過量抗生素致小鼠腸道微環(huán)境變化的研究

房雅瑋?朱述英

摘要：目的：通過觀察頭孢曲松鈉對小鼠腸道菌的影響，為指導(dǎo)臨床合理用藥提供數(shù)據(jù)支持。方法：對實(shí)驗(yàn)動物予以不同劑量頭抱曲松鈉灌胃，每天兩次，連續(xù)四天，實(shí)驗(yàn)第28天取盲腸內(nèi)容物檢測大腸桿菌、腸球菌、乳酸桿菌、雙歧桿菌的菌落數(shù)。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組小鼠腸道內(nèi)4種細(xì)菌的數(shù)量明顯改變，其中大腸桿菌、腸球菌數(shù)量明顯增加，而乳酸桿菌和雙歧桿菌明顯減少，表示腸道內(nèi)正常菌群的平衡遭到破壞，形成了菌群失調(diào)。結(jié)論：長期使用抗生素可使腸道中厭氧菌數(shù)量驟減或消失，其抗感染和調(diào)節(jié)腸菌群等作用隨之減弱或消失，需氧菌或兼性厭氧菌數(shù)量增加使腸道菌群發(fā)生了量和質(zhì)的變化。

關(guān)鍵詞：過量;抗生素;腸道微環(huán)境

1 引言

抗生素于20世紀(jì)40年代首次現(xiàn)身時(shí)，被人們驚呼為“神藥”，對感染性疾病治愈率較高，近年來廣泛應(yīng)用于臨床。隨著抗生素的廣泛應(yīng)用，其不良反應(yīng)越來越受到人們的重視。在眾多不良反應(yīng)中，抗生素相關(guān)性腹瀉（antibiotic-as-sociated diarrhea，AAD）相對普遍和嚴(yán)重。普遍認(rèn)為AAD的發(fā)生與腸道菌群失調(diào)有關(guān)，這主要見于長期應(yīng)用廣譜抗生素治療的患者，其體內(nèi)對抗生素敏感的細(xì)菌被大量殺滅，而不敏感的細(xì)菌，如金葡菌、白色念珠菌等則乘機(jī)繁殖，引起假膜性腸炎、白色念珠菌性肺炎等，這些疾病臨床上也稱二重感染。

本實(shí)驗(yàn)通過觀察頭孢曲松鈉對小鼠腸道菌的影響，為指導(dǎo)臨床合理用藥提供數(shù)據(jù)支持，減少患者的內(nèi)源性感染。

2 實(shí)驗(yàn)材料與方法

2.1 實(shí)驗(yàn)材料

厭氧菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基（用于稀釋糞便標(biāo)本），伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基（用于選擇大腸桿菌），麥康凱瓊脂培養(yǎng)基（用于選擇腸球菌），乳酸桿菌選擇性瓊脂培養(yǎng)基（用于選擇乳酸桿菌），雙歧桿菌培養(yǎng)基（用于選擇雙歧桿菌）;頭抱曲松鈉（商品名羅氏芬）（上海羅氏制藥有限公司出品）;lml注射器（青島蘭威生物制品公司生產(chǎn)）;普通級純系雄性昆明小鼠（購于青島市試驗(yàn)動物與動物實(shí)驗(yàn)中心，許可證：SCXK（魯）20030010）。

2.2 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備

電子天平：德國Mettler公司PM460

超凈工作臺：蘇州凈化設(shè)備公司

電熱恒溫箱：上海國光醫(yī)化儀器廠

2.3 實(shí)驗(yàn)方法

2.3.1 造模及給藥

30只小鼠適應(yīng)10天后，將動物分為三組，分別是正常對照組10只，實(shí)驗(yàn)低劑量組10只，實(shí)驗(yàn)高劑量組10只，對兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組動物予以頭抱曲松鈉灌胃，每天兩次，連續(xù)四天，對照組動物給予生理鹽水灌胃。低、高劑量分別是每千克動物給藥500mg、1000mg。

實(shí)驗(yàn)第28天，頸椎脫臼法處死全部動物。

2.3.2 樣品收集

上述各組小鼠處死后，在無菌條件下剖檢，均取盲腸內(nèi)容物檢測4種細(xì)菌的菌落數(shù)。取盲腸內(nèi)容物置于無菌含玻璃珠的小瓶內(nèi)，加一定倍數(shù)的稀釋液后在振蕩器上振蕩15min，使樣品呈均質(zhì)狀。然后連續(xù)10倍稀釋（10-2～10-7），選二個(gè)稀釋度用滴注法分別接種于伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基（EMS）、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、乳酸桿菌選擇性培養(yǎng)基、雙歧桿菌培養(yǎng)基上，7℃培養(yǎng)72h，然后觀察結(jié)果。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件對以上檢測所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，各組數(shù)據(jù)均采用“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）”的形式表示，用t檢驗(yàn)進(jìn)行分析。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

3.1 小鼠表觀特征觀察

正常對照組小鼠攝食飲水正常，行動活躍，被毛平整光滑。各實(shí)驗(yàn)組小鼠攝食下降，行動遲緩，皮毛失去光澤。

3.2 腸道菌群的變化

如表1所示，與正常對照組小鼠腸道菌群比較，實(shí)驗(yàn)組小鼠給藥后，小鼠腸道內(nèi)4種細(xì)菌的數(shù)量明顯改變，其中大腸桿菌、腸球菌數(shù)量明顯增加，而乳酸桿菌和雙歧桿菌明顯減少，表示腸道內(nèi)正常菌群的平衡遭到破壞，形成了菌群失調(diào)。

4 討論

胃腸道的正常菌群構(gòu)成了一道抵御外界病菌入侵的天然屏障，對人體的健康有重要意義。微生物種群的生物拮抗作用，是維持微生態(tài)平衡所必需的。正常情況下，腸道菌群保持相對穩(wěn)定，以厭氧菌為主的腸道原籍菌與腸粘膜緊密粘附，產(chǎn)生定植抗力（Colonizationresistanee，CR），并借助于固有的腸粘膜屏障和腸道內(nèi)的殺菌物質(zhì)及免疫系統(tǒng)，共同防止外籍菌的粘附和定植，維持腸道內(nèi)微生態(tài)環(huán)境的平衡。正常腸道內(nèi)環(huán)境是一種厭氧、PH及氧化還原電勢（Eh）較低的狀態(tài)，有利于厭氧菌和兼性厭氧菌大量繁殖，而過路菌、外襲菌在腸道內(nèi)定植、繁殖受到抑制和拮抗。特別是雙歧桿菌和乳酸桿菌是腸道內(nèi)的重要生理菌，通過營養(yǎng)爭奪、產(chǎn)生各種有機(jī)酸降低腸道局部PH，產(chǎn)生具有廣譜抗菌作用的物質(zhì)如親脂分子（1ipophiliemoleeuzes）、小菌素（mieroesn）、過氧化氫等，對腸道內(nèi)的潛在致病菌起抑制或殺滅作用，在正常情況下能發(fā)揮生物屏障與拮抗作用。現(xiàn)已明確，以雙歧桿菌、乳酸桿菌為主的專性厭氧菌定植于腸粘膜上皮，能阻止條件致病菌（多為G一桿菌與球菌）對腸粘膜的戮附和定植，具備所謂的定植抗力，是防止細(xì)菌或（和）內(nèi)毒素易位進(jìn)而發(fā)生腸源性感染的重要因素。

5 結(jié)論

長期使用抗生素可使腸道中厭氧菌數(shù)量驟減或消失，其抗感染和調(diào)節(jié)腸菌群等作用隨之減弱或消失，需氧菌或兼性厭氧菌數(shù)量增加，腸道內(nèi)含氧量升高，即有利于外襲菌的定植、繁殖。隨著用藥時(shí)間的延長，小鼠腸道的雙歧桿菌和乳酸桿菌數(shù)量也隨之下降，腸道菌群發(fā)生了量和質(zhì)的變化。

參考文獻(xiàn)：

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[2] 丁秀芹菜.抗生素的過量使用與細(xì)菌耐藥性關(guān)系研究[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2011（29）.

指導(dǎo)老師：朱述英（1983—），女，山東滕州人，碩士，副教授，研究方向：中藥藥理學(xué)。

（作者單位：山東協(xié)和學(xué)院）