環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增與金胺0 熒光兩種痰結(jié)核桿菌檢驗(yàn)方法比較分析

馮美鳳

（崇左市第二人民醫(yī)院 廣西 崇左 532800）

結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌引起的一種慢性傳染病,是全球最具威脅的傳染病之一.據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì),我國患結(jié)核病人數(shù)居世界第2 位,是全世界22 個(gè)結(jié)核病流行嚴(yán)重的國家之一[1]?；加薪Y(jié)核病不僅增加了患者的痛苦，給患者及其家庭帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)壓力，還威脅他人安全，成為社會(huì)公共衛(wèi)生問題。盡早明確診斷，及時(shí)規(guī)范治療多數(shù)患者可以治愈。當(dāng)前，我國在結(jié)核病控制方面所面臨的問題是結(jié)核病的早期診斷，尤其是痰菌陰性肺結(jié)核的診斷[2]。目前，實(shí)驗(yàn)室結(jié)核桿菌檢測(cè)方法眾多，尋找檢測(cè)特異性強(qiáng)，操作簡單、快捷的檢測(cè)方法是臨床關(guān)注的重點(diǎn)[3]。痰涂片熒光染色查找法、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）法是臨床常用檢測(cè)方法?，F(xiàn)將這兩種檢驗(yàn)方法進(jìn)行比較分析，為臨床檢測(cè)方法的選擇提供參考?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選取2017 年7 月—2018 年8 月，到崇左市第二人民醫(yī)院就診的98 例疑似肺結(jié)核患者，其中男性72 例，女性26 例，年齡18 ～78 歲，主要臨床表現(xiàn)為咳嗽、氣短、咯痰、胸痛、乏力、納差、發(fā)熱、盜汗以及消瘦等[5]非特異性結(jié)核感染癥狀。

1.2 檢驗(yàn)方法

所有患者均收集其晨起痰液標(biāo)本，即晨起深呼吸后，咳痰，由專門容器收集；若患者無法咯出痰液，則收集其咽試子標(biāo)本，即肺部分泌物[6]。所有標(biāo)本采集完畢后送檢實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢驗(yàn)，檢驗(yàn)方法包括金胺O 熒光法、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增法（LAMP）。

1.2.1 檢驗(yàn)儀器及試劑金胺O 熒光染色法（試劑：珠海貝索抗酸染色試劑盒，廠家：珠海貝索生物技術(shù)有限公司 批號(hào)：416051；儀器：生物顯微鏡EX30 廠家：寧波舜宇儀器有限公司）

1.2.2 金胺O 熒光法 用竹簽挑取適量的痰液，制成20*15mm 的厚膜涂片，自然干燥，火焰固定后，滴加金胺O 染色液避光染色，水洗，用鹽酸酒精液脫色，直至涂片無黃色為止，水洗，用復(fù)染色液染色，水洗，吸干水分，自然干燥，熒光顯微鏡下低倍鏡檢，抗酸桿菌為亮黃色。結(jié)果判定：觀察50 個(gè)視野發(fā)現(xiàn)1-9 條抗酸桿菌，表示結(jié)核桿菌陽性。

1.2.3 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP） 取痰標(biāo)本與4 倍體積的氫氧化鈉（4%）液化30min,取1ml 液化后的痰液離心棄上清液，沉淀用1ml 生理鹽水（0.9%）懸浮，12000rpm 離心5min,棄去上清液，留沉淀物，100 恒溫處理10 分鐘，12000rpm 離心2 分鐘，上清液做模版?zhèn)溆?，加入反?yīng)液，3000rpm 離心30 秒，打開恒溫?cái)U(kuò)增熒光檢測(cè)儀，將反應(yīng)管放入儀器內(nèi)，開始反應(yīng)，根據(jù)儀器給出的擴(kuò)增曲線和出峰時(shí)間判定結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析處理，計(jì)數(shù)資料采用率（%）表示，行χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，行t 檢驗(yàn)，P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

98 例疑似肺結(jié)核患者，涂片后經(jīng)金胺O 熒光法鏡檢，檢出痰結(jié)核桿菌陽性者24 例，陽性率24.49%；經(jīng)環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）檢查，痰結(jié)核桿菌陽性56 例，陽性率57.14%。環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）檢查結(jié)果陽性率顯著高于金胺O 熒光法檢查，差異顯著，χ2=21.628，P ＜0.05,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表。

表 兩種方法檢驗(yàn)結(jié)果比較

3.討論

此次研究結(jié)果顯示，金胺O 熒光染色涂片法檢出結(jié)核桿菌陽性例數(shù)為24 例，陽性率24.50%；王成勇[7]在2004 年報(bào)道僅有40%～50%的活動(dòng)性肺結(jié)核患者痰涂片呈陽性，涂片檢出陽性率在19.9%～35%，本組實(shí)驗(yàn)患者涂片陽性率占24.49%，與文獻(xiàn)資料報(bào)道相吻合。等溫?cái)U(kuò)增檢出結(jié)核桿菌陽性56 例,陽性率 57.14%，等溫?cái)U(kuò)增檢出結(jié)核桿菌陽性的陽性率高于熒光染色鏡檢陽性率，顯著高于常規(guī)實(shí)驗(yàn)室診斷，在陽性檢出率與金胺O 熒光染色涂片法相比明顯列高，兩組數(shù)據(jù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）。

綜上，環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）檢查效果良好，能提高陽性檢出率，全面評(píng)估患者病情進(jìn)展程度，為治療方案提供強(qiáng)有力的保障。

結(jié)核菌檢查是確診肺結(jié)核最具有特異性的方法，痰中找到結(jié)核菌是確診肺結(jié)核的主要依據(jù)[8]。近年來，醫(yī)療事業(yè)不斷發(fā)展，人們?cè)絹碓街匾暯Y(jié)核病，在臨床上也取得很大的成果，然而結(jié)核病患者還是在逐年增加。結(jié)核病在發(fā)展早期癥狀不明顯，很難被發(fā)現(xiàn)，很難得到確診，這樣就會(huì)導(dǎo)致病情的延誤，大大的延誤治愈時(shí)間，而患者的身體機(jī)能也會(huì)出現(xiàn)下降的情況，導(dǎo)致疾病發(fā)生轉(zhuǎn)移，甚至?xí)霈F(xiàn)進(jìn)一步惡化，給患者的治療帶來很大的困難[9]。所以在臨床診療過程中，選擇合適的檢驗(yàn)方法對(duì)患者做出診斷，從而制定行之有效的治療方案至關(guān)重要。此次研究表明，涂片鏡檢金胺O 熒光染色法檢驗(yàn)迅速，操作簡單，實(shí)驗(yàn)設(shè)備要求不高，適用大量標(biāo)本快速檢查[9]。等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）利用基因片段擴(kuò)增技術(shù)，技術(shù)操作簡便，診斷快速、靈敏度高、費(fèi)用低廉等，是一種準(zhǔn)確率和檢出率較高的檢查方法，值得臨床應(yīng)用。