超高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法測定果蔬汁中甲霜靈、戊唑醇及毒死蜱

李文

（安徽省化工產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗站，安徽合肥230041）

目前，甲霜靈、戊唑醇和毒死蜱的單個農(nóng)藥測定方法有高效液相色譜法[1-2]、超臨界流體萃取氣相色譜法[3]、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[4-5]、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[6]。使用液相色譜、氣相色譜或氣相色譜質(zhì)譜串聯(lián)儀分析，樣品處理過程繁瑣耗時，且檢測限度低。

本文采用QuEChERS 處理方法，經(jīng)超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀可同時檢測果蔬汁中的甲霜靈、戊唑醇和毒死蜱。本方法快速定量，簡便可靠，靈敏度高，檢測限低。

1試驗部分

1.1 儀器與試劑

WATERS TQ-s MICRO UPLC 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（美國WATERS）；梅特勒-托利多AL104 精密天平（上海梅特勒-托利多儀器有限公司）；ZX-4渦旋儀（意大利VELP）；移液槍（大龍興創(chuàng)實驗儀器有限公司）；TDL-40B離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）。

戊唑醇，96.0%；甲霜靈，98.1%；毒死蜱，98.5%；乙腈，色譜純、分析純；醋酸，分析純；甲酸：色譜純；0.22 μm有機(jī)濾膜、一次性注射器（上海安譜科學(xué)儀器有限公司）；MAS-Q 萃取劑：NaCl 1 g，MgSO44 g NaAC 1.5 g，50 mL 50/pk（天津艾杰爾公司）；PSA：40-60 μm（天津艾杰爾公司）；GCB：120-400 Mesh（天津艾杰爾公司）。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制

標(biāo)準(zhǔn)儲備液的配制：分別稱取計量的甲霜靈、毒死蜱、戊唑醇于相應(yīng)的容量瓶中，配制的濃度為1 000 mg/L，使用色譜純乙腈定容至刻度，超聲混勻，標(biāo)準(zhǔn)儲備液-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

10 mg/L甲霜靈、毒死蜱、戊唑醇三種物質(zhì)的混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液的配制：使用移液槍分別準(zhǔn)確吸取各自對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)儲備液100 μL于同一個10 mL容量瓶中，使用色譜純乙腈定容至刻度，超聲混勻，標(biāo)準(zhǔn)儲備液0℃～4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

取空白樣品基質(zhì)提取液逐級稀釋標(biāo)準(zhǔn)儲備液，配制成0.1 mg/L、0.2 mg/L、0.3 mg/L、0.4 mg/L、0.5 mg/L 系列基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液；同時，使用色譜純乙腈逐級稀釋標(biāo)準(zhǔn)儲備液，配制成0.1 mg/L、0.2 mg/L、0.3 mg/L、0.4 mg/L、0.5 mg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液，備用（標(biāo)準(zhǔn)溶液現(xiàn)用現(xiàn)配）。

0.1%甲酸水溶液：加500 mL 高純水于1 000 mL 容量瓶中，使用移液槍吸取色譜甲酸1 mL 置于該容量瓶中，再用高純水定容至刻度，搖勻，使用抽濾裝置，過0.22 μm抽濾膜，備用。

0.1%乙酸乙腈溶液：在1 000 mL分析純乙腈中，加入1 mL乙酸，超聲混勻，備用。

1.3 樣品處理

稱取果蔬汁樣品10.0(±0.1) g 于50 mL 塑料離心管中，加入10 mL 1%乙酸乙腈溶液，渦旋振蕩3 min，加入MAS-Q 萃取劑，快速搖勻，渦旋振蕩1 min，4 000 r/min離心5 min。取2 mL 上清液加入裝有凈化劑（50 mg PSA+150 mg MgSO4）的離心管中，迅速渦旋30 s，8 000 r/min離心2 min。取上清液，經(jīng)0.22 μm濾膜過濾，待測。

1.4 色譜條件

1.4.1 液相條件

色譜柱：Acquity UPLC? BEH C18色譜柱（50.0 mm×2.1 mm，1.7 μm）；柱溫：40 ℃；流速：0.30 mL/min；進(jìn)樣量：1 μL；流動相A：0.1%甲酸水溶液；流動相B：乙腈；洗脫方式：梯度洗脫；洗脫程序見表1。

表1 液相洗脫梯度表

1.4.2 質(zhì)譜條件

在15～2 408 m/z掃描范圍內(nèi)進(jìn)樣，使用電噴霧離子源，調(diào)諧各參數(shù)。優(yōu)化的最終條件如下：離子源：電噴霧離子源ESI；掃描方式：正離子源(+)；毛細(xì)管電壓：3.4 kV；錐孔電壓：50 V；離子源溫度：150℃；脫溶劑溫度：500℃；脫溶劑氣流量：1 000 L/h；錐孔氣流量：50 L/h；檢測方式：多重反應(yīng)監(jiān)測（MRM），各物質(zhì)掃描母離子與子離子及相關(guān)參數(shù)見表2。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件的優(yōu)化與選擇

本研究使用C18 色譜柱進(jìn)行樣品的分離，使用0.1%甲酸溶液-乙腈作為流動相，采用梯度洗脫的方式對樣品進(jìn)行分析，可降低雜質(zhì)干擾，優(yōu)化峰形。

配制甲霜靈、毒死蜱、戊唑醇的混合標(biāo)樣0.1 mg/L，在15～2 408 m/z 掃描范圍內(nèi)進(jìn)樣，使用電噴霧離子源，采用全掃描方式分析，調(diào)諧錐孔電壓、毛細(xì)管電壓、脫溶劑溫度、脫溶劑流量等各參數(shù)，采用IntelliStar 進(jìn)行子離子尋找。優(yōu)化的最終條件見表2。對甲霜靈、戊唑醇、毒死蜱進(jìn)行質(zhì)譜掃描分析，譜圖見圖1，可以看出，甲霜靈、戊唑醇、毒死蜱在該條件下峰形尖銳、確證性強(qiáng)、靈敏度高。

表2 甲霜靈、毒死蜱、戊唑醇質(zhì)譜采集參數(shù)

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性

取空白樣品基質(zhì)提取液逐級稀釋標(biāo)準(zhǔn)儲備液，配制成0.1 mg/L、0.2 mg/L、0.3 mg/L、0.4 mg/L、0.5 mg/L 系列基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液，在上述液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜條件下進(jìn)行測定；同時，使用色譜純乙腈逐級稀釋標(biāo)準(zhǔn)儲備液，配制成0.1 mg/L、0.2 mg/L、0.3 mg/L、0.4 mg/L、0.5 mg/L 標(biāo)準(zhǔn)溶液，在上述液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜條件下進(jìn)行測定。

以甲霜靈標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與定量離子峰面積作標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)樣線性方程為：y=18 054x-5 313，相關(guān)系數(shù)為：r2=0.996，其中y為甲霜靈監(jiān)測峰面積，x為甲霜靈標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，具體結(jié)果見表3、圖2。以毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與定量離子峰面積作標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)樣線性方程為：y=23 238x-12 713，相關(guān)系數(shù)為：r2=0.996，其中y為毒死蜱監(jiān)測峰面積，x為毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，具體結(jié)果見表3、圖2。以戊唑醇標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與定量離子峰面積作標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)樣線性方程為：y=3e6x-526 562，相關(guān)系數(shù)為：r2=0.998，其中y 為戊唑醇監(jiān)測峰面積，x為戊唑醇標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，具體結(jié)果見表3、圖2。圖2 所示，甲霜靈、戊唑醇及毒死蜱的標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度與其對應(yīng)的峰面積之間呈良好的線性關(guān)系。

2.3 定量限

以最小添加回收濃度作為方法的定量限，在上述色譜條件下，甲霜靈、戊唑醇和毒死蜱的最低添加濃度均為0.2 mg/kg。

2.4 準(zhǔn)確度和精確度

以添加回收率評價正確度，在空白果蔬汁中分別添加3 檔濃度的甲霜靈、戊唑醇及毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)溶液，每檔重復(fù)5次，具體結(jié)果見表4。

圖1 a.甲霜靈、毒死蜱、戊唑醇質(zhì)譜掃描圖；b.甲霜靈離子對圖譜；c.戊唑醇離子對圖譜；d.毒死蜱離子對圖譜

表3 甲霜靈、戊唑醇及毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積響應(yīng)值

圖2 甲霜靈、戊唑醇及毒死蜱峰面積響應(yīng)值與標(biāo)準(zhǔn)濃度對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線

甲霜靈、戊唑醇及毒死蜱在果蔬汁中的添加濃度為0.2 mg/kg、0.3 mg/kg、0.4 mg/kg，平均回收率分別為91.5%～10.6%，87.5%～89.8%和84.2%～91.7%。

以相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）評價精密度，在空白果蔬汁中分別添加3 檔濃度的甲霜靈、戊唑醇及毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)溶液，每檔重復(fù)5次，具體結(jié)果見表4。

甲霜靈、戊唑醇及毒死蜱在果蔬汁中添加濃度為0.2 mg/kg、0.3 mg/kg、0.4 mg/kg，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）分別為1.7%～2.2%，0.7%～2.2%和0.9%～5.0%。

由表4 可知，在此方法下同時檢測果蔬汁中甲霜靈、戊唑醇及毒死蜱殘留量可滿足農(nóng)藥殘留分析的要求[7]，且方法的重復(fù)性良好。

2.5 基質(zhì)效應(yīng)

在相同檢測條件下，對基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液和試劑標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行分析，制作擬合曲線，根據(jù)公式（1）和斜率比（ME）來評價基質(zhì)效應(yīng)[8]。若ME值大于30%，說明基質(zhì)增強(qiáng)了待測物的響應(yīng)值。

式中：A為試劑標(biāo)準(zhǔn)工作液曲線斜率，B為基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液曲線斜率。

基質(zhì)影響(Matrix Effect)評價標(biāo)準(zhǔn)：對純?nèi)軇┡c基質(zhì)配制標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率進(jìn)行比較，若基質(zhì)影響ME%≥30%，則采用基質(zhì)配制標(biāo)準(zhǔn)溶液制作標(biāo)準(zhǔn)曲線；若ME%＜30%，可采用純?nèi)軇┡渲乒ぷ魅芤?，具體結(jié)果見表5，基質(zhì)影響ME＜30%，故采用溶劑配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.6 果蔬汁樣品的檢測

采用本研究建立的檢測方法對果蔬汁樣品進(jìn)行測定，結(jié)果見圖3～圖5。從圖3～圖5 可知，果蔬汁樣品中甲霜靈、戊唑醇、毒死蜱殘留量的檢測在該方法下所得譜圖與標(biāo)準(zhǔn)品譜圖一致，峰形尖銳，特征性強(qiáng)，且出峰時間短。

表4 甲霜靈、戊唑醇及毒死蜱在果蔬汁中的添加回收率

表5 甲霜靈、戊唑醇及毒死蜱溶劑標(biāo)與其對應(yīng)的在果蔬汁基質(zhì)標(biāo)影響評價

圖3 甲霜靈樣品典型色譜圖

圖4 戊唑醇樣品典型色譜圖

圖5 毒死蜱樣品典型色譜圖

3 結(jié)論

本研究確定了果蔬汁樣品中甲霜靈、戊唑醇、毒死蜱殘留的高效液相串聯(lián)質(zhì)譜的快速檢測方法。樣品經(jīng)QuEChERS 凈化方法，提取后可直接進(jìn)樣檢測，同時監(jiān)測三種農(nóng)藥的殘留量。該方法快速簡便，大大縮短了試驗時間，節(jié)約成本，且靈敏度高，準(zhǔn)確性強(qiáng)，在實際檢測中應(yīng)用性較強(qiáng)。