利格列汀對(duì)2型糖尿病大鼠心肌病變的保護(hù)作用

荊 紅

(山東醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校附屬醫(yī)院，山東 臨沂 276000)

利格列汀可以抑制DPP-4，減少胰高血糖素樣肽-1和抑胃肽的分解代謝，從而降低血糖濃度，因此最初作為一種新型降糖藥被廣泛運(yùn)用于臨床。近年來的研究表明，DPP-4抑制劑在心血管保護(hù)方面也具有重要作用[1-3]，具有抗氧化應(yīng)激的功能，通過降低慢性心肌梗死大鼠心肌的氧化應(yīng)激水平，改善心率變異性和左心室功能；還可通過減少巨噬細(xì)胞浸潤、降低炎性因子CD11b和CD11c的水平，從而達(dá)到心血管保護(hù)作用[4-7]。但有關(guān)利格列汀對(duì)糖尿病心肌病變的作用研究較少，本文進(jìn)行了相關(guān)探討。

1 材料與方法

1.12型糖尿病大鼠心肌病變模型創(chuàng)建 4周齡的雄性SPF大鼠60只，體質(zhì)量100～120 g，由濟(jì)南蓬月實(shí)驗(yàn)動(dòng)物育種有限公司[SCXK(Lu)20140007]提供，其中20只給予基礎(chǔ)飲食(正常對(duì)照組)，其他40只給予添加20%蔗糖和20%豬油制備的高糖、高脂飲食。8周后，高糖、高脂的大鼠中觀察到胰島素抵抗，然后腹膜內(nèi)注射鏈脲佐菌素，40 mg/kg。72 h和7 d后測(cè)量空腹血糖，兩次測(cè)量空腹血糖值≥11.6μmol/L作為糖尿病大鼠。所有動(dòng)物均按照《保養(yǎng)和使用指南》進(jìn)行處理，所有實(shí)驗(yàn)均已獲得動(dòng)物保護(hù)和使用委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2指標(biāo)測(cè)定 正常對(duì)照組在基礎(chǔ)飲食的同時(shí)用生理鹽水灌胃。20只糖尿病大鼠在高脂、高糖飲食的基礎(chǔ)上用生理鹽水灌胃(模型對(duì)照組)，另20只糖尿病大鼠在高脂、高糖飲食基礎(chǔ)上用利格列汀灌胃(利格列汀組)，50 mg/kg。各組共進(jìn)行2周后處死大鼠，取其心臟組織200 mg，加0.9 mL生理鹽水用冰浴勻漿，1500×g離心30 min后取上清液，-80℃凍存待檢。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)其中TNF-α、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量；采用Western及IP細(xì)胞裂解液提取其中蛋白，采用聚丙烯酰胺凝膠蛋白電泳檢測(cè)Drp1S616表達(dá)。

2 結(jié)果

2.1SOD活性MDA及TNF-α含量 三組SOD活性、MDA和TNF-α含量比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩兩比較顯示：正常對(duì)照組及利格列汀組SOD活性均高于模型對(duì)照組(q=6.54，5.83；P<0.05)，MDA和TNF-α含量低于模型對(duì)照組(q=3.23～6.41，P<0.05)。正常對(duì)照組與利格列汀組之間SOD、MDA及TNF-α含量比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(q=0.71～2.38，P>0.05)。見表1。

表1 各組SOD、MDA及TNF-α含量的比較

2.2Drp1S616的表達(dá) 正常對(duì)照組、利格列汀組心肌組織中Drp1S616明顯低于模型對(duì)照組(P<0.05)。見圖1。

圖1 Drp1S616的表達(dá)

3 討論

現(xiàn)已證明，在心肌損傷誘發(fā)和促發(fā)階段均有自由基參與。各種因素和促進(jìn)因素通過各自的轉(zhuǎn)化途徑，終使自由基水平增加。MDA是自由基代謝的產(chǎn)物，其含量可反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化物和自由基產(chǎn)生的程度。SOD是生物體內(nèi)清除自由基的首要物質(zhì)，可對(duì)抗與阻斷自由基對(duì)細(xì)胞造成的損害，并及時(shí)修復(fù)受損細(xì)胞，其在生物體內(nèi)的水平高低意味著衰老與死亡的直觀指標(biāo)。TNF-α是由巨噬細(xì)胞和活化T細(xì)胞分泌的具有多種生物學(xué)活性的細(xì)胞因子，在機(jī)體的炎癥及免疫應(yīng)答等防御機(jī)制中起著重要作用，正常情況下，TNF-α濃度較低，適量TNF-α對(duì)機(jī)體的保護(hù)反應(yīng)是必需的，但過量則對(duì)機(jī)體產(chǎn)生損傷反應(yīng)，還可以促進(jìn)某些細(xì)胞過度生長。近年來的研究表明，心臟線粒體分裂融合的動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)在維持心臟線粒體正常生理狀態(tài)中具有重大的作用，在心肌缺血再灌注損傷、心力衰竭、高血壓、糖尿病心肌病、動(dòng)脈粥樣硬化等多種心血管疾病的發(fā)生發(fā)展中，線粒體分裂融合的動(dòng)態(tài)平衡紊亂起了至關(guān)重要的作用。心肌損傷過程伴發(fā)著Drp1S616的大量釋放，其水平的高低說明了心肌損傷的程度。本研究結(jié)果顯示，利格列汀組SOD含量高于模型對(duì)照組，MDA、TNF-α及Drp1S616含量低于模型對(duì)照組；各指標(biāo)水平與正常對(duì)照組持平。提示利格列汀能通過抗氧化、抑制線粒體損傷來更好地發(fā)揮保護(hù)心肌細(xì)胞的作用。

總之，利格列汀對(duì)糖尿病大鼠心肌損傷有較好的保護(hù)作用，展示其較好的應(yīng)用前景。