有氧運動干預父系C57BL/6小鼠對雄性子代IGF-1表達及其甲基化的影響

黃嵩 王巍 牛燕媚 傅力，

1 天津醫(yī)科大學生理學與病理生理學系（天津300070）

2 天津市天津醫(yī)院康復科（天津300210）

3 天津醫(yī)科大學醫(yī)學技術學院康復醫(yī)學系（天津300070）

有氧運動在促進骨骼肌代謝及重塑中發(fā)揮重要作用，研究發(fā)現(xiàn)長期有氧運動通過增強蛋白質合成而加快修復受損的骨骼肌[1]。此外，有氧運動能明顯降低體脂含量并改善機體脂質代謝[2]。但是有氧運動作用于何種內分泌因子增加骨骼肌合成代謝并降低機體脂肪含量，目前尚不清楚。胰島素樣生長因子1（insulinlike growth factor 1，IGF-1）是一種具有促生長作用的內分泌性多肽類物質，肝臟產生的IGF-1 是血液循環(huán)中的主要來源[3]。研究發(fā)現(xiàn)，IGF-1能增加骨骼肌細胞蛋白質合成、加快肌纖維生長、刺激肌纖維增殖分化，這對骨骼肌重塑及損傷修復有促進作用[4]。在基因層面上，IGF-1存在6個外顯子和5個內含子，其第5外顯子選擇性轉錄，另外IGF-1 含有2 個啟動子，分別是啟動子1 （promoter 1，P1） 和啟動子2 （promoter 2，P2），其3’端含有多個轉錄終止位點，因此，IGF-1能編碼多種IGF-1基因轉錄子[5]。IGF-1啟動子和蛋白編碼區(qū)含有多個CG位點，它們能發(fā)生不同的甲基化修飾。所謂DNA 甲基化是指在DNA 甲基化轉移酶的作用下，在基因組CpG二核苷酸的胞嘧啶5’碳位共價鍵結合一個甲基基團。大量研究表明，DNA 甲基化能引起染色質結構、DNA 構象、DNA穩(wěn)定性及DNA與蛋白質相互作用方式的改變，從而抑制基因表達[6]。此外，運動能引起體內多種基因的甲基化水平發(fā)生改變，這當中的許多基因參與代謝和機體能量利用，提示運動通過影響基因的甲基化水平而調控機體能量代謝[7]。但是，迄今關于運動能否影響IGF-1的啟動子甲基化水平則尚無定論。

流行病學數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，親代所處的生活環(huán)境和生活習慣能對后代健康產生影響[8]。高脂飲食能改變大鼠后代胰島β細胞DNA甲基化修飾從而引發(fā)后代產生肥胖和胰島素抵抗[9]。低蛋白飼料喂養(yǎng)的雄性小鼠，其雄性子代肝臟中參與脂質、膽固醇合成的有關基因表達增加[10]。這些均提示父源性（F0）的生活習慣可影響子代生長發(fā)育，但是有關運動干預父系小鼠對子代健康的影響卻少有研究。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)，高脂飲食/有氧運動干預父代C57BL/6 小鼠能影響雄性子代的糖、脂代謝，但該影響僅見于雄性后代[11]。研究發(fā)現(xiàn)，性別差異造成的表型差異與X/Y染色體有關，X/Y上的基因表達影響個體對環(huán)境的適應和疾病易感性[12]。因此，本研究對父系C57BL/6小鼠進行為期6周的跑臺運動干預，檢測雄性F1 代小鼠的表型數(shù)據(jù)及IGF-1 表達和甲基化情況，探究運動干預父系小鼠對雄性子代IGF-1表達及其甲基化的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物分組

8周齡C57BL/6小鼠20只（雌雄各半），購買自北京華阜康生物科技股份有限公司，于天津醫(yī)科大學實驗動物中心飼養(yǎng)配繁，自由飲水，溫度20～25°C，濕度40%～60%，12 小時光照。小鼠適應性喂養(yǎng)1 周后，隨機選取雌、雄小鼠按1∶1 比例配籠，次日晨檢查雌鼠受孕情況，將孕鼠分籠飼養(yǎng)至分娩。新生鼠（F0）母乳喂養(yǎng)21 天后斷乳，每窩選取2～3 只雄性小鼠為F0 代運動組（E 組），另2～3 只同窩雄性小鼠為F0 代安靜組（C組）。

1.2 運動干預方案

運動組F0 小鼠適應性喂養(yǎng)1 周后，進行6 周跑臺運動干預：60 分/次，1次/天，5天/周，6周。在6周運動期間，運動強度均為12 米/分，相當于75% VO2max[13]。安靜組F0 小鼠不進行跑臺運動，其正常生理、生活活動不予干預。6周跑臺干預后，運動組和安靜組小鼠分別與同窩未干預的雌性小鼠按1∶1 合籠交配，次日晨檢查雌鼠受孕情況，將孕鼠單獨喂養(yǎng)至分娩。分娩后的小鼠為F1 代。分別從F0 代安靜組與運動組小鼠后代中各選取11～12只F1代雄性小鼠分為安靜組（CM）和運動組（EM）作為本實驗研究對象。

1.3 小鼠取材及組織保留

F1小鼠自出生21天后斷乳分籠，且F1代小鼠均處于與F0 代小鼠相同的飼養(yǎng)環(huán)境，正常飲食、自由飲水。不對其進行跑臺運動，其正常生理、生活活動不予干預。飼養(yǎng)F1 代小鼠至9 周齡時，將小鼠禁食14～16小時，每組隨機取11～12只小鼠，測量體重及體長后，經(jīng)腹膜下注射水合氯醛溶液麻醉，摘眼球取血，同時立即分離股四頭肌組織、肝臟、腎周脂肪、附睪周脂肪，稱重后迅速置于液氮中速凍，后轉入－80°C 冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 ELISA 檢測血清IGF-1 水平

各組動物所留血樣，靜止30 分鐘后，4°C 離心（3000 rpm，15 分鐘）后提取上清。將0.1 ml 待檢血清加于已包被特異抗體的反應孔中，37°C 孵育1 小時后，加入0.1 ml 稀釋的酶標抗體，37°C 孵育1 小時，洗滌。在各反應孔中加入0.1 ml 的TMB 底物溶液以顯色，37°C孵育10～30分鐘。最后在各反應孔中加入2M 硫酸50 μl 以終止反應。檢測各孔OD 值，大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

1.5 Real-Time PCR 方法測定肝臟IGF-1 mRNA 的表達

Trizol法提取各組動物肝臟組織中的總RNA后，以總RNA 為模板，用First-Strand Synthesis System for RT-PCR 試劑盒（TaKaRa）來合成cDNA 第一鏈，按1∶9的比例用H2O稀釋合成的cDNA，所得稀釋cDNA為Real-time PCR 模板。Real-time PCR 反應按照SYBR Green Real-time PCR Master Mix 試劑盒的說明操作（Roche）?？偭?5 μl 的反應體系為：Supermix 12.5 μl，5’Primer 0.5μl，3’Primer 0.5 μl，cDNA 0.5 μl，ddH2O 11 μl。IGF-1 反應條件設定為：94°C 高溫變性2 min; 然后以94°C 1 min，55°C 30 s，72°C 30 s，共40個循環(huán)。所用引物由上海生工生物技術有限公司合成，GAPDH 為內參（見表1）。

表1 Real-Time PCR所用引物

1.6 MeDIP-qPCR 方法檢測肝組織中IGF-1 基因啟動子甲基化狀態(tài)

1.6.1 肝臟DNA提取及超聲處理

細胞裂解法提取肝臟DNA 后，用超聲法剪切DNA，剪切的DNA 長度應在200～1000 bp 之間，14，000 rpm 離心10分鐘后提取上清。

1.6.2 DNA 甲基化免疫共沉淀反應（MeDIP）

MeDIP 過程參照文獻[14]，簡述如下：將100 μl 片段DNA上清1∶1稀釋后加入抗-5-甲基胞嘧啶抗體，室溫下（22～25°C）孵育90～120 分鐘，然后加入與磁珠偶聯(lián)的IgG 抗體室溫下孵育60 分鐘。Input DNA 離心后取上清150 μl，免疫共沉淀DNA（immunoprecipitation DNA，IP DNA）用洗滌緩沖液清洗6 次后加入150 μl 1X TE 緩沖液溶解。將Input DNA 和IP DNA加入150 μl 90%乙醇，12000 rpm 離心30 秒，重復3次，最后加入溶解緩沖液，離心取上清，以備后續(xù)實驗。

1.6.3 Real-Time PCR

將上述提取的甲基化DNA 按1∶9 比例用H2O 稀釋，所得稀釋DNA 作為Real-time PCR 模板。Realtime PCR 反應按照SYBR Green Real-time PCR Master Mix 試劑盒的說明操作（Roche）。反應體系同上所述。啟動子1（P1）反應條件設定為：94°C 2 min，94°C 1 min，52°C 30 s，72°C 30 s，40 循環(huán)，啟動子2（P2）反應條件設定為：94°C 2 min，94°C 1 min，50°C 30 s，72°C 30 s，40 循環(huán)。儀器采用 Step one and Step one plus Real-Time PCR Systems（Applied Biosystems）。待測DNA 甲基化狀態(tài)可以通過Ct 值計算得到。計算公式為：%（MeDNA-IP/Total input）= 2^[（Ct（input）-Ct MeDNA-IP）] ×100。實驗所需引物由上海生工生物技術有限公司合成（見表1）。

1.7 Western Blot 檢測股四頭肌組織與內臟脂肪組織IGF-1與IGF-1R 蛋白表達

NP-40 法提取股四頭肌和內臟脂肪組織蛋白：每100 mg 組織加入裂解液500 μl，1×Protease Inhibitor 4 μl 和1× Phosphatase Inhibitor 4 μl，研磨器充分研磨組織，然后于4°C，12000 g 離心40 分鐘，取上清，BCA法測定蛋白濃度后轉置－80°C冰箱凍存?zhèn)溆谩?/p>

根據(jù)分子量的不同制備不同濃度的分離膠，積層膠均為5%，用微量加樣器加入樣品孔內等量的總蛋白，并于一側加樣孔內加入預染蛋白Marker 10 μl。使用Tris-甘氨酸SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳緩沖液（250 mmol/L 甘 氨 酸，25 mmol/L Tris-Base，0.1%SDS；pH 7.6），60 V 電壓下電泳30 分鐘后，再轉換成100 V 電壓電泳2 小時。采用濕法電轉?。ㄞD膜緩沖液：39 mmol/L 甘 氨 酸，48 mmol/L Tris- base，0.037% SDS，20% 甲醇；pH 8.3），30 V，2 小時。根據(jù)PVDF 膜上預染蛋白Marker 的轉移情況，判斷蛋白轉移情況。轉膜結束后，取出PVDF膜，用5%脫脂奶粉封閉1 小時后，用1×TBST 洗滌PVDF 膜，使用含5%BSA的抗體稀釋液分別稀釋一抗。4°C 孵育過夜。次日用1×TBST 洗膜3 次，每次5 分鐘；用5%脫脂奶粉溶液按照1∶10000 稀釋二抗，室溫孵育1 小時，再用1×TBST洗膜3次，每次5分鐘；最后用ECL反應液作為發(fā)光底物，于暗室內進行X 光膠片曝光，經(jīng)顯影、定影后觀察分析結果。

1.8 統(tǒng)計學方法

所有實驗數(shù)據(jù)由SPSS 統(tǒng)計軟件（SPSS13.0 for Windows）處理。采用獨立樣本t檢驗（Independentsamplesttest）；計算均值和標準差（±s），各組間差異性檢驗的顯著性水平定為P＜0.05。

2 結果

2.1 F1 代雄性小鼠生長指標分析

本實驗以F1雄性小鼠為對象，檢測的表型數(shù)據(jù)包括：體重、股四頭肌濕重、股四頭肌濕重/體重比。如表1所示，與CM 組小鼠進行對比，EM 小鼠的體重增加12.76%（CM：15.13± 2.08 g; EM：17.06± 1.37 g，P＜0.05），股四頭肌重量增加23.50% （CM：0.17±0.02 g; EM：0.21± 0.03 g，P＜0.05），股四頭肌濕重/體重（×100）增加9.73%（CM：1.13± 0.09; EM：1.24± 0.12，P＜0.05），內臟脂肪重量降低21.21%（CM：0.33± 0.05 g; EM：0.26± 0.03 g，P＜0.05）。

表1 運動組和對照組F1代雄性小鼠生長指標數(shù)據(jù)對比

2.2 F1 代雄性小鼠肝臟IGF-1基因的轉錄調控及表達結果

F1 代雄性小鼠血清中IGF-1 含量檢測結果如圖1A 所示，EM 組小鼠血清IGF-1 含量較CM 組增加73.15%（CM 組：1316.40± 180.13 ng/ml; EM 組：2279.34± 239.63 ng/ml，P＜0.01），表明父系6周有氧運動顯著增加子代血清中IGF-1的含量。

F1 代雄性小鼠肝細胞中IGF-1 mRNA 表達結果如圖1B 所示，EM 組雄性小鼠肝細胞中IGF-1 mRNA的表達較CM 組增加4.12 倍（P＜0.05）。這表明，父系6 周有氧跑臺運動顯著增加雄性子代肝細胞中IGF-1 mRNA的表達。

圖1 F1代雄性小鼠血清IGF-1和肝臟IGF-1 mRNA水平

2.3 肝細胞中IGF-1基因啟動子甲基化水平

IGF-1基因含有兩個啟動子，F(xiàn)1 代小鼠肝細胞中IGF-1 甲基化水平檢測結果如圖2所示，EM 組小鼠肝細胞中P1、P2 甲基化水平較CM 組分別降低38.78%（P＜0.05）和52.80%（P＜0.01）。由此可見，父系6 周有氧運動顯著降低了雄性子代肝細胞中IGF-1基因啟動子甲基化水平。

圖2 F1代雄性小鼠肝臟IGF-1啟動子P1和P2的甲基化水平

2.4 F1代雄性小鼠骨骼肌組織與脂肪組織中IGF-1與IGF-1R蛋白表達水平

F1 代雄性小鼠骨骼肌細胞中IGF-1、IGF-1R 蛋白表達結果如圖3所示，EM 組小鼠骨骼肌細胞中IGF-1、IGF-1R 蛋白的表達較CM 組分別增加83.5%和41.2%（P＜0.05）。EM 組內臟脂肪細胞中IGF-1、IGF-1R 蛋白的表達與其骨骼肌細胞中的表達變化趨勢基本一致。如圖4所示，EM組小鼠內臟脂肪組織中IGF-1蛋白表達較CM組升高1.36倍（P＜0.05）；IGF-1R蛋白表達較CM 組升高87.3%（P＜0.05）。上述結果表明，父系6周有氧運動可顯著促進子代骨骼肌組織與脂肪組織中IGF-1、IGF-1R蛋白的表達。

圖3 F1代雄性小鼠股四頭肌中IGF-1和IGF-1R的蛋白表達水平

圖4 F1代雄性小鼠內臟脂肪中IGF-1和IGF-1R的蛋白表達水平

3 討論

本研究主要探究父系6周跑臺運動對子代雄性小鼠IGF-1 表達及其甲基化的影響，通過有氧運動干預雄性C57BL/6 小鼠，采用生長指標的檢測等方法研究其子代（F1）小鼠生長發(fā)育的差異，采用分子生物學技術分析子代（F1）小鼠生長發(fā)育產生差異的分子機理。本實驗結果表明，父系6 周有氧跑臺運動可促進子代雄性小鼠體重及股四頭肌的增加，并可降低內臟脂肪組織的堆積。在分子層面上，父系6 周有氧跑臺運動可降低子代雄性小鼠肝細胞IGF-1基因的甲基化水平，增加子代血清中IGF-1含量及肝細胞IGF-1 的mRNA 水平，并增加子代股四頭肌和內臟脂肪組織中IGF-1 和IGF-1R 的蛋白表達水平，提示父系6 周有氧跑臺運動通過降低IGF-1 啟動子甲基化而增強IGF-1轉錄及表達，從而促進子代雄性小鼠的生長發(fā)育。

3.1 父系6 周有氧跑臺運動對子代雄性小鼠生長發(fā)育的影響

本實驗結果表明，EM組雄性小鼠的體重及股四頭肌重量顯著高于CM 組，然而其內臟脂肪組織重量卻顯著低于CM 組（表1）。骨骼肌約占全身重量的40%以上，它不僅在機體運動過程中發(fā)揮著重要作用，還在維持機體能量代謝平衡過程中起著關鍵作用[15]。骨骼肌組織具有高度的可塑性，其生長發(fā)育受到多種因素的影響。而規(guī)律的有氧運動，不僅可加快機體能量代謝、改善機體糖、脂代謝紊亂，而且還可調控骨骼肌的生長發(fā)育。此外，脂肪組織不僅可以儲存能量，它還可以分泌多種因子調控機體生長及代謝，內臟脂肪組織可以釋放大量細胞因子及游離脂肪酸，其代謝功能更強。研究發(fā)現(xiàn)，規(guī)律的有氧運動可以有效地促進脂肪酸的分解，降低體脂含量并改善與肥胖相關的代謝性疾病[2]。而我們的前期研究也表明，高脂飲食/有氧運動干預父代C57BL/6 小鼠能影響雄性子代的糖、脂代謝，且該影響僅見于雄性后代[11]。因此，我們的結果提示6周跑臺運動通過增加骨骼肌組織重量并降低內臟脂肪組織重量而促進子代雄性小鼠的生長發(fā)育。

3.2 父系6 周有氧跑臺運動對子代小鼠肝細胞IGF-1轉錄調控及表達水平的影響

IGF-1是一種由70個氨基酸組成的單鏈多肽激素蛋白，其結構與胰島素相似，是一種具有促進生長作用的內分泌因子[3，16]。血液循環(huán)系統(tǒng)中的IGF-1主要是由肝細胞產生分泌的，而肝細胞中的IGF-1 是在生長激素（growth hormone，GH）刺激下誘導完成的，GH對機體的作用主要由IGF-1 介導完成，形成GH/IGF-1 軸[17]。骨骼肌等組織也可以自分泌或旁分泌產生IGF-1，但是，組織中的IGF-1 mRNA 表達來自組織細胞本身的基因，與血液循環(huán)系統(tǒng)無關。研究發(fā)現(xiàn)，IGF-1可通過增加骨骼肌細胞蛋白質合成、加快肌纖維生長、刺激肌纖維增殖分化而促進骨骼肌損傷修復[4]。其他研究也表明，GH 促進骨骼肌的生長是通過肝組織產生IGF-1介導的[18]，但是運動是否能調控IGF-1的轉錄及表達從而調控骨骼肌生長則尚無定論。本研究結果表明，EM 組小鼠血清中IGF-1 含量及肝細胞中IGF-1 的轉錄水平都顯著高于CM 組（圖1），這說明父系6 周有氧跑臺運動能增加子代雄性小鼠肝臟中IGF-1的轉錄及表達。另一方面，相比于CM 組，本實驗中EM 組小鼠股四頭肌重量與濕重比分別增加23.50%、9.73%，內臟脂肪重量降低21.21%。綜合EM 組IGF-1 的轉錄及表達的增加，這提示子代小鼠骨骼肌重量的增加、內臟脂肪組織含量的降低與IGF-1 含量增加密切相關，父系6 周有氧跑臺運動能增加子代小鼠IGF-1 的表達水平從而促進子代小鼠骨骼肌的生長。

3.3 父系6 周有氧跑臺運動對子代雄性小鼠肝細胞IGF-1基因啟動子甲基化水平的影響

基因啟動子區(qū)的甲基化是DNA 甲基化修飾的重要組成部分，研究發(fā)現(xiàn)基因啟動子甲基化能引起啟動子區(qū)與蛋白質相互作用方式的改變，從而影響基因表達[6]。由環(huán)境因素和運動干預引起的DNA 甲基化水平的改變可能是代謝及生長發(fā)育過程中的一種重要調節(jié)因素[7]。IGF-1作為一種調控機體生長的內分泌因子，其基因的轉錄由兩個啟動子（P1與P2）調控，雖然運動能影響很多基因的甲基化修飾，但是有關運動能否調控IGF-1 啟動子的甲基化卻鮮有報道。在本實驗中，EM組小鼠肝細胞中P1、P2甲基化水平較CM組分別降低38.78%（P＜0.05）和52.80%（P＜0.01）（圖2），鑒于子代雄性小鼠肝臟中IGF-1的轉錄和蛋白表達水平增加（圖1），這表明父系6周有氧跑臺運動通過降低子代雄性小鼠肝臟中IGF-1兩個啟動子的甲基化水平從而增加了IGF-1基因的表達水平。

3.4 父系6 周有氧跑臺運動對子代雄性小鼠骨骼肌與脂肪組織中IGF-1與IGF-1R蛋白表達的影響

如前所述，IGF-1在促進骨骼肌生長及重塑方面有重要作用[4，18]。近年研究也表明，限制飲食后骨骼肌纖維大小降低與IGF-1/IGF-1R 信號通路有關[19]。此外，IGF-1/IGF-1R 信號通路還能調節(jié)脂肪細胞分化和體脂沉積，從而改善脂肪代謝[16]。但是關于運動是否能影響骨骼肌與脂肪組織中的IGF-1/IGF-1R 信號通路則不是十分明確。我們的研究結果顯示，EM組小鼠其股四頭肌和內臟脂肪組織中的IGF-1/IGF-1R 表達均比CM 組顯著增高（圖3，圖4），表明父系6 周跑臺運動能增強子代雄性小鼠骨骼肌和脂肪組織中的IGF-1/IGF-1R 信號通路，而EM 組小鼠股四頭肌組織重量的增加與內臟脂肪組織重量的下降可能與此有關。

3.5 6 周有氧運動對父代本身的影響通過遺傳因素作用于子代

許多研究已經(jīng)證明[20-23]，運動能顯著增加IGF-1的基因及蛋白表達水平。Eliakim 等的結果更是表明[21]，在同等運動條件下的男性與女性相比，男性血液中IGF-1的表達在運動后顯著增加，提示性別對運動影響IGF-1水平的作用。在我們的實驗中，考慮到雄性性染色體-Y 染色體在性別遺傳中的重要因素并為了探究父系運動對子代的影響，我們選擇F1代雄性小鼠作為研究對象。如本研究結果所示，F(xiàn)1 代EM 組小鼠與CM組相比，其肝細胞IGF-1啟動子甲基化水平降低從而增加了IGF-1的基因及蛋白表達水平，且EM組小鼠體重及股四頭肌重量均顯著增加，骨骼肌及脂肪組織中的IGF-1/IGF-1R 信號通路增強，這表明IGF-1 的表達增加促進了F1代EM組小鼠的骨骼肌生長發(fā)育。由于F1小鼠自出生后就一直處于安靜的條件下飼養(yǎng)，無論EM 組還是CM 組，在其成長的9 周內均未對其進行跑臺運動干預。因此EM 組相比CM 組如此顯著的表型變化只能是來自于先天遺傳物質的改變，即F0代的遺傳因素。鑒于運動能直接增加父代IGF-1的表達水平[22]，我們的結果表明了F1 代EM 組的表型遺傳于F0代E組所受的6周父系有氧運動，性別遺傳中的Y染色體遺傳在運動介導IGF-1 啟動子甲基化水平降低、促進IGF-1基因表達從而促進生長發(fā)育方面具有重要作用。

本研究通過探討6周父系有氧運動對子代雄性小鼠IGF-1甲基化水平及IGF-1表達水平的影響，驗證了有氧運動可以通過降低IGF-1 甲基化水平從而促進IGF-1的基因和蛋白表達，進而促進骨骼肌生長并減少內臟脂肪組織的含量，因此本實驗解決了運動能否影響IGF-1甲基化水平的問題。而在父系有氧運動介導IGF-1表達過程中，本實驗結果表明遺傳因素起到了重要作用，父系有氧運動干預通過遺傳物質的改變來影響子代的表型，這是本實驗的創(chuàng)新之處。然而，本實驗也存在不足之處。運動促進機體生長發(fā)育的因素十分復雜，除了通過影響IGF-1的表達外，運動還影響許多其他生長因子及信號通路。限于條件有限，本研究僅以IGF-1 為切入點。因此，在未來探究運動影響機體生長發(fā)育的研究中，除了關注IGF-1 這個已知的信號通路節(jié)點，研究者還應關注其他影響機體生長發(fā)育的信號通路，如mTOR 信號通路及AMPK 信號通路等。另一方面，未來探究遺傳因素在介導運動促進生長發(fā)育的研究中，研究者可以具體從Y染色體的形態(tài)變化、基因改變等方面入手去探討Y染色體如何具體承載父系運動干預對子代的影響，以期在遺傳水平上做出深入揭示。

4 結論

在個體水平上，6周有氧運動干預父系小鼠增加了子代雄性小鼠骨骼肌重量，降低內臟脂肪組織重量，促進子代雄性小鼠的生長發(fā)育。在分子水平上，6周有氧運動干預父系小鼠增加了子代雄性小鼠骨骼肌、內臟脂肪組織中IGF-1/IGF-1R的蛋白表達，增加了子代雄性小鼠肝臟IGF-1的轉錄及蛋白表達，但降低了IGF-1啟動子的甲基化水平。提示父系6周有氧跑臺運動通過降低肝臟IGF-1 的P1、P2 甲基化水平而增加其基因轉錄及其在骨骼肌、內臟脂肪中的蛋白表達，從而顯著促進子代雄性小鼠骨骼肌組織生長并減少其內臟脂肪堆積，從而促進子代雄性小鼠的生長發(fā)育。