采用柱前衍生反相超高效液相色譜法分析土壤中的精胺

吳艷萍 馮蓓珺 汪 京

（實(shí)樸檢測(cè)技術(shù)（上海）股份有限公司 上海 201108）

1 前言

精胺（CAS號(hào):71-44-3）是含有2個(gè)氨基和2個(gè)亞氨基的多胺類物質(zhì)，在生物體內(nèi)由腐胺（丁二胺）和S-腺苷蛋氨酸經(jīng)多種酶催化后生成，是一種生物胺。在紡織工業(yè)中，常用于洗滌羊毛和絲綢。精胺在高濃度（1 mM）時(shí)，對(duì)神經(jīng)有保護(hù)作用，在低濃度時(shí)，具有神經(jīng)毒性。

目前，精胺的檢測(cè)方法有3種，高效液相色譜質(zhì)譜法[1，2]（HPLC/MS）靈敏度高，但價(jià)格昂貴；氣相色譜法[3]（GC），需要進(jìn)行煩瑣的衍生步驟；離子色譜法[4，5]（IC）具有前處理簡(jiǎn)單、快捷、靈敏度高的特點(diǎn)，在生物胺的檢測(cè)分析上也有應(yīng)用，但由于生物胺為有機(jī)弱堿，靈敏度低，并不適用。大多數(shù)研究是對(duì)食品、水質(zhì)、藥品等基質(zhì)中的精胺進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)環(huán)境中土壤樣品的研究較少。本文選擇高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定土壤中精胺，用純水提取，9-芴甲基氯甲酸酯（FMOC）衍生，C18柱分離，二極管陣列檢測(cè)器（DAD）檢測(cè)。此方法簡(jiǎn)單，高效，準(zhǔn)確度高，檢出限低。

2 材料與方法

2.1 標(biāo)準(zhǔn)品及試劑

精胺標(biāo)準(zhǔn)品:100 mg（德國(guó) Sigma公司）；乙腈（CH3CN）（液相色譜級(jí)，美國(guó) Thermofisher公司）；FMOC（98%）（AR，上海安譜科學(xué)儀器有限公司）；去離子水（美國(guó)Millipore 公司）；磷酸二氫鉀（KH2PO4）、十水合四硼酸鈉（B4Na2O7·10H2O）（AR，國(guó)藥集團(tuán)）；其他未注明的試劑均為分析純。

2.2 儀器設(shè)備

超高效液相色譜儀（UPLC）:型號(hào)1290 infinity II（美國(guó)Agilent公司）；檢測(cè)器:光纖型二極管陣列檢測(cè)器（DAD），含3D采集功能；樣品有機(jī)過(guò)濾膜:0.45μm。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液配制及樣品前處理

標(biāo)準(zhǔn)工作溶液配制:稱取精胺適量，用甲醇（CH3OH）配制成儲(chǔ)備液，并用流動(dòng)相稀釋配制成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，所得最終工作溶液濃度為0.1、0.5、1.0、5.0、10.0mg/L。按樣品衍生步驟進(jìn)行衍生，衍生后的標(biāo)準(zhǔn)溶液置于4℃冰箱內(nèi)冷藏保存，有效期不超過(guò)7天。

樣品前處理:準(zhǔn)確稱取濕潤(rùn)的新鮮土壤樣品10.0 g，置于50 mL離心管中，加入40 mL純水，劇烈震蕩1 min；超聲30 min；劇烈震蕩1 min。隨后，以3000r/min的速度離心5min，從離心管中移取約5mL上清液過(guò)0.45 μm濾頭后至另一個(gè)50 mL離心管中。從過(guò)濾后的樣品中各取1 mL至另一個(gè)50 mL的離心管中，加入 1 mL 四硼酸鈉（B4Na2O7），2 mL FMOC，置于40℃水浴鍋中衍生1 h。冷卻，過(guò)0.22 μm水相濾膜，上機(jī)測(cè)試。

2.4 液相色譜條件

液相色譜條件詳見(jiàn)表1。

表1 液相色譜條件

3 結(jié)果與討論

3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線與檢出限

取所配制衍生的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，按“2.4”色譜條件測(cè)定，以所得峰面積Y（單位:mAU·Sec）與濃度X（單位:μg/mL）進(jìn)行線性回歸分析，線性方程為Y=52.57674X+3.44204，相關(guān)系數(shù) r=0.999 79，線性范圍為 0.1～10 μg/mL，以信噪比 S/N=3計(jì)，該方法的檢出限為0.1 mg/kg。

3.2 回收率與精密度實(shí)驗(yàn)

取空白土壤樣品（每份10.0 g），添加1 000 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液 25 μL，按照“2.4”條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算得回收率均值為117.0%。同一樣品分別測(cè)定6次，計(jì)算其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為 3.01%（n=6）。

3.3 樣品定性與定量分析

通過(guò)保留時(shí)間進(jìn)行定性，結(jié)合DAD掃描光譜圖進(jìn)行峰純度分析對(duì)比，對(duì)某區(qū)域的18份土壤樣品進(jìn)行了定性與定量分析，結(jié)果均未檢出。其中，通過(guò)樣品加標(biāo)，排除了假陽(yáng)性結(jié)果，詳見(jiàn)圖1、圖2。

圖1 精胺色譜圖

圖2 土壤樣品分析譜圖

4 結(jié)論

本文采用純水超聲提取，F(xiàn)MOC衍生，進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，提取效果較好；采用C18柱進(jìn)行分離，能有效避開(kāi)樣品基質(zhì)干擾；采用DAD檢測(cè)，能準(zhǔn)確找到目標(biāo)化合物，并排除假陽(yáng)性結(jié)果。因此，該法快速方便準(zhǔn)確，能有效達(dá)到土壤中精胺分析檢測(cè)的要求。