液質(zhì)聯(lián)用色譜法測定化妝品中對羥基苯乙酮的含量

方怡琳 龍秋儀 李秋英 李 成 林錦雄

（廣州艾蓓生物科技有限公司 廣東廣州 510850）

1 前言

對羥基苯乙酮（C8H8O2）是天然等同化合物，存在于Lampaya hieronymi（草藥，原產(chǎn)于拉丁美洲）和Rubus chamaemorus（云莓，生長于高山帶）中，常被用作膽囊炎及急、慢性黃疸型肝炎治療的輔助藥品。此外，C8H8O2常被用作香料的合成原料[1]，是化妝品中具有防腐功效的新型原料[2]。本文采用高效液相色譜-三重四級桿質(zhì)譜聯(lián)用儀（HPLC-TQMS）對化妝品中C8H8O2的含量進(jìn)行分析，為C8H8O2的測定分析提供參考。

2 實驗部分

2.1 儀器、試劑和材料

C8H8O2標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（CAS:99-93-4，美國 CATO）；甲醇（CH3OH）（色譜純，美國霍尼韋爾）；Agilent Ultivo三重四極桿質(zhì)譜儀（安捷倫科技（中國）有限公司）；MISTRAL EVO氮氣發(fā)生器（優(yōu)萊博技術(shù)（北京）有限公司）；Mini-Plus H2O-MA-UV-T超純水機、SECURA 225D-1CN分析天平（德國賽多利斯）；KQ5200DE超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；TDL-80-2B離心機（上海安亭科學(xué)儀器廠）；0.22 μm過濾頭。

2.2 檢測條件

2.2.1 色譜條件

色譜柱:ZORBAX Eclipse Plus C18柱（2.1 mm×50 mm 1.8-Micron）；柱溫:25℃；進(jìn)樣體積:1.0 μL；流速:0.2mL/min；流動相:A為CH3OH、B為水；等梯度洗脫程序:0～3 min，90%A+10%B。

2.2.2 質(zhì)譜條件

質(zhì)譜條件優(yōu)化:將C8H8O2標(biāo)準(zhǔn)儲備液用CH3OH稀釋成1 μg/mL的對照溶液，通過直接進(jìn)樣法進(jìn)行質(zhì)譜條件優(yōu)化。利用Agilent MassHunter Acquisition Optimizer軟件獲得MS離子對，以確定最佳母離子和子離子、碎裂電壓和碰撞能量。選擇2～3個特征碎片離子作為檢測離子，用于化合物的定性判斷依據(jù)，詳見圖1。

離子源:電噴霧離子源（ESI（-）），溫度 350℃；檢測方式:質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；干燥氣:氮氣（N2），流速 7.0 L/min；霧化氣壓力:15psi（約 0.1 Mpa）；毛細(xì)管電壓:3 500 V；離子駐留時間:100 ms；相應(yīng)的監(jiān)測離子對質(zhì)荷比（m/z）、裂解電壓和碰撞能量參數(shù)詳見表1。

圖1 C8H8O2標(biāo)準(zhǔn)溶液的提取離子色譜圖

表1 化合物監(jiān)測條件

2.3 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的制備

用分析天平準(zhǔn)確稱取C8H8O2標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)0.025 g（精確至0.000 01 g）于25 mL容量瓶中，用CH3OH定容，配制成1 000 μg/mL C8H8O2標(biāo)準(zhǔn)儲備液Ⅰ，備用；準(zhǔn)確移取標(biāo)準(zhǔn)儲備液Ⅰ 0.25 mL于25 mL容量瓶中，用CH3OH定容，配制成10 μg/mL C8H8O2標(biāo)準(zhǔn)儲備液Ⅱ，備用；準(zhǔn)確移取C8H8O2標(biāo)準(zhǔn)儲備液Ⅱ 0.025、0.05、0.125、0.25、0.5、0.625 mL 于 25 mL 容量瓶中，用 CH3OH 定容，配制成 10、20、50、100、200、250 μg/L的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，搖勻，備用。

2.4 樣品預(yù)處理

稱取樣品 0.1 g（精確 0.000 01 g）于 100 mL容量瓶中，加CH3OH定容，振搖，渦旋混勻，超聲提取15 min。轉(zhuǎn)移至10 mL刻度離心管中，以4 000 r/min離心5 min，上清液經(jīng)0.22 μm濾膜過濾，即得樣品溶液，待檢。必要時，可將樣品溶液做稀釋處理，經(jīng)0.22 μm濾膜過濾后，上機檢測。

2.5 制作標(biāo)準(zhǔn)曲線

在“2.2 檢測條件”下，將 10～250 μg/L C8H8O2標(biāo)準(zhǔn)系列溶液分別進(jìn)樣，進(jìn)行質(zhì)譜分析，得到標(biāo)準(zhǔn)溶液的MRM色譜圖（圖2）。對標(biāo)準(zhǔn)系列溶液進(jìn)行液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS）分析，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果顯示，在 10～250μg/L 范圍內(nèi)，Y=999.723783X（r2=0.998）線性關(guān)系良好，方法檢出限為1 μg/L，詳見圖3。

圖2 C8H8O2標(biāo)準(zhǔn)溶液MRM色譜圖

2.6 樣品中C8H8O2含量的計算

在“2.2檢測條件”下，將“2.4樣品預(yù)處理”制得的樣品溶液進(jìn)行質(zhì)譜分析，采用保留時間和特征離子對豐度比定性，以待測組分相對離子峰面積定量，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算含量。按公式（1）計算樣品中C8H8O2的含量:

其中:w—C8H8O2的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%；p—樣品溶液中C8H8O2的濃度，μg/L；v—樣品定容體積，mL；f—稀釋因子；m—樣品取樣量，g。

圖3 C8H8O2標(biāo)準(zhǔn)曲線

3 結(jié)果和討論

3.1 方法重現(xiàn)性測試及加標(biāo)回收試驗

在相同的檢測條件下，將“2.4樣品預(yù)處理”制得的樣品溶液重復(fù)進(jìn)樣6次，分別計算樣品溶液中的C8H8O2的含量。同時，選取4個化妝品樣品，分別加標(biāo)，再按“2.4樣品預(yù)處理”配制樣品溶液，在相同檢測條件下進(jìn)樣，依據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)曲線公式，計算加標(biāo)回收率，詳見表2、表3。

表2 重現(xiàn)性測試樣品溶液中C8H8O2濃度

表3 加標(biāo)回收檢測結(jié)果

3.2 精確度及重復(fù)性

取同一樣品，依照樣品預(yù)處理平行配制10份樣品溶液，在相同檢測條件下進(jìn)樣，檢測結(jié)果詳見表4。

表4 重復(fù)性結(jié)果

3.3 不同化妝品樣品中C8H8O2含量檢測結(jié)果

不同化妝品樣品中C8H8O2含量檢測結(jié)果詳見表5。

4 結(jié)論

本方法基于LC-MS技術(shù)，建立了化妝中C8H8O2的定性和定量檢測方法。該方法專屬性強，分析時間短；檢出限為1 μg/L，靈敏度高；平均加標(biāo)回收率為96.6%；相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.7%。檢測范圍囊括了化妝品中C8H8O2添加量的范圍，適合含C8H8O2化妝品的檢測分析。

表5 不同化妝品樣品中C8H8O2含量檢測結(jié)果