腎痿復(fù)方顆粒對(duì)慢性腎衰竭腹膜透析大鼠TGF-β1/Smad通路表達(dá)的影響

吳健，劉東，歐昌良，鄒永根

（西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院，四川 瀘州）

0 引言

慢性腎功能衰竭（Chronic renal failure,CRF）是由于各種原因起的腎臟結(jié)構(gòu)和功能損害的臨床綜合征，其一般由慢性腎臟病發(fā)展而來(lái)[1]。隨著人口老年化及糖尿病等可能影響腎臟功能疾病發(fā)病率的升高，CRF的發(fā)病率也逐年上升，其治療困難、病程漫長(zhǎng)，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，加重了社會(huì)經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。目前西醫(yī)最常用的治療方式為透析治療，能保護(hù)腎臟功能，緩解疾病發(fā)展。其中，腹膜透析使用較多，但臨床發(fā)現(xiàn)腹膜透析病人腹膜纖維化發(fā)病較高，發(fā)病多與轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子 -β1（TGF-β1）等關(guān)系密切[2-4]。腎痿復(fù)方顆粒作為中藥制劑，能改善腎功能，較低肌酐、尿素水平，臨床使用中發(fā)現(xiàn)，腎痿復(fù)方顆粒能改善腹膜透析病人腹膜纖維化進(jìn)展[5-6]。因此，本實(shí)驗(yàn)，通過(guò)CRF 大鼠模型，從而觀察腎痿復(fù)方顆粒對(duì)對(duì)慢性腎衰竭腹膜透析大鼠TGF-β1/Smad 通路表達(dá)的影響，為腎痿顆粒的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF 級(jí) SD 大鼠 40 只，體質(zhì)量 200g 左右。購(gòu)買自西南醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.2儀器與試劑

腎痿復(fù)方顆粒：西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)院內(nèi)制劑，專利號(hào)[201310123711.3]。4.25% 葡萄糖腹膜透析液：（上海長(zhǎng)征富民金山制藥有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H31020946）；腺嘌呤（江蘇江萊生物科技有限責(zé)任公司）；兔抗大鼠TGF-β1 多克隆抗體、免疫組化專用濕盒（科華生物制品有限公司提供）；大鼠磷酸化Samd2/3 抗體（Abcam 公司生產(chǎn)），實(shí)驗(yàn)儀器由西南醫(yī)科大學(xué)中心實(shí)驗(yàn)室提供。

1.3 模型構(gòu)建

將 40 只 SD 大鼠飼養(yǎng) 10 天后，B 組、C 組 D 組喂養(yǎng)含腺嘌呤飼料2 月，建立慢性腎功能衰竭大鼠模型。檢測(cè)血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）確定模型建立。對(duì)C組、D 組模型腹腔注射腹膜透析液，構(gòu)建大鼠腹膜透析模型。腹透管沖洗通暢時(shí)鑒定造模成功。

1.4給藥

C 組大鼠給予腎痿復(fù)方顆粒 4g/（kg·d）灌胃；D組大鼠給予腎痿復(fù)方顆粒8g/（kg·d）灌胃處理；A 組及B 組大鼠給予同等生理鹽水灌胃處理。

1.5指標(biāo)檢測(cè)

4 組大鼠每2 周進(jìn)行體重檢測(cè)，并記錄其活動(dòng)次數(shù)。于第12 周檢測(cè)大鼠體內(nèi)血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN），同時(shí)處死大鼠后，對(duì)大鼠腎臟進(jìn)行免疫組化檢測(cè)，對(duì) p-Samd2/3、TGF-β1 蛋白測(cè)定。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠體質(zhì)量比較，4 組大鼠前4 周體質(zhì)量均有提高，A 組 ＞D 組 ＞C 組 ＞B 組，隨著時(shí)間推移，各組大鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)差別較大，其中部分組大鼠個(gè)別死亡，但4～12 周，大鼠體質(zhì)量變化趨勢(shì)為：A 組＞D 組＞C 組 ＞B 組。

2.2各組大鼠活動(dòng)次數(shù)變化及比較

前 4 組 B 組、C 組、D 組較 A 組活動(dòng)次數(shù)均下降，可能是造模對(duì)大鼠損傷所致。4～12 周，B 組大鼠部分死亡，存活大鼠較其余3 組活動(dòng)明顯減少，大鼠活動(dòng)次數(shù)變化趨勢(shì)為：A 組 ＞D 組 ＞C 組 ＞B 組。

2.3各組大鼠體內(nèi)血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）比較

12 周 末，C 組、D 組 大 鼠 較 B 組 大 鼠 Scr 含 量明顯降低，D 組大鼠較C 組Scr 含量降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。C 組、D 組大鼠較 B 組大鼠BUN 含量明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），C 組、D 組大鼠BUN 含量差異不明顯，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué) 意 義（P＞0.05）。B 組、C 組、D 組 大 鼠 Scr 含 量、BUN 含量較A 組大鼠不同程度升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表 1。

2.4各組大鼠腎組織p-Samd2/3、TGF-β1的影響

正常組A 組大鼠腎臟組織中p-Samd2/3、TGF-β1在含量極低。C 組、D 組大鼠 p-Samd2/3、TGF-β1 表達(dá)較B 組明顯下降，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），C 組較D組表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、p-Samd2/3、TGF-β1 比較

3 討論

目前西醫(yī)對(duì)慢性腎功能衰竭病人最常用的治療方式為透析治療，能保護(hù)腎臟功能，緩解疾病發(fā)展。其中，腹膜透析使用較多，但臨床發(fā)現(xiàn)腹膜透析病人腹膜纖維化發(fā)病較高，發(fā)病多與轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（TGF-β1）等關(guān)系密切。腎痿復(fù)方顆粒作為中藥制劑，能改善腎功能，較低肌酐、尿素水平，臨床使用中發(fā)現(xiàn)，腎痿復(fù)方顆粒能改善腹膜透析病人腹膜纖維化進(jìn)展。通過(guò)CRF大鼠模型，從而觀察腎痿復(fù)方顆粒對(duì)對(duì)慢性腎功能衰竭腹膜透析大鼠TGF-β1/Smad 通路表達(dá)的影響，為該藥的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，腎痿復(fù)方顆粒干預(yù)的大鼠血肌酐、尿素氮較未干預(yù)造模大鼠明顯降低，說(shuō)明腎痿復(fù)方顆粒對(duì)慢性腎衰大鼠有一定療效，能改善腎臟功能，減緩腎臟損壞進(jìn)程。通過(guò)活動(dòng)次數(shù)的變化比較，腎痿復(fù)方顆粒對(duì)慢性腎衰大鼠生活質(zhì)量有一定改善作用?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為慢性腎功能衰竭是腎功能損害、腎臟疾病發(fā)展的終末期狀態(tài)，其主要的病理基礎(chǔ)是腎纖維化，而腹膜纖維化是是腹膜透析病人的并發(fā)癥之一。腎痿復(fù)方顆粒是基于“腎痿理論”而來(lái)，已有研究表明腎痿方能延緩慢性腎臟疾病患者腎纖維化進(jìn)程[7-9]，但目前對(duì)于“腎痿理論”、由腎痿方研制的“腎痿復(fù)方顆?！笔欠衲軠p緩腹膜纖維化尚存疑問(wèn)，缺乏實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

TGF-β1/Smad 通路是腹膜透析腹膜纖維化的主要機(jī)制，此次研究中，腎痿復(fù)方顆粒干預(yù)的大鼠p-Samd2/3、TGF-β1 表達(dá)較未干預(yù)模型大鼠明顯下降，且隨著藥物干預(yù)計(jì)量的增加，其p-Samd2/3、TGF-β1表達(dá)越低，表明腎痿復(fù)方顆粒對(duì)腹膜纖維化有一定延緩作用，且隨著藥物的增加，纖維化進(jìn)程降低越顯著。腎痿復(fù)方顆粒主要由黃芪、三七、當(dāng)歸、牡蠣、懷牛膝、昆布、大黃組成。其中黃芪與三七為君藥。黃芪甘溫純陽(yáng)，能補(bǔ)諸虛。三七止血、活血，黃芪與三七配伍，補(bǔ)納腎氣，祛瘀而不傷新。昆布、牡蠣、當(dāng)歸作為君藥，當(dāng)歸溫通，補(bǔ)血活血；昆布入腎經(jīng)，軟堅(jiān)散結(jié)，利水消腫；牡蠣咸寒，收斂固攝、滋陰潛陽(yáng)。三藥共奏活血化瘀、軟堅(jiān)散結(jié)、收斂固澀之功。大黃苦寒。清熱攻下，祛瘀；懷牛膝活血化瘀，引藥下行，補(bǔ)益肝腎；供為使藥。諸藥合用，共奏納氣活血、消散癓結(jié)，除廢起痿。腎痿復(fù)方顆粒是在傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)理論指導(dǎo)下針對(duì)慢性腎功能衰竭的辨證論治，隨著對(duì)腎痿理論方藥的廣泛應(yīng)用，除在慢性腎臟病，在越來(lái)越多的腎臟疾病、腎臟疾病并發(fā)癥得到了大量的應(yīng)用，有著廣泛的應(yīng)用前景，值得進(jìn)一步去開(kāi)發(fā)探索。