電化學發(fā)光免疫法檢測降鈣素原的性能探析

王靜

（鞍山市中心醫(yī)院檢驗科 遼寧鞍山 114001）

1 前言

病原微生物具有種類多，變異速度快的特點，對病原微生物進行快速、準確的檢測可以為治療疾病和調(diào)查新型傳染病提供有效依據(jù)，因此，病原微生物的臨床檢驗十分重要。隨著我國醫(yī)學水平的不斷提高，多種新型的檢測技術(shù)不斷涌現(xiàn)。

臨床常用的檢測手段有:電化學發(fā)光全自動免疫檢測、放射免疫檢測、化學發(fā)光免疫檢測、熒光免疫檢測等。其中，電化學發(fā)光全自動免疫檢測原理為雙抗體夾心免疫法，以發(fā)光劑作為抗體或抗原的標記物，通過發(fā)光反應(yīng)檢測標本中抗原或抗體的含量。該檢測手段能在短時間內(nèi)得出結(jié)果，操作簡單，且重復性好，靈敏度突出[1]，能夠自動進樣，并儲存記錄，打印結(jié)果，對臨床實驗室特殊項目有突出應(yīng)用價值。

病原微生物是臨床誘發(fā)感染性疾病的重要原因之一，此類疾病的診斷方法主要是進行病原學檢測和細菌培養(yǎng)。降鈣素原（PCT）是感染性疾病診斷的多種指標中不可忽視的一種。細菌感染人體后，人體內(nèi)的PCT濃度會在短時間內(nèi)快速升高，此變化可作為細菌感染疾病的PCT判斷依據(jù)[2]。PCT可用于鑒定細菌與非細菌感染以及細菌感染的具體類型，也可幫助醫(yī)生掌握炎癥活動情況，本文通過對PCT定量檢測來分析該指標在微生物感染性疾病鑒別中的價值。

2 資料與方法

2.1 一般資料

收集鞍山市中心醫(yī)院2018年1月—2019年1月微生物培養(yǎng)顯示為陽性并接受PCT檢測的住院患者，在滿足選擇標準的對象中抽取971例，患者中男性458例，女性513例；年齡范圍:8～82歲，平均年齡（58.61±6.15）歲。在本次研究標本對象中，血培養(yǎng)標本、痰培養(yǎng)標本、尿液或者其他體液培養(yǎng)標本分別為170份、676份、125份。

2.2 檢測儀器

血清PCT檢測所用儀器:鞍山市中心醫(yī)院某品牌電化學發(fā)光全自動免疫檢測分析儀及其相關(guān)配套試劑；血培養(yǎng)所用儀器及其對應(yīng)的需氧瓶、厭氧瓶（法國生物梅里埃公司）。

2.3 方法學驗證

2.3.1 正確度

本次研究參加臨檢中心關(guān)于PCT的室間質(zhì)評活動，將其最近發(fā)放關(guān)于室間質(zhì)控的5份標本在實驗室進行檢測，判斷依據(jù)為室間質(zhì)評匯報結(jié)果靶值，對實驗室檢測所得數(shù)據(jù)是否在合理、可靠范圍內(nèi)進行驗證。

2.3.2 精密度

根據(jù)設(shè)備所附帶的說明書相關(guān)步驟，對設(shè)備進行日常維護保養(yǎng)，確保調(diào)校準確，完成室內(nèi)質(zhì)控操作，明確高值、低值這2個范圍的質(zhì)控品，檢驗程序根據(jù)普通標本的檢測步驟進行。依據(jù)美國發(fā)布的EP5-A2文件，對其批內(nèi)精密度進行檢測。在一天內(nèi)對各個水平連續(xù)檢測20次；對批間精密度的檢測為每天2次，2次檢測時間間隔需要超過2h，連續(xù)檢測10天。分別計算批內(nèi)、批間的精密度，分析數(shù)據(jù)為2組的平均值與標準值。

2.3.3 測量范圍

以EP6-A2、EP7-A2 2個文件為依據(jù)[3]，選取與儀器檢測規(guī)定上限、規(guī)定下限2個范圍的高值、低值標本相混合，根據(jù)混合程度對標本濃度范圍進行劃分，主要分為完全低值（100%）、部分低值（80%+20%）、基礎(chǔ)低值（60%+40%）、基礎(chǔ)高值（40%+60%）、部分高值（20%+80%）、完全高值（100%）?；旌喜襟E完成后檢測不同濃度的標本，每個標本至少接受3次檢測，將所得均值設(shè)置為預期數(shù)值，對齊，進行直線回歸方程分析，公式如下:Y=aX+b，a數(shù)值在0.97～1.03。

2.4 統(tǒng)計學方法

應(yīng)用Epidata3.1工具對所收集原始資料完成數(shù)據(jù)庫的統(tǒng)一建立，依次錄入。將研究中需要對照分析的數(shù)據(jù)輸入專業(yè)軟件SPSS20.0中進行處理。對計算所得數(shù)據(jù)應(yīng)用均數(shù)、標準差、百分比檢驗、回歸分析等進行描述性統(tǒng)計，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

3 結(jié)果

3.1 準確度

儀器對PCT的檢測質(zhì)量經(jīng)臨檢中心室間質(zhì)評均符合標準，合格率達到100%，對當前性能判定為滿意，對累積性能判定為成功，詳見表1。

表1 血清PCT準確度檢測情況

3.2 精密度

批內(nèi)不精密度與批間不精密度的平均值與標準值分別為1.16%、0.86%和2.54%、2.17%，與廠家發(fā)布的性能指標相符。

3.3 分析測量范圍

分析測量范圍控制在0.03～96.12 ng/mL間，上述指標所得數(shù)據(jù)與廠家聲明標準范圍相符合，詳見表2。

3.4 血培養(yǎng)不同微生物感染PCT指標比較

所納入樣本的血培養(yǎng)提示為陽性有170份，分別為革蘭陰性菌、革蘭陽性菌、真菌，對應(yīng)數(shù)量為98份、68份、4份；痰培養(yǎng)后提示為陽性的真菌有676份；尿液及其他體液培養(yǎng)提示為陽性有125份。

在血培養(yǎng)中細菌 PCT 水平1.56（0.21，5.68）ng/mL、真菌標本 PCT 水平為 4.40（1.84，18.44）ng/mL，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；血培養(yǎng)標本檢測PCT指標相對于痰培養(yǎng)標本PCT指標3.38（0.39，28.43）ng/mL、尿液培養(yǎng)指標 0.14（0.06，0.64） ng/mL、其他體液標本PCT 指標 0.15（0.07，0.93）ng/mL，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

表2 血清PCT分析測量范圍情況

4 討論

PCT屬于抗炎物質(zhì)，在體外有一定的穩(wěn)定性[4]，一般情況下，其半衰期為25～30 h，收集標本1天后放置于常溫狀態(tài)下，指標水平下降約12%，蛋白酶對PCT有特異性降解效果，機體受到細菌感染后促使PCT分泌[5]，如新生兒肺炎、急性胰腺炎等感染性疾病，細菌內(nèi)存在的毒素刺激機體PCT分泌，在短時間內(nèi)PCT濃度急速提升，該變化對病情早期診斷及臨床使用藥物的選擇有指導價值，在預評估后，若PCT指標長時間保持在高水平狀態(tài)，則說明控制效果較差[6]。

正常人在一般情況下血清中所含有的PCT指標相對較低，平均為2.5 pg/mL，主要產(chǎn)自甲狀腺髓質(zhì)細胞，導致PCT指標明顯提升的因素在于因外來刺激促使體內(nèi)出現(xiàn)敗血癥相關(guān)因子，并直接導致人體在短時間內(nèi)大量分泌PCT，如果PCT分泌過量或者缺少所需的水解酶，則會出現(xiàn)現(xiàn)指標異常升高的情況。依據(jù)這一特點，PCT指標被作為臨床常規(guī)檢測指標，對感染性疾病出現(xiàn)、發(fā)展以及控制情況等均有突出的指導價值[7]。

本研究對不同標本類型以及不同類型微生物感染下PCT指標差異進行檢測，數(shù)據(jù)顯示，細菌感染患者PCT指標顯著高于真菌感染，由此可知，細菌分泌的內(nèi)毒素是刺激機體PCT指標提升的主要原因，真菌感染并不一定導致PCT指標提升。革蘭陰性菌感染下患者機體血清PCT指標顯著高于革蘭陽性菌感染患者，可能與2種細菌中內(nèi)毒素成分的差異存在聯(lián)系。對不同類型標本的PCT指標進行比較，血培養(yǎng)標本的PCT指標明顯更高，出現(xiàn)該情況的原因在于血培養(yǎng)陽性提示患者為全身感染，而其他類型標本為局部感染。

綜上所述，電化學發(fā)光免疫法檢測PCT準確度和精密度高，不同標本檢測間差異有統(tǒng)計學意義，對革蘭陽性菌、革蘭陰性菌的鑒別有突出輔助價值，值得在臨床推廣應(yīng)用。