氣相色譜法測定初元復(fù)合肽營養(yǎng)飲品中氯丙醇含量

劉賢良 李文貴 沈震亞 李嵐

（江中藥業(yè)股份有限公司 江西南昌330096）

氯丙醇是氯原子取代丙三醇結(jié)構(gòu)上羥基而成的一類化合物，主要有3-氯-1,2-丙二醇（3-MCPD）、2-氯-1,3-丙二醇（2-MCPD）、1,3-二氯-2-丙醇（1,3-DCP）及2,3-二氯-1-丙醇（2,3-DCP）。研究表明，氯丙醇存在腎臟毒性、生殖毒性、神經(jīng)毒性、免疫毒性、致突變性等，且國際癌癥研究機(jī)構(gòu)認(rèn)為它是一種非遺傳性的可能致癌物[1]。自世界衛(wèi)生組織（WHO）1993 年警告氯丙醇類物質(zhì)存在嚴(yán)重毒性以來，食品中的氯丙醇污染正式成為國際食品安全問題之一，其相關(guān)食品安全研究隨即也成為科研工作者廣泛關(guān)注的熱點(diǎn)。食品中的氯丙醇污染產(chǎn)生于酸水解植物蛋白（HVP）的生產(chǎn)過程，為提高氨基酸得率而加入過量的鹽酸會(huì)使原料中存在的三酰甘油酯水解成丙三醇，并進(jìn)一步反應(yīng)生成氯丙醇。我國保健食品和嬰幼兒食品不少采用酸水解蛋白為原料，隨著酸水解植物蛋白常作為風(fēng)味增強(qiáng)劑加入，其所含的3-MCPD 也相應(yīng)增加，因此需按照GBT 5009.191-2006 測定方法（氣相質(zhì)譜法）對其進(jìn)行氯丙醇監(jiān)控，對于不具備質(zhì)譜儀的企業(yè)來說，也可直接采用氣相色譜法進(jìn)行測定。因此本文采用較為廣泛使用的氣相法測定初元復(fù)合肽營養(yǎng)飲品中氯丙醇的含量，以提高對氯丙醇的質(zhì)量監(jiān)控能力?，F(xiàn)報(bào)道如下：

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 7890 氣相色譜儀；N-1100 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；H1650 離心機(jī)；SK-1 混勻器；梅特勒AG 245 電子天平。

1.2 試藥 1,3-二氯-2-丙醇對照品（批號：C12481600，純度97.5%），2,3-二氯-1-丙醇對照品（批號：CA12482000，純度98.0%），均購于美國Dr-Ehrentorfer 公司；正己烷為重蒸試劑；乙酸乙酯、乙醚、無水硫酸鈉（105 ℃烘烤3 h 后使用）、氯化鈉、七氟丁?；溥颍ㄎ鞲瘳敼荆鶠榉治黾?；水為超純水。初元復(fù)合肽營養(yǎng)飲品為江中藥業(yè)有限公司產(chǎn)品（批號：20170104、20180206、20180307、20180404、20180502、20180604）。

2 測定方法[2]

2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)品單標(biāo)儲(chǔ)備液的配制 取1,3-DCP 和2,3-DCP 對照品各約25 mg 分別置于25 ml 容量瓶中，精密稱定，加入乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度，得到濃度均為1 000 μg/ml 的2 種氯丙醇單標(biāo)儲(chǔ)備液，并于4 ℃的冰箱中儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)品工作溶液的配制 分別精密吸取以上2 種氯丙醇單標(biāo)儲(chǔ)備液各1 ml，置2 支10 ml 容量瓶中，加乙酸乙酯稀釋至刻度，分別得到濃度均為100 μg/ml 的2 種氯丙醇單標(biāo)工作溶液。從2 種氯丙醇的單標(biāo)工作溶液精密吸取適量，置于同一25 ml容量瓶，加正己烷稀釋至刻度，得到混合標(biāo)準(zhǔn)品工作溶液，2 種氯丙醇的濃度均為2 μg/ml。

2.2 樣品溶液的制備 精密吸取樣品溶液10 ml，加飽和氯化鈉溶液（5 mol/L）6 g，超聲處理15 min，用乙醚萃取3 次，每次15 ml，合并乙醚液并加無水硫酸鈉3 g，靜置10 min 后過濾，濾液于35 ℃下旋蒸至約2 ml，定量轉(zhuǎn)移至5 ml 具塞試管中，加乙醚稀釋至4 ml，加少量無水硫酸鈉，振搖，靜置15 min以上。

2.3 衍生化 精密量取試樣溶液1 ml 于5 ml 具塞試管中，并于室溫?fù)]至近干，立即加入正己烷1 ml，用氣密針加入七氟丁?；溥?0 μl，立即塞緊，渦旋混合后，70 ℃保溫20 min。放冷至室溫，加飽和氯化鈉溶液3 ml，渦旋混合30 s，使兩相分離，取有機(jī)相加無水硫酸鈉約0.3 g 脫水，取溶液進(jìn)行GC 測定。

2.4 空白試樣制備 稱取飽和氯化鈉溶液6 g，同2.2 法凈化、2.3 法衍生。

2.5 色譜條件[3～5]氣相色譜儀（電子捕獲檢測器ECD）色譜條件：色譜柱，HP-5 二苯基甲基硅氧烷（25 m×0.32 mm×0.52 μm）；載氣為氮?dú)猓兌龋?9.99%）；流量為2.8 ml/min；色譜柱程序升溫，50～100 ℃（3 ℃/min），100 ℃保持1 min，100～285 ℃（4 ℃/min），285 ℃保持3 min；進(jìn)樣口溫度，280 ℃；檢測器溫度，300 ℃；進(jìn)樣體積，1 μl；進(jìn)樣方式，不分流進(jìn)樣，尾吹氣，30 ml/min。在該色譜條件下，對標(biāo)準(zhǔn)品峰的系統(tǒng)適應(yīng)性參數(shù)進(jìn)行考察，標(biāo)準(zhǔn)品峰理論塔板數(shù)均＞4 000，分離度與對稱因子符合中國藥典要求[6]。供試品、對照品及疊加色譜圖見圖1～圖3。

圖1 1,3-二氯-2-丙醇與2,3-二氯-1-丙醇標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

圖2 供試品色譜圖

圖3 供試品與標(biāo)準(zhǔn)品色譜疊加圖

2.6 方法學(xué)考察

2.6.1 線性范圍與檢測限 在5 支具塞試管中先分別加入0.5 ml 正己烷，再分別加入1 μl、3 μl、8 μl、15 μl、25 μl 標(biāo)準(zhǔn)使用溶液，加正己烷至1 ml，用氣密針加入七氟丁酰基咪唑50 μl，立即塞緊，渦旋混合后，70 ℃保溫20 min。放冷至室溫，加飽和氯化鈉溶液3 ml，渦旋混合30 s，使兩相分離，取有機(jī)相加無水硫酸鈉約為0.3 g 脫水，取溶液進(jìn)行GC 測定。本方法檢出限為0.01 mg/kg。線性關(guān)系見表1～表2。

表1 1,3-二氯-2-丙醇衍生化線性關(guān)系

表2 2,3-二氯-1-丙醇衍生化線性關(guān)系

2.6.2 精密度試驗(yàn)結(jié)果 精密量取混合標(biāo)準(zhǔn)溶液200 μl，同2.3 法衍生后，進(jìn)樣6 針，精密度良好。見表3。

表3 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.7 回收率試驗(yàn)結(jié)果 精密取樣品5 ml 中加入適量氯丙醇，同2.2 法凈化和2.3 法衍生，進(jìn)行回收試驗(yàn)，結(jié)果1,3-DCP 的加樣回收率可達(dá)93.24%～96.41%，2,3-DCP 的加樣回收率可達(dá)93.91%～96.51%。見表4。

表4 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.8 6 批樣品含量測定 取本公司初元復(fù)合肽營養(yǎng)飲品6 批，依照對樣品中氯丙醇進(jìn)行含量測定。見表5。

表5 6 批樣品含量測定（ng）

3 討論

通過多次重復(fù)性試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)樣品經(jīng)七氟丁酰基咪唑衍生化后得到的衍生物在非極性柱或弱極性柱的HP-5 毛細(xì)管柱進(jìn)行分離，具有峰形好、出峰快的優(yōu)勢。試驗(yàn)中采用程序升溫方式，在保證雜質(zhì)峰與主峰能夠高效分離的同時(shí)，也適當(dāng)控制了各峰的保留時(shí)間。

當(dāng)前隨著人們物質(zhì)生活水平的提高，食品安全問題受到社會(huì)越來越多的關(guān)注，對于有毒物質(zhì)建立有效監(jiān)控的檢測方法成為食品安全生產(chǎn)中的重要一環(huán)。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，1,3-二氯-2-丙醇精密度為0.34%，回收率為95.29%，進(jìn)樣量為0.011 25～0.168 72 ng 時(shí)，峰面積與濃度呈良好線性關(guān)系（相關(guān)系數(shù)γ=0.999 9）；2,3-二氯-1-丙醇精密度為1.16%，回收率為93.36%，進(jìn)樣量為0.010 90～0.163 44 ng 時(shí)，峰面積與濃度呈良好線性關(guān)系（相關(guān)系數(shù)γ=0.999 9）。方法學(xué)驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果良好，所建立的方法操作簡單、快捷，靈敏度高，試驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，適用于氣相色譜法測定初元口服液產(chǎn)品的氯丙醇含量，也適用于生產(chǎn)企業(yè)進(jìn)行質(zhì)量控制。