舟山近海3 種鰧科魚類及其DNA 條形碼研究

任米佳，俞正森，徐勝勇，徐開達，徐漢祥，高天翔

(1.浙江海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，浙江舟山 316022；2.中國海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，山東青島 266003；3.浙江海洋大學(xué)海洋與漁業(yè)研究所，浙江省海洋水產(chǎn)研究所，浙江舟山 316021)

鰧科Uranoscopidae 魚類隸屬于硬骨魚綱Osteichthyes、鱸形目Perciformes、龍鰧亞目Trachinoidei[1]。Fishbase(Froese and Pauly,2019)資料顯示現(xiàn)生鰧科魚類共有8 屬53 種，在中國已知有3 屬7 種。在《浙江海洋魚類志》[1]755中記載浙江省鰧科魚類共有3 屬5 種，分別為日本鰧Uranoscopus japonicusHouttuyn,1782、土佐鰧Uranoscopus tosae(Jordan &Hubbs,1925)、少鱗鰧Uranoscopus oligolepisBleeker,1878、披肩鰧Ichthyscopus lebeck(Bloch &Schneider,1801) 和青鰧Xenocephalus elongatus(Temminck &Schlegel,1843)。鰧科魚類作為經(jīng)濟魚類[1]，少量出現(xiàn)于兼捕漁獲物中，目前僅見一些鰧科魚類分類學(xué)研究介紹[2-5]，而關(guān)于鰧科魚類生物學(xué)、遺傳學(xué)的研究報道極少。

線粒體DNA (mitochondrial DNA) 是線粒體中的遺傳物質(zhì)。魚類線粒體DNA 包括13 個蛋白質(zhì)編碼基因、22 個轉(zhuǎn)運RNA、2 個核糖體RNA、1 個非編碼區(qū)和1 個輕鏈復(fù)制起始區(qū)。它們具有自我復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和翻譯的能力[6]。2003 年HEBERT,et al[7]提出DNA 條形碼(DNA barcoding)作為物種鑒定的標記，以此建立DNA 序列和生物物種間的對應(yīng)關(guān)系。DNA 條形碼是指生物體內(nèi)能夠代表物種的、標準的、有足夠變異的、易擴增且相對較短的DNA 片段[8]，目前已被廣泛應(yīng)用于物種鑒定等研究。例如，2006 年YOSHIDA,et al[9]利用線粒體12S rRNA 及COⅠ序列探討烏賊科Sepiidae 的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系；2013 年李淵等[10]利用COⅠ基因?qū)K屬Pampus魚類進行分類研究；2015 年王燕平[11]基于COⅠ序列探討蛇鯔屬Saurida魚類的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系；2016 年張靜等[12]利用DNA 條形碼技術(shù)對中國沿海分布的6 種棱鳀屬Thryssa魚類樣品進行了物種鑒定；2018 年趙娜等[13]基于DNA 條形碼可以對除南極小帶腭魚Cryodraco antarcticus和羅斯海小帶腭魚Cryodraco atkinsoni之外的南極魚類物種進行鑒定。2015 年MIYA,et al[14]設(shè)計了12S rRNA 基因片段引物作為metabarcoding，主要用于海洋魚類多樣性監(jiān)測研究。

本研究對近年來采集的鰧科魚類進行形態(tài)特征分析，并測定線粒體12S rRNA 和COⅠ基因片段，結(jié)合GenBank 中同源序列進行比較分析，探討鰧科魚類種間遺傳變異程度及其系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系，以期為鰧科魚類分類的深入研究提供基礎(chǔ)資料。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

于2017 年4 月-2019 年10 月在浙江舟山近海采集日本鰧、土佐鰧和青鰧標本。形態(tài)學(xué)實驗所用日本鰧27 尾，體長范圍為148.5～261.9 mm，體質(zhì)量范圍為25.73～337.9 g；土佐鰧5 尾，體長范圍為142.5～183.5 mm，體質(zhì)量范圍為131.1～234.3 g；青鰧24 尾，體長范圍為239.5～392.5 mm，體質(zhì)量范圍為378.9～1 807.9 g（表1）。所有標本保存于浙江海洋大學(xué)漁業(yè)生態(tài)與生物多樣性實驗室。

表1 本研究所用鰧科樣品信息Tab.1 Information of Uranoscopidae samples in this study

1.2 實驗方法

1.2.1 形態(tài)學(xué)研究

對樣品進行形態(tài)學(xué)測定[10]。用游標卡尺測量體長、頭長、吻長、眼徑、眼間距、眼后頭長、尾柄長、尾柄高、第一背鰭基長、第二背鰭基長、胸鰭基長、腹鰭基長和臀鰭基長，精確到0.1 mm，各測量指標見圖1(以日本鰧為例)。對背鰭鰭條數(shù)、臀鰭鰭條數(shù)、尾鰭鰭條數(shù)、胸鰭鰭條數(shù)和腹鰭鰭條數(shù)進行計數(shù)。用電子天平測定樣品質(zhì)量，精確到0.1 g。

圖1 日本鰧的形態(tài)學(xué)測量指標Fig.1 Morphometric characters for U.japonicus

1.2.2 DNA 提取、擴增和測序

剪取樣品肌肉，采用苯酚-氯仿法提取DNA[15]。將乙醇沉淀后的基因組DNA 溶解于100 μL 滅菌水中，并保存于4 ℃冰箱備用。所得的DNA 用1.5%的瓊脂糖凝膠電泳檢測，并用于PCR 擴增。

本研究擴增的基因片段為12S rRNA 及COⅠ基因片段。線粒體DNA 的12S rRNA 基因擴增引物為Mifish-U-F:5’-GTCGGTAAAACTCGTGCCAGC-3’和Mifish-U-R:5’-CATAGTGGGGTATCTAATCCCAGTTTG-3’[11]，COI 基因擴增引物為F1:5’-TCAACCAACCACAAAGACATTGGCAC-3’，R1:5’-TAGACTTCTGGGTGGCCAAAGAATCA-3’及R2:5’-ACTTCAGGGTGACCGAAGAATCAGAA-3’[16]。PCR 反應(yīng)總體積25 μL，其中10×buffer 2 μL、正反向引物各1 μL、DNTPs 2 μL、ExTaq酶0.15 μL、滅菌水17.5 μL、ExTaq酶0.15 μL 以及DNA 模板1 μL。反應(yīng)條件為：94 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性45 s，54 ℃退火30 s，72 ℃延伸45 s，共35 個循環(huán)；最后72 ℃延伸10 min。擴增產(chǎn)物經(jīng)電泳檢測后，送上海美吉生物科技有限公司進行雙向測序。

1.2.3 數(shù)據(jù)分析

將測得的mtDNA 12S rRNA 及COⅠ基因片段用DNAStar(DNASTAR,Inc)軟件包中的Seqman 軟件進行序列比對，并輔以人工校正；采用NCBI 在線BLAST 與網(wǎng)上序列對比；使用Arlequin 軟件計算堿基組成、多態(tài)位點、單倍型多樣性(haplotype diversity,h)、核苷酸多樣性(nucleotide diversity,π)等數(shù)據(jù)，使用MEGA 6.0 計算Kimura-2-parameter 遺傳距離，并用黃鰭刺蝦虎魚Acanthogobius flavimanus作為外群，基于鄰接法(Neighbor-Joining)構(gòu)建系統(tǒng)樹分析3 種鰧科魚類的親緣關(guān)系，并對所得系統(tǒng)樹進行自展法檢驗(1 000 次重復(fù))。

2 結(jié)果

2.1 形態(tài)描述

在形態(tài)特征中，日本鰧、土佐鰧與青鰧的差異主要表現(xiàn)在背鰭和肱棘特征上。日本鰧和土佐鰧都具有2 個背鰭，且肱棘強大，而青鰧只具有1 個背鰭，且肱棘不明顯。3 種鰧科魚類可數(shù)、可量性狀比較見表2。

表2 3 種鰧科魚類可數(shù)、可量性狀比較Tab.2 Meristic characters and proportional measurements of the three Uranoscopidae species

2.1.1 日本鰧Uranoscopus japonicusHouttuyn,1782

測量樣品27 尾，全長范圍為175.6～251.1 mm，體長范圍為136.4～192.6 mm,D.Ⅳ-14;P.18;V.Ⅰ-5;A.15;C.16。

體長為體高的4.2～5.7 倍，為頭長的3.9～4.1 倍，為體寬的5.8～6.0 倍；頭長為吻長的6.9～8.2 倍，為眼徑的10.9～11.1 倍，為眼間距的3.7～4.9 倍；眼間距為眼徑的2.2～3.0 倍；體長為腹鰭基長的10.3～10.9 倍，為胸鰭基長的30.6～32.5 倍；體長為尾柄長的8.4～8.9 倍；尾柄長為尾柄高的1.04～1.21 倍。

體延長，頭粗大，吻短。體背面中央與眼間隔間有1 凹窩?？羟肮窍戮売? 個短骨突。鼻孔2 個，位于吻前端。鰓蓋后方胸鰭上方具2 個肱棘，后棘特別尖長。前鰓蓋骨下緣有4～5 個尖棘，下鰓蓋骨下方有1埋在皮內(nèi)的尖棘。

體被小圓鱗，鱗斜向后下方。頭部、頸背部、胸腹部、背鰭基均無鱗。側(cè)線1 條，位高。體背側(cè)呈黃褐色，腹部白色，體兩側(cè)及背面具白色斑點。第一背鰭黑色，基底白色；第二背鰭淡黃色。臀鰭白色。胸鰭黃色。腹鰭淡紅色。尾鰭黃色，后緣白色。

日本鰧分布于西北太平洋海域，我國沿海均有分布，屬廣溫性底層中小型魚類，多棲息于沙泥質(zhì)淺海水域。詳細體態(tài)特征見圖4。

圖2 日本鰧(192.6 mm SL,226 g)Fig.2 Uranoscopus japonicus Houttuyn,1782

2.1.2 土佐鰧Uranoscopus tosae (Jordan &Hubbs,1925)

測量樣品5 尾，全長范圍為188.5～228.5 mm，體長范圍為142.5～183.5 mm,D.Ⅳ-13;P.19;V.Ⅰ-5;A.13;C.17。

體長為體高的3.26～4.57 倍，為頭長的2.8～2.9 倍，為體寬的2.9～3.2 倍；頭長為吻長的8.5～8.7 倍，為眼徑的5.8～9.3 倍，為眼間距的3.7～4.5 倍；眼間距為眼徑的1.6～2.1 倍；體長為腹鰭基長的5.1～5.3 倍，為胸鰭基長的17.0～18.2 倍；體長為尾柄長的10.7～13.1 倍；尾柄長為尾柄高的1.2～1.4 倍。

體長形，頭粗大，稍平扁，近四棱形，吻短鈍。眼間隔中央微凹。頭部中央凹入，形成1 凹刻?？羟肮窃谖乔岸擞?個短棘突。頭部兩側(cè)各有1 低縱骨棱，鰓蓋后方胸鰭上方具2 個肱棘。鼻孔2 個，位于吻前端。上、下頜緣邊均有1行小須狀突起。前鰓蓋骨下緣有6 個短棘，下鰓蓋骨下端有1 短小棘。

體被圓鱗，細小，半埋于皮下，呈斜行排列。僅喉部到肛門間和胸鰭基部附近無鱗。側(cè)線完全，位高，自鰓蓋后上方起沿背緣向后延伸，在尾柄中部斜折至尾鰭基中部。體背側(cè)黃褐色，身上無特殊斑紋，腹側(cè)灰白色，第一背鰭黑色，下緣黃白色，第二背鰭、胸鰭與尾鰭灰黃色，腹鰭與臀鰭白色?？谇慌c鰓腔白色。

土佐鰧分布于西北太平洋海域，我國產(chǎn)于南海、東海及臺灣海域，屬于暖水性底棲中小型魚類，棲息水深可達420 m。詳細體態(tài)特征見圖3。

圖3 土佐鰧(193.1 mm SL,235 g)Fig.3 Uranoscopus tosae (Jordan &Hubbs,1925)

2.1.3 青鰧Xenocephalus elongatus(Temminck &Schlegel,1843)

測量樣品24 尾，全長范圍為312.3～470.5 mm，體長范圍為289.5～432.1 mm,D.13;P.19～20;V.Ⅰ-5;A.18;C.12～13。

體長為體高的6.6～7.7 倍，為頭長的3.9～4.2 倍，為體寬的7.3～8.4 倍；頭長為吻長的8.6～10.4 倍，為眼徑的8.9～10.4 倍，為眼間距的4.2～5.4 倍；眼間距為眼徑的3.0～3.2 倍；體長為腹鰭基長的12.2～12.7 倍，胸鰭基長的35.0～41.2 倍；體長為尾柄長的15.3～17.2 倍；尾柄長為尾柄高的1.10～1.16 倍。

體長形，頭中大，吻短鈍。眼間隔中央凹入。鼻孔2 個，位于吻前緣，前鼻孔后緣有1 皮瓣?？诰売? 行短毛狀皮突。鰓蓋后方胸鰭上方無肱棘。鰓孔大。峽部有2 個黑點。

體被很小圓鱗，大多埋于皮下。頭部、胸部和腹部均無鱗。側(cè)線1 條，位高。體背部灰青綠色，腹部淡青灰色，體背部及兩側(cè)上方具許多不規(guī)則褐色小斑，背鰭淡黃色。臀鰭、胸鰭及腹鰭淡棕色。尾鰭灰青色。

青鰧分布于西北太平洋海域，我國沿海均有分布。屬于廣溫性較深海底棲中型魚類，主要棲息于大陸架邊緣泥沙質(zhì)底的較深海區(qū)。詳細體態(tài)特征見圖4。

圖4 青鰧（254.7 mm SL,498 g）Fig.4 Xenocephalus elongatus (Temminck&Schlegel,1843)

2.2 DNA 條形碼分析

2.2.1 mtDNA 12S rRNA 基因片段序列

本實驗共測得41 條12S rRNA 序列，其中日本鰧22 條，土佐鰧5 條，青鰧14 條，所有序列未出現(xiàn)堿基插入與缺失，片段長度均為173 bp。3 種鰧科魚類的4 種堿基平均含量為：A 為34.65%,T 為16.83%,G為24.23% C 為24.24%,平均A+T 含量（51.53%）略高于G+C 含量（48.47%）（表3）。41 個序列中共有8 個單倍型，其中日本鰧5 個單倍型，土佐鰧2 個單倍型及青鰧1 個單倍型。在173 個位點中，保守位點129個，變異位點44 個，簡約信息位點41 個，單一突變位點3 個。日本鰧和土佐鰧單倍型多樣性分別為0.337 7±0.127 8 和0.400 0±0.237 3，核苷酸多樣性分別為0.002 2±0.002 4 和0.002 4±0.003 0。

表3 3 種鰧科魚類12S rRNA 基因序列特征Tab.3 Characters of 12S rRNA gene fragments of the three Uranoscopidae species

2.2.2 mtDNA COⅠ基因片段序列

本實驗共測得20 條線粒體COⅠ基因片段序列，其中日本鰧2 條，土佐鰧5 條，青鰧13 條，所有序列未出現(xiàn)堿基插入與缺失，片段長度為655 bp。3 種鰧科魚類的4 種堿基平均含量為：A 為22.38%,T 為28.36%,G 為18.42%，C 為30.84%,平均A+T 含量（50.74%）高于G+C 含量（49.26%）（表4）。20 個序列中共測得8 個單倍型，其中日本鰧2 個單倍型，土佐鰧2 個單倍型及青鰧4 個單倍型。在655 個位點中，保守位點476 個，變異位點179 個，簡約信息位點174 個，單一突變位點5 個。日本鰧、土佐鰧和青鰧的單倍型多樣性分別為1.000±0.500 0、0.400 0±0.237 3 和0.423 1±0.164 5，核苷酸多樣性分別為0.128 2±0.129 0、0.0018±0.001 6 和0.000 7±0.000 74。

表4 3 種鰧科魚類CO I 基因序列特征Tab.4 Characters of CO I gene fragments of the three Uranoscopidae species

2.3 種內(nèi)與種間遺傳距離

采用MEGA 6.0 軟件，基于Kimura 2-parameter 算法計算12S rRNA 及CO I 的凈遺傳距離（表5、6）。在12S rRNA 基因中，種內(nèi)遺傳距離均為0.002；種間遺傳距離范圍為0.147～0.216，其中日本鰧與土佐鰧的遺傳距離最?。?.147），其次是土佐鰧與青鰧（0.209），日本鰧與青鰧遺傳距離最大，為0.216。在CO I 基因中，3 種鰧科魚類種內(nèi)遺傳距離范圍為0.001～0.005；種間遺傳距離范圍為0.192～0.261，種間遺傳距離最大的是土佐鰧與青鰧（0.261），日本鰧與土佐鰧遺傳距離最小。

表5 基于12S rRNA 基因序列的種內(nèi)（對角線）和種間（下三角）遺傳距離Tab.5 Intraspecific (on diagonal) and interspecific (below diagonal) genetic distance based on 12S rRNA gene fragments

表6 基于CO I 基因序列的種內(nèi)（對角線）和種間（下三角）遺傳距離Tab.6 Intraspecific (on diagonal) and interspecific (below diagonal) genetic distance based on CO I gene fragments

2.4 系統(tǒng)發(fā)育分析

以黃鰭刺蝦虎魚作為外群，從GenBank 上下載3 種鰧科魚類的12S rRNA 序列，日本鰧、土佐鰧和青鰧的引用序列號分別為AB974631、LC037149 和LC 506657；從GenBank 上下載3 種鰧科魚類的CO I 序列，日本鰧和土佐鰧的引用序列號分別為AP017446 和KX641475，青鰧的引用序列號為KU892957 和JQ738420。采用鄰接法（NJ）構(gòu)建系統(tǒng)進化樹（圖4、5）。結(jié)果顯示，基于12S rRNA 與CO I 基因構(gòu)建的系統(tǒng)樹結(jié)構(gòu)基本一致，其中日本鰧和土佐鰧之間的親緣關(guān)系較近，與青鰧的親緣關(guān)系較遠。

圖5 基于12S rRNA 基因構(gòu)建的單倍型NJ 樹Fig.5 Phylogenetic tree of the three Uranoscopidae species based on 12S rRNA gene fragments

圖6 基于COⅠ基因片段構(gòu)建的單倍型NJ 樹Fig.6 Phylogenetic tree of the three Uranoscopidae species based on CO I gene fragments

3 討論

《魚類分類學(xué)》中記載了瞻星魚科Uranoscopoidae 有瞻星魚屬Uranoscopus和青鰧屬Gnathagnus[2]。在《中國魚類系統(tǒng)檢索》中記載了我國鰧科有4 屬6 種[4]。在《東海魚類志》中，朱元鼎等[17]記錄了我國鰧科有4 屬5 種，4 屬有鰧屬Uranoscopus、項鱗鰧屬Zalescopus、魚鰧屬Ichthyscopus和青鰧屬Gnathagnus，5 種有日本鰧Uranoscopus japonicus(Houttuyn,1782)、少鱗鰧Uranoscopus oligolepis(Bleeker,1878)、項鱗鰧Uranoscopus tosae(Jordan &Hubbs,1925)、魚鰧Ichthyscopus lebeck (Bloch &Schneider,1801)和青鰧Gnathagnus elongatus (Temminck &Schlegel,1843)，其中將鰧屬魚類中具背鰭Ⅳ-13～14、臀鰭13～14、胸鰭17～18、腹鰭Ⅰ-5、尾鰭16～18、體背側(cè)全部有白色網(wǎng)狀斑紋、鰓孔后方具2 個尖肱棘和后棘特別尖長等特征的魚種鑒定為日本鰧；將項鱗鰧屬魚類中具背鰭Ⅳ-13、臀鰭13、胸鰭19、腹鰭Ⅰ-5、尾鰭17、前鰓蓋骨下緣有6 個短棘和下鰓蓋骨下端有一短小棘的魚種鑒定為項鱗鰧；將青鰧屬魚類中具背鰭12～13、臀鰭16～18、胸鰭18～20、腹鰭Ⅰ-5、尾鰭11～13、體背部灰青綠色且具不規(guī)則小斑、背鰭淡黃色和前鰓蓋骨后緣無小突起等特征的魚種鑒定為青鰧。在《福建魚類志》中記載了我國鰧科有3 屬5 種，其中鰧屬Uranoscopus有日本鰧、雙斑鰧Uranoscopus bicinctus(Temminck &Schlegel,1843)和少鱗鰧；魚鰧屬Ichthyscopus有魚鰧；青鰧屬Gnathagnus有青鰧[5]。在《浙江海洋魚類志》一書中，趙盛龍等[1]760將中文名項鱗鰧改名為土佐鰧，日本鰧、土佐鰧和青鰧的形態(tài)學(xué)研究結(jié)果與《東海魚類志》[17]的研究結(jié)果一致。山田[18]將具2 背鰭、鰓蓋后方胸鰭上方肱棘明顯的鰧科魚類劃分為鰧屬，將魚體背部具淡色斑紋、前鰓蓋骨下緣具4 個尖棘和頭部頂端達到兩眼后緣連線的魚種鑒定為日本鰧；將鰧屬魚類中魚體背部無特殊斑紋的魚種鑒定為土佐鰧；青鰧體背側(cè)斑點呈褐色，胸鰭基底上沒有羽狀皮質(zhì)小突起，背鰭上僅有軟條。

本研究中日本鰧的臀鰭鰭條數(shù)與《浙江海洋魚類志》[1]757、《福建魚類志》[5]和《東海魚類志》[17]所描述的不一致；青鰧的胸鰭鰭條數(shù)與《浙江海洋魚類志》[1]762和《東海魚類志》[17]中的研究結(jié)果不一致，但與《福建魚類志》[5]中關(guān)于青鰧的胸鰭鰭條數(shù)的描述相一致。其他關(guān)于日本鰧、土佐鰧和青鰧的形態(tài)特征結(jié)果與本研究中的形態(tài)特征結(jié)果基本一致。本研究形態(tài)特征描述結(jié)果可為鰧科魚類形態(tài)分析、物種鑒定等工作提供補充資料。

脊椎動物的線粒體基因組中含13 個蛋白質(zhì)編碼基因、2 個核糖體RNA 基因、22 個轉(zhuǎn)運RNA 基因以及非編碼區(qū)基因[19]。線粒體基因組含有多個標志性的遺傳標記位點，可根據(jù)線粒體不同部位的進化速率不同，并結(jié)合研究的情況，選擇合適的遺傳標記位點進行分析。以往研究者們利用線粒體CO I 基因序列對鯔科Mugilidae[20]魚類、鱈科Gadidae[21]魚類、金線魚屬Nemipterus[19]魚類、銀鯧Pampus argenteus[10]等開展了研究，在CO I 基因序列的堿基組成中，結(jié)果表明平均A+T 的含量高于G+C 的含量，本研究中3 種鰧科魚類的A+T 的平均含量（50.74%）略高于G+C 的平均含量（49.26%），這與以上魚類的CO I 基因序列研究結(jié)果一致。MEYER,et al[22]認為，理想DNA 條形碼檢測到的同屬內(nèi)種間遺傳差異應(yīng)該明顯大于種內(nèi)遺傳差異，并在二者之間形成一個明顯的間隔區(qū)，稱作barcoding gap，在CO I 基因片段上的種內(nèi)差異低于0.01，種間遺傳差異大于0.02。本研究中種內(nèi)遺傳距離范圍在0.001～0.005 之間，日本鰧與土佐鰧遺傳距離最?。?.192），其次是日本鰧與青鰧（0.241），土佐鰧與青鰧遺傳距離最大（0.261）。研究結(jié)果與MEYER,et al 提出的標準相符，表明3 種鰧科魚類種類的有效性，同時驗證了日本鰧與土佐鰧遺傳關(guān)系更近，青鰧與其兩者遺傳關(guān)系較遠。

HAJIBABAEI,et al[23]于2006 年將200 bp 左右的序列應(yīng)用于蛾類，并且成功利用所指定的200 bp 長度的序列有效鑒定該物種。由此，HAJIBABAEI,et al[23]提出了DNA 微型條形碼的概念。DNA 微型條形碼技術(shù)作為一個新興的技術(shù)，在對物種分類識別上有著其自身快捷、簡單的優(yōu)點。其中，MIYA,et al[14]基于大量的線粒體基因組全序列設(shè)計了180 bp 左右的高通量條形碼（metabarcoding），主要用于海洋魚類多樣性監(jiān)測分析。MIYA,et al 使用12S rRNA 引物對沖繩水族館及其附近海域的水樣進行魚類多樣性驗證，累計準確鑒定出70 個科、152 個屬，共232 種魚類。然而，微型條形碼技術(shù)又由于其發(fā)展不成熟在一定程度上受到部分學(xué)者質(zhì)疑，對于微型DNA 條碼的優(yōu)缺點已有文章綜述[24-25]。本次實驗結(jié)果表明微型DNA 條形碼在鰧科魚類鑒定中具有很高的準確性。本研究使用12S rRNA 引物對3 種鰧科魚類進行分析，結(jié)果表明種內(nèi)遺傳距離均為0.002，種間遺傳距離范圍為0.147～0.216，其中日本鰧與土佐鰧的遺傳距離最?。?.147），其次是土佐鰧與青鰧（0.209），日本鰧與青鰧遺傳距離最大，為0.216。本研究結(jié)果與CO I 基因序列研究結(jié)果一致，說明Metabarcoding 適用于鰧科魚類的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系研究。綜上所述，線粒體12S rRNA、CO I 基因片段可以作為DNA 條形碼用于鰧科魚類鑒定、鰧科魚類種間系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系的研究。系統(tǒng)發(fā)育分析結(jié)果顯示日本鰧與土佐鰧親緣關(guān)系較近，與青鰧親緣關(guān)系較遠。分子系統(tǒng)發(fā)育結(jié)果與基于形態(tài)學(xué)的種屬劃分相吻合[1]。

由于魚類的生長環(huán)境和發(fā)育階段的不同影響魚類的形態(tài)特征，僅依據(jù)形態(tài)特征鑒定物種可能會存在偏差，本研究將形態(tài)學(xué)方法與DNA 條形碼技術(shù)相結(jié)合，對3 種鰧科魚類進行分析和比較，為深入展開鰧科魚類的分類和系統(tǒng)發(fā)育研究奠定了基礎(chǔ)。