EGFR 基因突變與血清腫瘤標(biāo)志物的關(guān)系

朱曉紅

（蘇州市吳中人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科 江蘇 蘇州 215100）

肺癌是世界范圍內(nèi)最常見、致死人數(shù)最多的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率及增長速度高居各惡性腫瘤之首，晚期肺癌的5 年存活率不超過15%[1]。近年來，以表皮生長因子受體為靶標(biāo)的分子靶向治療受到國內(nèi)外腫瘤界的普遍關(guān)注。EGFR 絡(luò)氨酸激酶抑制劑吉非替尼和厄洛替尼已被美國食品藥品管理局(FDA)批準(zhǔn)用于治療晚期非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）[2]。大量的回顧性研究表明，對EGFR-TKI 治療有效的NSCLC 患者的EGFR 突變率為77%[3]，提示EGFR 突變對吉非替尼療效是一個(gè)必不可少的因素。但EGFR 突變基因檢測需要手術(shù)標(biāo)本，文獻(xiàn)報(bào)道[4]，非小細(xì)胞肺癌患者，尤其是老年非小細(xì)胞肺癌患者中有33%為I 或Ⅱ期，而僅6%得到手術(shù)治療。標(biāo)本量的不足及非原發(fā)灶腫瘤標(biāo)本獲取困難有時(shí)無法進(jìn)行EGFR 的檢測，如大型的IPASS 研究中不到40%的病人才能提供合適的腫瘤組織進(jìn)行檢測。故在無法進(jìn)行EGFR 測序時(shí)，我們希望有其他指標(biāo)間接判斷是否存在EGFR 突變。國內(nèi)外研究[5]均發(fā)現(xiàn)EGFR-TKI 的疾病控制率及生存期與治療前血清CEA 的水平及治療后是否降低相關(guān)，且肺腺癌患者CEA 水平和EGFR 是否突變亦相關(guān)。本研究中，我們通過化學(xué)發(fā)光酶免方法檢測肺癌患者的血清腫瘤標(biāo)記物癌胚抗原(CEA)、糖類抗原(CA125、CA19-9)，同時(shí)手術(shù)標(biāo)本進(jìn)行EGFR 突變檢查。選取具有腺癌相對特異性的腫瘤標(biāo)記物和EGFR 進(jìn)行相關(guān)性分析，以期發(fā)現(xiàn)更多的能預(yù)測患者有無EGFR 突變的指標(biāo)。

1.資料與方法

1.1 一般資料

收集我院及蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院2011 年6 月—2012 年12 月肺腺癌住院患者61 人，均經(jīng)病理學(xué)確診，年齡55 ～81 歲，平均年齡63.2±12.6 歲，其中男32 例，女29 例。組間性別、年齡均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P ＞0.05）。

1.2 腫瘤標(biāo)志物的檢測

抽取空腹靜脈血2ml，不加抗凝劑，標(biāo)本靜置1 小時(shí)，離心(2000rpm×5min)后吸出血清，待測。溶血和黃疸標(biāo)本不宜檢測；脂血標(biāo)本先離心(20000rpm×3min)，去除上層油脂后，取下層血清檢測。應(yīng)用湖州數(shù)康生物科技有限公司提供的試劑盒檢測CEA 、CA125、CA19-9。

1.3 EGFR 基因突變的測定

新鮮腫瘤組織經(jīng)包埋、切片、染色，選擇典型腫瘤細(xì)胞巢部位，用PCR 直接擴(kuò)增EGFR 基因第19、2l 外顯子的基因片段。2%瓊脂糖凝膠電泳鑒定擴(kuò)增片段，通過Alpha Innotech凝膠成像系統(tǒng)觀察PCR 產(chǎn)物電泳結(jié)果。采用Chromas 軟件分析測序圖譜，分析判斷EGFR 基因第19、2l 外顯子突變區(qū)域。

1.4 判定標(biāo)準(zhǔn)

正常參考值由數(shù)康生物科技有限公司蛋白芯片檢測試劑盒提供：陽性判定標(biāo)準(zhǔn)為：CEA ＞5ng/ml，CA125＞35KU/L，CAl9-9 ＞35KU/L。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS13.0 軟件，計(jì)量資料以均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料的比較用卡方檢驗(yàn)，以P ＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 61 例標(biāo)本中存在EGFR 基因突變的例數(shù)為30 例，總突變率為49.18%（30/61）；第19 號外顯子突變的例數(shù)為20例，其中746-750 位連續(xù)5 個(gè)密碼子的缺失(DelE746-A750)的突變的病例數(shù)為16 例，其他罕見類型突變有4 例；另外第2l 號外顯子突變的例數(shù)為10 例，21 位點(diǎn)的突變都是點(diǎn)替換突變，第858 位上的亮氨酸被精氨酸代替(L858R)。全部突變通過PCR 產(chǎn)物正反向測序確證。

2.2 EGFR 基因突變陽性的30 例NSCLC 中， CEA 陽性20例（66.67%），EGFR 基因突變陰性的31 例NSCLC 中，CEA 陽性12 例（38.71%），見表。

表 61 例測定EGFR 突變與CEA、CA125、CA199 的相關(guān)性[n(%)]

3.結(jié)論

EGFR 基因突變與靶向治療藥物臨床效果的關(guān)系已經(jīng)得到肯定[6]。大部分晚期肺癌病人能獲得組織的方法是肺穿刺活檢和纖支鏡檢查活檢，但這兩者的活檢組織的樣本小，通常僅含數(shù)萬個(gè)細(xì)胞，而組織DNA 經(jīng)PCR 擴(kuò)增后進(jìn)行基因測序，DNA 需要量至少在100ng 以上，因此，檢測準(zhǔn)確度時(shí)而受到影響。其次，腫瘤穿刺活檢術(shù)僅適用于部分病人，標(biāo)本采集有難度，作為一種損傷性操作，存在一定的醫(yī)療風(fēng)險(xiǎn)，并且相當(dāng)一部分病人由于病灶的特殊解剖部位（病灶鄰近心臟及大血管、腦轉(zhuǎn)移）等而不適合進(jìn)行這種操作。最后，該方法技術(shù)要求較高，難以普及?；驕y序雖然是最直接、準(zhǔn)確的檢測方法，但由于95%以上的突變屬于雜合性突變（即同時(shí)存在突變型和野生型擴(kuò)增產(chǎn)物），準(zhǔn)確診斷突變類型難度較大，尤其是外顯子19 的基因突變譜比較復(fù)雜，不少標(biāo)本需要通過基因克隆后才能確定其突變類型[7]。因而該方法適合少數(shù)技術(shù)裝備精良的實(shí)驗(yàn)室開展，在各級醫(yī)院想要獨(dú)立開展這項(xiàng)診斷比較困難。

日本學(xué)者SHOJI 等[8]研究了NSCLC 不同時(shí)期血清CEA表達(dá)水平與E G F R 基因突變之間的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)肺癌E G F R 基因突變與血清C E A 表達(dá)相關(guān)。國內(nèi)也有學(xué)者[9]在組織病理學(xué)水平研究了NSCLC 手術(shù)標(biāo)本的CEA 表達(dá)水平與EGFR 基因突變之間的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)C E A 蛋白表達(dá)陽性的N S C L C 易發(fā)生E G F R 基因突變，兩者的相關(guān)性有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究61 例肺癌患者，EGFR 基因突變陽性的30 例NSCLC 中，CEA 陽性20 例（66.67%），E G F R 基因突變陰性的31 例N S C L C 中，CEA 陽性12 例（38.71%）。因此，CEA 表達(dá)水平與EGFR 基因突變有一定關(guān)系，CEA 高表達(dá)的NSCLC 易發(fā)生EGFR 基因突變。從而對于肺腺癌患者，血清腫瘤標(biāo)志物CEA 陽性時(shí)， EGFR 基因靶向治療可能有效。