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    兩代抗-HCV酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑性能評估

    2020-06-24 03:55:16莎,高
    衛(wèi)生職業(yè)教育 2020年12期
    關(guān)鍵詞:夾心試劑抗原

    陳 莎,高 潔

    (陜西友誼醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室,陜西 西安 710065)

    目前,檢測抗-HCV(丙型肝炎病毒抗體)的主要方法是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)[1],試劑主要為間接酶聯(lián)免疫法第三代診斷試劑和雙抗原夾心法第四代診斷試劑。間接酶聯(lián)免疫法第三代診斷試劑檢測結(jié)果存在一定的假陽性[2],而且檢測抗-HCV的窗口期較長;雙抗原夾心法診斷試劑可有效彌補(bǔ)間接酶聯(lián)免疫法第三代診斷試劑存在的部分缺陷[3]?;诖?,本實(shí)驗(yàn)室通過檢測1 875份血漿標(biāo)本,對第三代、第四代抗-HCV酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑的性能進(jìn)行評估。

    1 材料與方法

    1.1 標(biāo)本

    收集2018年6月—12月在本檢驗(yàn)所采用間接ELISA法診斷試劑和雙抗原夾心ELISA法診斷試劑進(jìn)行抗-HCV檢測的血漿樣本1 875份,離心取血清,-70℃凍存。

    1.2 試劑與儀器

    1.2.1 試劑 兩代抗-HCV ELISA診斷試劑分別用A、B表示,A試劑反應(yīng)原理為間接法,B試劑反應(yīng)原理為雙抗原夾心法。質(zhì)控血清由陜西省臨床檢驗(yàn)中心提供,確證試劑為Chiron RIBA HCV3.0 SIA(美國CHIRON公司),所有試劑均在有效期內(nèi),其檢測方法、結(jié)果判定均嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

    1.2.2 儀器 全自動(dòng)酶免分析儀為深圳愛康公司生產(chǎn),酶標(biāo)儀、洗板機(jī)為鄭州安圖綠科生物工程有限公司生產(chǎn),全自動(dòng)加樣儀為瑞士哈美頓公司生產(chǎn),所有儀器設(shè)備定期進(jìn)行維護(hù)、校驗(yàn)。

    1.3 方法

    對1 875份血漿標(biāo)本平行采用間接法和雙抗原夾心法兩代抗-HCV ELISA試劑進(jìn)行檢測,初次檢測結(jié)果為反應(yīng)性時(shí),使用原試劑進(jìn)行雙孔復(fù)查。采用Chiron RIBA確認(rèn)試劑對兩種試劑中任意一種檢測為陽性或可疑的標(biāo)本進(jìn)行檢測,把RIBA試驗(yàn)結(jié)果為陽性的標(biāo)本再用兩代ELISA試劑檢測,對得到的S/CO進(jìn)行比較。

    所有標(biāo)本均按說明書進(jìn)行兩種試劑的檢測,若檢測呈陰性反應(yīng),即判斷為陰性。若檢測呈初次反應(yīng)性,需用原有試劑對相應(yīng)標(biāo)本進(jìn)行雙孔復(fù)試,雙孔均呈無反應(yīng)性則判為陰性;雙孔均呈反應(yīng)性,或有1孔呈反應(yīng)性,則判為陽性。對兩種方法任一試劑檢測為反應(yīng)性的標(biāo)本通過RIBA做進(jìn)一步確證,RIBA確證試驗(yàn)按照試劑說明書操作和判讀。若兩種方法均為陰性或RIBA確證試驗(yàn)結(jié)果為陰性判為真陰性。

    標(biāo)本S/CO值≥1判斷為陽性,0.7≤S/CO值<1判斷為灰區(qū),陽性和灰區(qū)標(biāo)本結(jié)果均判定為不合格。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

    使用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn),計(jì)量資料采用t檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    間接法和雙抗原夾心法檢測為陽性或弱陽性的65份標(biāo)本中,RIBA確證試驗(yàn)結(jié)果30例為陽性,32例為陰性,3例為可疑;間接法檢測為陽性,雙抗原夾心法檢測為陰性的33例樣本中,31例確證為陰性,2例確證為可疑;間接法檢測為陰性,雙抗原夾心法檢測為陽性的2例樣本中,1例確證為陰性,1例確證為可疑。目前公認(rèn)的檢測抗-HCV的準(zhǔn)確方法為RIBA,以此為標(biāo)準(zhǔn),本檢驗(yàn)所間接法和雙抗原夾心法的特異性分別統(tǒng)計(jì)為96.64%(1 812/1 875)和 98.29%(1 843/1 875)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)了雙抗原夾心法與RIBA的符合率為93.75%,間接法與RIBA的符合率為47.62%,抗-HCV雙抗原夾心法的特異性比間接法提高了1.65個(gè)百分點(diǎn),所產(chǎn)生的灰區(qū)和假陽性樣本大幅度減少。另外,間接法只檢測IgG,雙抗原夾心法增加了IgM的檢測,因此窗口期縮短,提高了抗-HCV的檢出率。

    2.1 對比ELISA間接法和雙抗原夾心法診斷試劑檢測抗-HCV情況

    從間接法和雙抗原夾心法診斷試劑對1 875份標(biāo)本檢測情況的比較來看,雙抗原夾心法診斷試劑的陽性檢出率為1.71%(32/1 875),明顯低于間接法診斷試劑的3.36%(63/1 875),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.03),見表1。

    表1 ELISA間接法與雙抗原夾心法診斷試劑檢測抗-HCV結(jié)果對比(例)

    2.2 RIBA確證ELISA間接法和雙抗原夾心法檢出的陽性標(biāo)本情況

    RIBA檢測結(jié)果陽性的30例樣本,兩代酶聯(lián)免疫試劑均能檢出,但是ELISA間接法試劑假陽性率為96.88%,遠(yuǎn)高于ELISA雙抗原夾心法試劑的3.13%(P<0.001),見表2。

    表2 65份間接和雙抗原夾心ELISA法診斷試劑抗-HCV陽性和弱陽性樣本確證結(jié)果

    2.3 比較ELISA間接法和雙抗原夾心法試劑檢測出陽性標(biāo)本的準(zhǔn)確度

    間接ELISA法試劑檢出的63份陽性樣本中,有30份確證為真陽性,占陽性樣本檢出量的47.62%;雙抗原夾心ELISA法試劑檢出的32份陽性樣本中,有30份確證為真陽性,占陽性樣本檢出量的93.75%。雙抗原夾心ELISA法試劑的準(zhǔn)確度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于間接ELISA法試劑,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001),見表3。

    表3 間接和雙抗原夾心ELISA法診斷試劑檢測出陽性標(biāo)本的準(zhǔn)確度比較

    2.4 對比ELISA間接法和雙抗原夾心法試劑的靈敏度

    利用質(zhì)控血清比較兩種試劑,ELISA間接法試劑檢測到4倍稀釋,S/CO值為1.46,雙抗原夾心法試劑檢測到64倍稀釋,S/CO值為1.08,進(jìn)一步比較RIBA確證的30例陽性樣本兩代試劑檢測的S/CO值,雙抗原夾心法診斷試劑檢測的數(shù)據(jù)值明顯高于間接法試劑,表現(xiàn)出更高的靈敏度。

    3 討論

    3.1 評估抗-HCV ELISA檢測試劑性能的意義

    由于目前沒有HCV疫苗,篩查及早期診斷成為控制丙型肝炎發(fā)生和傳播的重要手段。基于丙肝抗體在血液中能長期穩(wěn)定存在的特性,采用ELISA法對抗-HCV進(jìn)行檢測成為主要篩查手段。雙抗原夾心法試劑B是一種檢測抗-HCV的ELISA試劑,本次研究設(shè)計(jì)了對相關(guān)標(biāo)本的平行檢測,旨在通過與間接法ELISA試劑A檢測結(jié)果的比較和分析,對目前市場上第三、第四代抗-HCV ELISA檢測試劑的性能進(jìn)行綜合評估。

    當(dāng)前,影響抗-HCV試劑質(zhì)量的主要因素是其包被的丙型肝炎病毒抗原[4]。間接法ELISA檢測試劑(第三代),酶標(biāo)二抗為抗人IgG,由于血清中高濃度非特異性IgG的干擾,會(huì)影響檢測的特異性,從而導(dǎo)致假陽性標(biāo)本增多,增加復(fù)檢率;為減少非特異性干擾,待測標(biāo)本經(jīng)稀釋后,又會(huì)影響檢測敏感性。雙抗原夾心法ELISA檢測試劑(第四代),除包被丙肝抗原外,還加入生物素化丙肝抗原,形成包被抗原-抗體-抗人IgG抗體復(fù)合物,使特異性增強(qiáng)。同時(shí)該試劑借助生物素-親和素系統(tǒng)靈敏度提高,并且雙抗原夾心法加樣量增加,減少了因加樣引起的實(shí)驗(yàn)誤差,也使得檢測的靈敏度大大提高[5-7]。

    3.2 雙抗原夾心法ELISA檢測試劑準(zhǔn)確度、靈敏度均高于間接法

    從本次研究數(shù)據(jù)來看,間接法ELISA檢測試劑陽性檢出率為3.36%,假陽性率達(dá)96.88%,準(zhǔn)確率為47.62%;而雙抗原夾心法ELISA檢測試劑的陽性率檢出率為1.71%,假陽性率僅為3.13%,準(zhǔn)確度為93.75%。利用質(zhì)控血清比較發(fā)現(xiàn),雙抗原夾心法ELISA試劑的靈敏度高于間接法ELISA試劑,符合研究[5-7]的結(jié)論,也與趙龍友等[8]的研究結(jié)果——雙抗原夾心法ELISA試劑可以有效提高抗-HCV陽性標(biāo)本的檢出率,并降低假陽性率一致。

    3.3 雙抗原夾心法ELISA試劑診斷性能優(yōu)于間接法ELISA試劑

    雙抗原夾心法ELISA試劑檢測的是IgM、IgG等總抗體,診斷性能明顯優(yōu)于間接法ELISA試劑,更適用于早期篩查HCV抗體,值得推薦使用。

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