溫州地區(qū)非綜合征型耳聾患者GJB3基因c.538C＞T突變及其臨床表型分析

張夢思 項(xiàng)時(shí)瓊 項(xiàng)延包

GJB3基因（OMIM#121011）是我國耳聾人群中攜帶率相對較低的致聾基因，在普通耳聾群體中該基因突變的檢出率約為0%～2%[1-4]。GJB3基因位于常染色體1q34.3區(qū)域，全長3 617bp，共包含2個(gè)外顯子，其中僅第2外顯子為編碼Connexin 31（Cx31）縫隙連接蛋白的基因編碼區(qū)。我國學(xué)者于1998年首次報(bào)道的GJB3基因c.538C＞T突變被認(rèn)為與遲發(fā)型高頻聽力損失相關(guān)，且為常染色體顯性遺傳，此后該突變在我國各地域耳聾群體中相繼被報(bào)道且已作為臨床上耳聾患者基因診斷的常規(guī)檢測位點(diǎn)之一[3-5]。有研究顯示部分?jǐn)y帶該位點(diǎn)突變的人群及其家系未有明顯的聽力損傷，對GJB3基因c.538C＞T突變致病性存在爭議[6]。本研究通過溫州地區(qū)耳聾患者及正常人群的GJB3基因c.538C＞T突變檢測，探討該地區(qū)GJB3基因突變情況，結(jié)合患者臨床表型分析c.538C＞T突變的致病性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對象和方法

1.1 對象 選取2011至2019年于本院門診的589例耳聾患者為研究對象，留取患者外周血樣本用于基因檢測。并以1 288例在本院做產(chǎn)前檢查或產(chǎn)檢的聽力正常的婚育女性作為正常對照，留取其唾液樣本用于基因檢測。589例耳聾患者均以聽力損失為唯一臨床表型，均臨床診斷為非綜合征型感音神經(jīng)性耳聾，聽力損失輕度（聽力閾值25～40dB）至極重度（聽力閾值＞90 dB）不等。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，受試者知情同意。

1.2方法 采用德國QIAGEN公司QIAamp DNA Mini Kit抽提試劑盒及愷碩生物科技（廈門）有限公司的培養(yǎng)細(xì)胞DNA提取試劑盒（110型），嚴(yán)格按照試劑盒操作說明書分別抽提耳聾患者外周血和正常聽力婚育女性唾液樣本的DNA，并各取2μl DNA樣本用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行定量和純度檢測。參考相關(guān)文獻(xiàn)[7-9]，運(yùn)用耳聾基因芯片（北京博奧公司）或Sanger測序法檢測耳聾患者GJB2基因c.35delG、c.176_191del16、c.235delC以及 c.299_300delAT突變，SLC26A4基因c.919-2A＞G和c.2168A＞G突變，線粒體12SrRNA基因m.1494C＞T和m.1555A＞G突變，以及GJB3基因c.538C＞T突變等9種基因突變情況。運(yùn)用飛行時(shí)間質(zhì)譜法（北京毅新博創(chuàng)生物科技有限公司）檢測正常對照者唾液樣本耳聾相關(guān)基因突變情況，該檢測內(nèi)容亦包含有上述9種突變[10]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS23.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)和構(gòu)成比表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

589例耳聾患者共檢出5例存在GJB3基因c.538C＞T位點(diǎn)雜合突變，占0.85%；1 288例聽力正?；橛怨矙z出3例存在GJB3基因c.538C＞T位點(diǎn)雜合突變，占0.23%。兩者的檢出率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.278，P＞0.05）。5例 GJB3基因 c.538C＞T 突變耳聾患者其基因檢測及臨床表型分析結(jié)果表明，家系1先證者為GJB3基因c.538C＞T雜合突變合并線粒體m.1555A＞G均質(zhì)型突變個(gè)體，為極重度感音神經(jīng)性耳聾；家系2、4、5先證者為散發(fā)型GJB3基因c.538C＞T雜合突變患者，均為重度或極重度性耳聾患者；家系3先證者為c.538C＞T雜合突變/SLC26A4基因c.919-2A＞G純合突變患者，極重度感音神經(jīng)性耳聾；見表1。

表1 8例GJB3基因c.538C＞T突變個(gè)體基因型及臨床表型

3 討論

本研究結(jié)果顯示，溫州地區(qū)589例非綜合性型耳聾患者共檢出5例存在GJB3基因c.538C＞T突變，占0.85%，該檢出率與我國其他地區(qū)報(bào)道的0%～2%的基因突變檢出率相近，表明GJB3基因c.538C＞T突變亦不是溫州地區(qū)耳聾患者最主要的基因突變類型[1-4，11]。耳聾患者中該突變0.85%的檢出率雖高于聽力正?；橛缘?.23%，但統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果表明c.538C＞T突變在兩組群體中的檢出率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，該結(jié)果與Huang等[6]研究結(jié)果相符，在臨床流行病學(xué)調(diào)查數(shù)據(jù)上不支持該突變是導(dǎo)致耳聾患者發(fā)病的致病原因。

分析5例c.538C＞T突變患者的臨床表型，其中家系1和家系3先證者均為極重度性耳聾患者，分別另存在線粒體12SrRNA基因m.1555A＞G均質(zhì)型突變和SLC26A4基因c.919-2A＞G純合突變，文獻(xiàn)報(bào)道該兩種突變可導(dǎo)致重度或極重度性耳聾[12-15]，而c.538C＞T突變文獻(xiàn)報(bào)道與輕中度性高頻聽損耳聾相關(guān)，故從臨床表型推測線粒體m.1555A＞G和SLC26A4基因c.919-2A＞G純合突變才是導(dǎo)該兩個(gè)家系患者臨床耳聾表型發(fā)生的致病突變。家系2、4、5先證者為散發(fā)型GJB3基因c.538C＞T突變耳聾患者，家系3代內(nèi)均無其他耳聾患者，這與文獻(xiàn)報(bào)道的該突變?yōu)槌Ｈ旧w顯性遺傳模式不符，且臨床表型亦全部為重度或極重度性耳聾，同樣與文獻(xiàn)報(bào)道不同[6，16]。

本研究結(jié)果表明與我國其他地區(qū)耳聾群體GJB3基因c.538C＞T突變檢出率數(shù)據(jù)相似，該突變亦非溫州地區(qū)非綜合征型感音神經(jīng)性耳聾患者最主要的基因突變類型。該突變雖是我國耳聾患者基因檢測的一線篩查內(nèi)容之一，但本研究從臨床流行病學(xué)調(diào)查數(shù)據(jù)、遺傳模式、患者臨床表型上分析并不支持該突變是導(dǎo)致患者臨床耳聾表型發(fā)生的根本致病突變。對于該突變的致病性及其可能相關(guān)的臨床表型仍需更大樣本的數(shù)據(jù)和相關(guān)研究進(jìn)行深入分析，進(jìn)而為GJB3基因突變患者的基因診斷和遺傳咨詢提供遺傳學(xué)數(shù)據(jù)基礎(chǔ)和理論指導(dǎo)。