以TLC-UPLC-MS/MS法檢測網(wǎng)紅保健品中非法添加的8種化學(xué)藥物研究

杜俊威 黃佳慧

（東莞市食品藥品檢驗所 廣東東莞 523000）

1 前言

近年來，部分不法廠商為盲目追求療效，謀取經(jīng)濟利益，在網(wǎng)紅保健品中非法添加化學(xué)藥物，由于添加藥物的類型存在交叉，檢測難度明顯增加。本研究通過選擇8種代表性化學(xué)藥物，使用薄層色譜-超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（TLC-UPLC-MS/MS）對本市網(wǎng)絡(luò)銷售的45批網(wǎng)紅保健品進行檢測以實現(xiàn)藥物的規(guī)范化監(jiān)管[1-3]。

2 材料與方法

2.1 材料與試劑

鹽酸西布曲明（99.7%）、鹽酸苯乙雙胍（99.7%）、酚酞（99.9%）、咖啡因（99.9%）、鹽酸麻黃堿（99.7%）、辛伐他?。?9.0%）和洛伐他?。?9.4%）（中國食品藥品檢定研究院）；枸櫞酸西地那非（99.5%）（美國Sigma Aldrich公司）；乙酸、乙酸銨、甲酸、甲酸銨、乙腈、甲醇（美國Fisher Chemicals公司）；GF254薄層硅膠板（200 mm×100 mm）（青海海浪硅膠干燥劑廠）；羧甲基纖維素鈉、鹽酸、氫氧化鈉、氨水、氯仿（國藥集團化學(xué)試劑有限公司）；去離子水（超純水器制備）。

2.2 儀器設(shè)備

Kinetex 100RP-18色譜柱（美國Phenomenex公司）；離心機（湖南湘立公司）；超純水器（美國Millipore公司）；API4500（美國 Applied Biosystems公司）。

2.3 方法

2.3.1 檢測條件

色譜條件:色譜柱（100 mm×2.1 mm，2.6 μm）；柱溫:35℃；進樣體積:10 μL；流速:0.2 mL/min。

流動相梯度洗脫程序:時間:0.00、1.00、8.00、9.00、10.00 min；乙腈:10%、30%、90%、10%、10%；1 mmol/L乙酸銨（含1%乙酸）:90%、70%、10%、90%、90%；流速:0.2 mL/min[4]。

2.3.2 溶液配制

對照品溶液:稱取對照品10 mg，使用甲醇10 mL進行溶解定容處理，制成1 mg/mL的對照品溶液，置于-20℃條件下避光保存。

混合標準溶液:吸取標準液0.1 mL至空白樣本提取液中，定容至10 mL，制成10 μg/mL的混合標準溶液。

供試品溶液:取同一批號藥品20片，研磨為細粉狀，取1 g置于5 mL離心管內(nèi)，加入甲醇2 mL，超聲提取15 min，經(jīng)4 000 r/min離心操作5 min，取上清液作為供試品。

2.3.3 預(yù)處理條件

使用直接提取法、固相萃取法（SPE）、薄層色譜法（TLC）對樣品進行預(yù)處理[5]。

2.3.4 定量測定

將對照品溶液和空白樣本提取液制備成混合標準溶液，以各樣本的響應(yīng)強度為縱坐標，藥物濃度為橫坐標，繪制標準工作曲線。樣本溶液中各待測化學(xué)藥物相應(yīng)值均在測定的線性范圍內(nèi)，詳見圖1。

圖1 8種待測化學(xué)藥物的標準工作曲線

2.4 統(tǒng)計學(xué)處理

優(yōu)化樣本檢測條件時，進行6次平行實驗，采用SPSS22.0軟件進行分析，基質(zhì)效應(yīng)采用t檢驗。

3 結(jié)果

3.1 化學(xué)藥物質(zhì)譜圖

化學(xué)藥物質(zhì)譜圖，詳見圖2。

3.2 8種化學(xué)藥物的檢出限、定量限和線性范圍

各化學(xué)藥物在0.5～100 μg/L內(nèi)存在明顯的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù) r2≥0.9958，定量限為 0.31～0.79μg/kg，檢出限為 0.09～0.29 μg/kg，詳見表 1。

表1 各化學(xué)藥物的線性回歸方程、r2、檢出限和定量限

3.3 加標回收的準確度和精密度結(jié)果

45批網(wǎng)紅保健品中共檢出非法添加陽性樣本23批，23批樣本檢出的目標化學(xué)藥物均不符合處方成分，為非法添加陽性樣本。精密度以變異系數(shù)表示，準確度以回收率表示，待測物在不同樣本中的變異系數(shù)≤16.5%，回收率為67.3%～101.1%。

4 結(jié)論

網(wǎng)紅保健品中非法添加的化學(xué)藥物主要包括西地那非、苯乙雙胍、酚酞、咖啡因、麻黃堿、辛伐他汀、洛伐他汀和西布曲明等。本試驗使用TLC進行樣本預(yù)處理，有效避免假陰性、漏檢等缺點，且預(yù)處理成本低。結(jié)果顯示，TLC-UPLC-MS/MS法應(yīng)用于網(wǎng)紅保健品中非法添加的8種化學(xué)藥物的檢測具有較高的精密度和準確度。

綜上所述，TLC-UPLC-MS/MS法經(jīng)證實可用于網(wǎng)紅保健品中非法添加的8種化學(xué)藥物的快速篩查與定量檢測。

圖2 8種待測化學(xué)藥物的質(zhì)譜圖