国产极品粉嫩免费观看在线| 97人妻天天添夜夜摸| 熟女av电影| 日韩中字成人| 一级黄片播放器| 99国产精品免费福利视频| 日韩精品有码人妻一区| 国产日韩欧美视频二区| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 国产精品不卡视频一区二区| 成年女人毛片免费观看观看9 | 成人国产av品久久久| 国产精品二区激情视频| 有码 亚洲区| 丝瓜视频免费看黄片| 欧美精品一区二区免费开放| 亚洲国产精品成人久久小说| 99国产综合亚洲精品| 日本爱情动作片www.在线观看| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 如何舔出高潮| 人成视频在线观看免费观看| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 亚洲,欧美,日韩| 欧美另类一区| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 又大又黄又爽视频免费| 三级国产精品片| 国产免费福利视频在线观看| 精品久久久精品久久久| 亚洲国产日韩一区二区| 搡老乐熟女国产| 亚洲人成网站在线观看播放| 看非洲黑人一级黄片| 蜜桃国产av成人99| 母亲3免费完整高清在线观看 | 免费看av在线观看网站| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 久久久久精品性色| 在线天堂最新版资源| 丝袜美足系列| 黄色配什么色好看| 国产精品女同一区二区软件| 少妇的逼水好多| 一边亲一边摸免费视频| 国产野战对白在线观看| 视频区图区小说| 国产欧美日韩一区二区三区在线| av在线观看视频网站免费| a 毛片基地| 天天操日日干夜夜撸| 久久国内精品自在自线图片| 久久久国产精品麻豆| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 国产精品二区激情视频| 久久午夜综合久久蜜桃| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 免费观看无遮挡的男女| 亚洲国产日韩一区二区| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 亚洲视频免费观看视频| 亚洲精品国产一区二区精华液| 国产成人精品一,二区| 99久久中文字幕三级久久日本| 久久人人97超碰香蕉20202| 欧美日韩视频精品一区| 亚洲精品中文字幕在线视频| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 电影成人av| www日本在线高清视频| 免费观看在线日韩| 日韩免费高清中文字幕av| 成人亚洲欧美一区二区av| 天堂8中文在线网| 黄片小视频在线播放| 两个人看的免费小视频| 亚洲精品一二三| 成人影院久久| 少妇的逼水好多| 91久久精品国产一区二区三区| 精品视频人人做人人爽| 国产精品人妻久久久影院| 自线自在国产av| 26uuu在线亚洲综合色| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 国产极品粉嫩免费观看在线| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 免费在线观看黄色视频的| 国产亚洲一区二区精品| 交换朋友夫妻互换小说| av女优亚洲男人天堂| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 国产精品久久久久久精品电影小说| 高清黄色对白视频在线免费看| 欧美国产精品va在线观看不卡| 在线天堂最新版资源| 久久国内精品自在自线图片| 久久精品国产亚洲av高清一级| 热99国产精品久久久久久7| 国产免费福利视频在线观看| 美女国产高潮福利片在线看| 老鸭窝网址在线观看| 亚洲一区中文字幕在线| 男女免费视频国产| 成年人午夜在线观看视频| 男的添女的下面高潮视频| 黄色怎么调成土黄色| kizo精华| 观看美女的网站| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 一二三四中文在线观看免费高清| 美女高潮到喷水免费观看| 午夜日韩欧美国产| 精品国产露脸久久av麻豆| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 满18在线观看网站| 狂野欧美激情性bbbbbb| 一区二区三区精品91| 丰满饥渴人妻一区二区三| 欧美日韩视频精品一区|