甘草炮制工藝的優(yōu)選

張欣舒，董金香，孫志遠(yuǎn)，賈艾玲，楊凈堯，田 健

（長春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，長春 130117）

甘草是豆科植物甘草(Glycyrrhiza uralensisFisch)、脹果甘草(Glycyrrhiza InflataBat.)或光果甘草(Glycyrrhiza glabraL.)的干燥根及根莖[1]。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，有國老、甜草、靈通等別名[2-3]，味甘甜，性平和，入心、脾、肺、胃經(jīng)。生用偏涼[4]，可瀉火解毒、緩急止痛；炙用偏溫，能散表寒、補(bǔ)中益氣[5-6]。此外，甘草還善于調(diào)和藥性，解百藥之毒[7]。甘草是一種應(yīng)用歷史很久的傳統(tǒng)常用藥[8]，主產(chǎn)于內(nèi)蒙古、新疆等地，甘草多生長在干旱、半干旱的荒漠草原、沙漠邊緣和黃土丘陵地帶[9-10]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，甘草具有抗心律失常[11-12]、保肝、抗炎、抗菌、抗病毒、鎮(zhèn)咳、抗氧化、抗癌、免疫調(diào)解和降糖等多種活性[13]。

甘草的炮制從漢代至今多用炙法，在《神農(nóng)本草經(jīng)》中提及：“采根暴干，十日成”，可視為甘草最原始的炮制方法?！独坠谥苏摗吩唬骸胺彩梗毴ヮ^、尾尖處。其頭、尾吐人[14]。凡修事，每斤皆長三寸銼，劈破作六、七片，使瓷器中盛，用酒浸蒸，從巳至午，出，曝干，細(xì)銼。使一斤，用酥七兩涂上，炙酥盡為度。又，先炮令內(nèi)外赤黃用良?！辈粌H有酒蒸、酥炙等炮制方法，也提出了定時(shí)、定量的概念。唐宋時(shí)期在炮制甘草的方法中《日華子諸家本草》一書提倡：“人藥炙用”，《圖經(jīng)本草》提倡：“去蘆頭及赤皮，今云陰干用”，不僅提出“炙用”與“陰干用”的方法，同時(shí)書中還講到了去赤皮。明代《炮炙大法》曰；“甘草，須去頭，尾尖處，頭尾吐人。截作三寸長，劈破作六七片，以瓷器盛之。用浸蒸從巳至午，出曝干；或用清水蘸炙；或切片用蜜水拌炒。如瀉火生用術(shù)、苦參、干漆為之使，惡遠(yuǎn)志，忌豬肉?！爆F(xiàn)代甘草炮制方法的應(yīng)用主要有生甘草、炒甘草、蜜炙甘草[15-16]。本文對甘草凈制、軟化、切制、干燥四個(gè)方面進(jìn)行優(yōu)選。采用高效液相法（HPLC）對甘草中甘草苷、甘草酸進(jìn)行含量測定，優(yōu)選出甘草的最佳炮制工藝，為甘草的進(jìn)一步炮制奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Agilent 1260 高效液相色譜儀（美國安捷倫）、EL-204 型電子分析天平（梅特勒-托利多）、分析天平TG328A（S）（上海精科）、電動(dòng)恒溫水?。ńK常熟）、QY-300 高速裁斷往復(fù)式切藥機(jī)（富陽康華制藥機(jī)械）、H4500 水冷磨刀機(jī)（青島信民電動(dòng)工具）。

1.2 試藥 甘草（GJ008-181203-01，吉林省北藥藥材加工）、甘草苷對照品（CAS：551-15-5）、甘草酸銨對照品（CAS：1405-86-3）對照品均購于中國食品藥品檢定研究院、實(shí)驗(yàn)所用到的液體試劑中，除色譜甲醇和色譜乙腈外均為分析純。

2 方法與結(jié)果

甘草炮制工藝研究過程中，除了從化學(xué)成分，藥理作用指標(biāo)方面考慮外，環(huán)保、工藝經(jīng)濟(jì)問題也應(yīng)該作為綜合考慮的指標(biāo)。最終采用甘草中有效成分甘草苷及甘草酸為指標(biāo)，對凈制、軟化、切制、干燥溫度四個(gè)方面進(jìn)行優(yōu)選[17-19]。

2.1 含量測定 采用2015 版《中國藥典》中甘草項(xiàng)下的方法進(jìn)行測定。

2.1.1 色譜條件 色譜柱：Agilent ZORBAX SB-Aq（4.6 mm×250 mm，5-Micron）；以乙腈為流動(dòng)相A，以0.05%磷酸溶液為流動(dòng)相B，按下表1 中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；檢測波長為237 nm。理論板數(shù)按甘草苷峰計(jì)算應(yīng)不低于5 000。

采用高效液相色譜法測定甘草中甘草苷、甘草酸成分含量。流動(dòng)相A 選用乙腈，流動(dòng)相B 選用0.05%磷酸水溶液，按照下方所列表格中的規(guī)定數(shù)值進(jìn)行梯度洗脫；設(shè)定檢測波長為237 nm，進(jìn)樣量10 μL。

表1 甘草含量測定洗脫條件

2.1.2 溶液的制備 對照品溶液制備：取甘草苷、甘草酸對照品，準(zhǔn)確稱量，加入70%乙醇分別制備成1 mL 溶液中含有甘草苷20 μg、甘草酸0.2 mg，即得。供試品溶液制備：準(zhǔn)確稱取甘草粉末（過3 號篩）約為0.2 g，置錐形瓶中，量取70%乙醇100 mL 加入到錐形瓶中，密塞，稱定重量后超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）30 min，取出冷卻至室溫，再稱定一次重量，然后用70%乙醇補(bǔ)重，振蕩搖勻，過濾，即得。

2.1.3 測定 分別精密吸取10 μL 的對照品溶液、供試品溶液，注入HPLC 中進(jìn)行測定，即得。見圖1。

2.2 甘草炮制工藝

2.2.1 甘草的凈制 將甘草置于挑選臺，除去雜質(zhì)、灰屑及非藥用部分，將外皮損傷嚴(yán)重者用剪刀剪去其破損部位，用刀切去甘草的須根和非藥用部位和爛心部位，搶水洗凈[20-21]。傳統(tǒng)加工方法中有除掉甘草外皮者，并且將除掉外皮的甘草稱為粉甘草。說明甘草在應(yīng)用的過程中存在除掉外皮后使用的歷史。但是，國內(nèi)現(xiàn)有銷售的甘草飲片，一般都沒有去除栓皮的甘草。雖然醫(yī)生在開具的處方中也會提及甘草、粉甘草，但是藥房付藥時(shí)也均會付給生甘草。因此本實(shí)驗(yàn)對甘草的凈制過程中的甘草外皮（栓皮）去皮與不去皮進(jìn)行了考察，含量測定結(jié)果見表2。

根據(jù)含量測定結(jié)果顯示，甘草在凈制過程中，去除栓皮會使甘草中總有效成分甘草酸及甘草苷含量下降。根據(jù)含量測定結(jié)果可確定甘草在凈制時(shí)不去除栓皮。

2.2.2 甘草的軟化 甘草洗凈后，置于自封袋中，在常溫下將水加入噴壺中，均勻噴在甘草表面，密封自封袋，置于鐵盤中，放入烘箱中進(jìn)行悶潤；若干小時(shí)后用彎曲法檢驗(yàn)，甘草彎曲90°不折斷，內(nèi)外濕度一致；將潤后的甘草稱重，記錄甘草潤后重量。

軟化方法的考察：《中國藥典》記載甘草軟化方法為潤透，內(nèi)外濕度一致，軟硬適度，便于切制。傳統(tǒng)軟化方法有蒸汽潤與悶潤，此實(shí)驗(yàn)甘草軟化方法是根據(jù)藥材形狀（彎曲法—彎而不折）以及切片后飲片性狀為依據(jù)，對甘草悶潤與蒸汽潤進(jìn)行考察。含量測定結(jié)果見表3。

含量測定結(jié)果顯示，經(jīng)悶潤法軟化處理的甘草中有效成分含量較蒸汽潤高，由于蒸汽潤溫度過高，致使甘草中有效成分流失多。根據(jù)含量測定結(jié)果可確定甘草的軟化方法為悶潤。

悶潤溫度的考察：甘草軟化方法確定為悶潤，但在室溫下進(jìn)行悶潤時(shí)間過長，不利于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)，

圖1 甘草HPLC 色譜圖

表2 甘草去皮與不去皮含量考察結(jié)果 %

表3 甘草悶潤與蒸汽潤含量考察結(jié)果 %

因此，本實(shí)驗(yàn)結(jié)合甘草軟化后含量以及生產(chǎn)工藝等因素對悶潤時(shí)的溫度（常溫、40 ℃、50 ℃、60 ℃）進(jìn)行考察，結(jié)果見表4。

表4 甘草悶潤時(shí)不同溫度含量考察結(jié)果 %

結(jié)果顯示甘草在60 ℃條件進(jìn)行悶潤軟化處理，甘草中有效成分損失最少。根據(jù)含量測定結(jié)果可確定甘草的悶潤溫度是60 ℃。

2.2.3 甘草的切制 取潤好的甘草，晾至表面干爽，擠壓不出水，以減少連刀現(xiàn)象。采用高速裁斷往復(fù)式切藥機(jī)對甘草進(jìn)行切片。切片時(shí)，將甘草擺放在履帶上，擺放時(shí)調(diào)整好甘草之間的距離，厚度為2～4 mm，在切片過程中務(wù)必將甘草固定，避免轉(zhuǎn)動(dòng)。

2.2.4 甘草的干燥 取切好的甘草飲片鋪料，厚度約30 mm，在常溫下晾干或放入電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中，在不同溫度下進(jìn)行干燥，將干燥后的甘草裝入自封袋稱重。在最低限度影響甘草有效成分的情況下對甘草的最佳干燥溫度進(jìn)行考察，結(jié)果見表5。

表5 甘草不同干燥溫度含量考察結(jié)果 %

結(jié)果顯示，甘草在70 ℃條件下置于電熱鼓風(fēng)干燥箱進(jìn)行干燥時(shí)，甘草飲片中甘草有效成分最高。根據(jù)含量測定結(jié)果可確定甘草的干燥溫度是70 ℃。

3 結(jié)語

根據(jù)前期預(yù)實(shí)驗(yàn)得到，凈制要除去雜質(zhì)以及非藥用部位，在凈制時(shí)不去除栓皮的甘草含有甘草酸及甘草苷成分較高，在軟化時(shí)，要注意用水量，軟化到可以彎曲且不被折斷。在切制過程中，需要做到藥透水盡；在干燥過程，需要適宜的溫度。通過采用高效液相色譜法對甘草炮制后的樣品中的甘草苷及甘草酸進(jìn)行測定，根據(jù)考察結(jié)果，最終確定甘草的最佳炮制工藝，甘草的軟化方法為悶潤，悶潤溫度為60 ℃，不去皮，切制后飲片在70 ℃條件下干燥。

本實(shí)驗(yàn)主要研究甘草炮制工藝，通過對甘草藥材炮制工藝的優(yōu)選，甘草在凈制、軟化、切制、炒制工藝更加簡便、合理，可以有效大量提取出有效成分，提高甘草在臨床應(yīng)用中的療效。