噬菌體療法及其在美洲幼蟲(chóng)腐臭病中的研究進(jìn)展

董志祥， 羅智文， 張棋麟， 郭 軍

(昆明理工大學(xué) 生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，云南 昆明 650500)

植物大多是通過(guò)昆蟲(chóng)進(jìn)行傳粉的，而在傳粉昆蟲(chóng)中，蜜蜂扮演了重要的角色，特別是西方蜜蜂(Apismellifera)，是全球范圍內(nèi)最具有經(jīng)濟(jì)價(jià)值的傳粉昆蟲(chóng)[1]。然而，蜜蜂的生存受到了嚴(yán)重的威脅，如病毒、細(xì)菌、真菌、寄生蟲(chóng)等，它們的出現(xiàn)給蜜蜂的健康造成了巨大的威脅。在小蜂螨(Tropilaclapsclareae)這一寄生蟲(chóng)未被發(fā)現(xiàn)之前，威脅蜜蜂最嚴(yán)重的細(xì)菌病是美洲幼蟲(chóng)腐臭病(American foulbrood disease，AFB)，現(xiàn)仍是蜜蜂中最嚴(yán)重的病害之一。在許多國(guó)家，AFB是需要呈報(bào)當(dāng)?shù)卣募膊?，其?yīng)對(duì)措施有相應(yīng)的法律規(guī)定[2]。AFB是對(duì)養(yǎng)蜂業(yè)最具破壞性的一種細(xì)菌病，也是導(dǎo)致全球蜜蜂數(shù)量下降的主要原因之一[3]。AFB是因感染幼蟲(chóng)芽胞桿菌(Paenibacilluslarvae)而引起的，由工蜂從環(huán)境中攜帶進(jìn)入蜂房，或者由同一蜂場(chǎng)的蜜蜂相互傳染而引起[4]。當(dāng)感染發(fā)生時(shí)，孢子萌發(fā)并殺死蜜蜂幼蟲(chóng)，導(dǎo)致幼蟲(chóng)液化，產(chǎn)生一種黏性的充滿(mǎn)孢子的液體。這種疾病會(huì)在蜂房?jī)?nèi)迅速傳播，如果不能及時(shí)進(jìn)行有效的治療，就可能導(dǎo)致整個(gè)蜂群崩潰[5]?，F(xiàn)階段通常使用氧四環(huán)素和酒石酸泰洛辛等抗生素來(lái)預(yù)防和治療AFB感染。然而，抗生素的使用帶來(lái)了更多嚴(yán)峻的問(wèn)題，長(zhǎng)期使用抗生素，導(dǎo)致許多野生型幼蟲(chóng)芽胞桿菌對(duì)氧四環(huán)素產(chǎn)生了耐藥性[6-8]。此外，在2006年的一項(xiàng)研究中，采集的幼蟲(chóng)芽胞桿菌樣品中有58%對(duì)氧四環(huán)素產(chǎn)生了耐藥性[9],導(dǎo)致其療效顯著降低，不能有效地治療AFB。同時(shí)，有文獻(xiàn)報(bào)道了抗生素的使用破壞了蜜蜂腸道菌群的動(dòng)態(tài)平衡，使感染真菌的風(fēng)險(xiǎn)增加，如微孢子蟲(chóng)[10]。因此，迫切需要加快對(duì)抗生素替代技術(shù)的研發(fā)，而噬菌體治療作為抗生素的替代技術(shù)備受廣大科研工作者的重視[11]。本文綜述了噬菌體療法的應(yīng)用前景，并重點(diǎn)介紹了在美洲幼蟲(chóng)腐臭病中的研究，并且展望了今后的研究方向。

1 幼蟲(chóng)芽胞桿菌的致病機(jī)理

美洲幼蟲(chóng)腐臭病只發(fā)生在蜜蜂的幼蟲(chóng)階段，AFB的病原體是幼蟲(chóng)芽胞桿菌(P.larvae)，為革蘭陽(yáng)性菌，其孢子能萌發(fā)為細(xì)菌[12]。其內(nèi)生孢子生命極其頑強(qiáng)，是其傳染的唯一形式，且對(duì)幼蟲(chóng)的傳染性極強(qiáng)，但對(duì)成年工蜂卻沒(méi)有嚴(yán)重的危害[13]。剛剛孵化的蜜蜂幼蟲(chóng)最容易遭受感染，在孵化后的12～36 h內(nèi)，幼蟲(chóng)因食用被P.larvae污染過(guò)的食物(大約只需要10個(gè)孢子)，即可誘發(fā)致命的感染[14-16]。Davidson等[17]的研究表明，營(yíng)養(yǎng)型的孢子通過(guò)吞噬作用立即穿過(guò)中腸的上皮細(xì)胞，孢子萌發(fā)后主要在血腔增值。但Yue等[18]利用P.larvae的特異性16S rRNA探針，通過(guò)熒光原位雜交技術(shù)證明了Davidson等人的結(jié)論是錯(cuò)誤的,并已證實(shí)營(yíng)養(yǎng)型孢子寄生于中腸，并在中腸大量增殖，且沒(méi)有破壞中腸組織的完整性。當(dāng)幼蟲(chóng)受到P.larvae感染時(shí)，P.larvae以幼蟲(chóng)攝入的食物為食，并與幼蟲(chóng)以共生的方式存活。P.larvae通過(guò)糖酵解途徑(Emden-Meyerhoff-Parnas，EMP途徑)中的活性酶、磷酸戊糖途徑以及與碳水化合物代謝相關(guān)的ED(Entner-Doudoroff，ED)途徑，代謝葡萄糖、果糖等糖類(lèi)，以獲得生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)[19]。受到感染的幼蟲(chóng)，其腹膜后膜有助于保持中腸腔內(nèi)的細(xì)菌數(shù)量，雖然P.larvae能穿透該保護(hù)層[18,20]，當(dāng)幼蟲(chóng)腸道大量充滿(mǎn)這些致病細(xì)菌時(shí),在感染的后期則會(huì)攻擊上皮細(xì)胞，使上皮細(xì)胞破裂。P.larvae通過(guò)細(xì)胞外間隙進(jìn)入血腔，它們也在細(xì)胞外間隙生活(遷移和增殖)。在幼蟲(chóng)生長(zhǎng)和感染的過(guò)程中，最明顯的特征是分泌高度活躍的細(xì)胞外蛋白酶[21-23]。很容易推測(cè)，這些蛋白酶的作用可能是通過(guò)降解細(xì)胞-細(xì)胞或細(xì)胞-基質(zhì)的連接結(jié)構(gòu)從而破壞上皮細(xì)胞屏障的完整性，使P.larvae侵入血腔。P.larvae進(jìn)一步需要分泌蛋白酶來(lái)降解被其侵染的幼蟲(chóng)，使幼蟲(chóng)變成棕色、半流體、膠狀膠體(黏稠階段)。這兩種過(guò)程對(duì)P.larvae來(lái)說(shuō)都至關(guān)重要，因?yàn)樗仨氃谔幱跔I(yíng)養(yǎng)階段以某種方式逃離幼蟲(chóng)的外殼，以確保孢子形成后能夠自由進(jìn)出，以便在蜂群中傳播，并被下一個(gè)宿主吞食。被侵染的幼蟲(chóng)逐漸干燥，就像“鱗片”一樣緊緊附著在細(xì)胞壁上。這些“鱗片”含有數(shù)以百萬(wàn)計(jì)的孢子，具有較強(qiáng)傳染性，這些孢子使AFB在蜂群內(nèi)部和蜂群間傳播[24-25]。孢子的感染能力可持續(xù)35年之久，并且能夠抵抗高溫、高寒、高濕的環(huán)境。正是由于孢子極強(qiáng)的抗逆性以及患病蜂群中存在極高數(shù)量的孢子，導(dǎo)致AFB的預(yù)防及治療變得異常困難。到目前為止，AFB已經(jīng)被認(rèn)為是蜜蜂中最致命的病害之一，其不僅在群體內(nèi)水平傳播，更嚴(yán)重的是還能在群體之間垂直傳播[26]，所以預(yù)防及治療AFB的新技術(shù)迫在眉睫。

2 噬菌體療法

2.1 噬菌體療法概述

自抗生素被發(fā)現(xiàn)以來(lái)，由于濫用，導(dǎo)致了細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性并不斷漫延[27]。耐藥菌的出現(xiàn)不僅危害動(dòng)植物健康[28]，而且目前還沒(méi)有有效的手段對(duì)其導(dǎo)致的感染進(jìn)行治療，烈性噬菌體具有代替抗生素的潛力。這使得更多相關(guān)的研究者關(guān)注噬菌體療法。噬菌體是感染細(xì)菌的病毒，只要細(xì)菌宿主存在，它便存在于任何環(huán)境中，在許多生命過(guò)程中扮演著重要的角色，被看做是地球上最豐富的生物[29]。大多數(shù)噬菌體(目前已經(jīng)確定的96%)按照以下分類(lèi)方法進(jìn)行分類(lèi)，有尾噬菌體目有尾且含有雙鏈DNA分子，在同一家族中進(jìn)一步分為長(zhǎng)尾噬菌體科、肌尾噬菌體科和短尾噬菌體科[30]。

與抗生素相比，噬菌體療法的優(yōu)勢(shì)在于具有在宿主菌體內(nèi)增殖的能力[31-32]，且具有高度的專(zhuān)一性，只對(duì)少數(shù)菌株有裂解活性[33]，因此它們對(duì)環(huán)境中的共生微生物群是無(wú)害的[34]，且噬菌體只有在宿主存在時(shí)才能存活，當(dāng)所有宿主都被裂解后，噬菌體就會(huì)自動(dòng)被清除[35]。噬菌體的使用方法也比較多樣，既可以使用單一噬菌體，還可以和其他噬菌體混合使用以擴(kuò)大裂解范圍[11]。此外，噬菌體可以根據(jù)不斷進(jìn)化的細(xì)菌對(duì)自身進(jìn)行修飾，從而繼續(xù)感染和裂解病原菌，并具有裂解耐藥菌的能力[36]。

2.2 噬菌體制劑的選擇與制備

噬菌體療法與抗生素的抑菌效果相比，其應(yīng)用價(jià)值被低估了，主要原因是噬菌體制劑的選擇、制備以及儲(chǔ)存不當(dāng)[37-38]。噬菌體來(lái)源廣泛，根據(jù)治療目的，可從與病原體相關(guān)的環(huán)境中分離相對(duì)應(yīng)噬菌體，污水可能是最豐富的噬菌體來(lái)源[39]。對(duì)于與醫(yī)院環(huán)境或與臨床相關(guān)的病原菌來(lái)說(shuō)，與其環(huán)境直接接觸的廢水或污水中更容易分離得到噬菌體[40]。從技術(shù)角度上講，分離噬菌體最直接的方法是雙層瓊脂法，將環(huán)境樣品與宿主菌按照不同比例在半固體培養(yǎng)基中混合，然后將其置于宿主菌株選擇性培養(yǎng)基內(nèi)，鑒定是否形成噬菌斑，該噬菌斑即是宿主相對(duì)應(yīng)的噬菌體[37]。噬菌體對(duì)不同的細(xì)菌菌株敏感性可能不一樣，因此，可以通過(guò)增加噬菌體制劑侵染宿主的范圍提高其治療效率[41]。此外，為了擴(kuò)大噬菌體療法的裂解譜，可將多種噬菌體制劑混合，稱(chēng)之為噬菌體雞尾酒[42]。噬菌體在給藥部位的存活率對(duì)療效十分重要，為解決這一難題，可通過(guò)選擇裂解周期長(zhǎng)的噬菌體或者通過(guò)修飾噬菌體的免疫原性來(lái)減少它們被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)細(xì)胞的清除作用[41]。

為了保證噬菌體療法的安全性，任何噬菌體治療產(chǎn)品都必須按照藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范(GMP)生產(chǎn)，其相關(guān)規(guī)則對(duì)生產(chǎn)過(guò)程(滅菌和純化)的要求非常嚴(yán)格。因此，有必要對(duì)噬菌體裂解物進(jìn)行過(guò)濾和離心，以便將噬菌體純化。對(duì)于革蘭陰性菌的溶出物，需要更徹底地純化來(lái)去除細(xì)菌內(nèi)毒素。此外，在使用管理應(yīng)用程序時(shí)，需要更加嚴(yán)格的凈化過(guò)程[43]。一旦生產(chǎn)，噬菌體制劑應(yīng)妥善儲(chǔ)存。噬菌體由蛋白質(zhì)組成，因此容易受到高溫、pH、有機(jī)化合物等因素影響，隨著包裝技術(shù)的發(fā)展，噬菌體的儲(chǔ)存技術(shù)也得到了很好地改善[44]。為保證噬菌體療法的有效性，噬菌體必須被運(yùn)送到理想的作用位點(diǎn)并保持較長(zhǎng)時(shí)間的治療水平。噬菌體有多種給藥方式，包括腸內(nèi)、外用、吸入或注射等，腸內(nèi)給藥是目前最常見(jiàn)的一種方式[45]。每個(gè)病原菌細(xì)胞大約需要10個(gè)或更多噬菌體病毒侵染，考慮到這一點(diǎn)，需要噬菌體滴度達(dá)到108/mL，才能使病原菌數(shù)量顯著降低，盡管這個(gè)估計(jì)并沒(méi)有考慮感染部位噬菌體的自我復(fù)制[46]。當(dāng)前噬菌體治療產(chǎn)品的藥物調(diào)節(jié)通路尚不清楚，需要一個(gè)適應(yīng)的框架才能將噬菌體治療推上一個(gè)新的臺(tái)階[47]。

2.3 噬菌體治療的安全性和有效性

關(guān)于噬菌體療法的安全性，普遍觀點(diǎn)認(rèn)為使用是安全的，主要根據(jù)它們?cè)诃h(huán)境中廣泛存在的性質(zhì)和我們不斷接觸到它們的事實(shí)，此外，并沒(méi)有相關(guān)有害事件的報(bào)道。盡管噬菌體療法的有效性報(bào)道屢見(jiàn)不鮮，但其使用的安全性也必須通過(guò)現(xiàn)代科學(xué)實(shí)驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證[48]。噬菌體的安全性問(wèn)題可以歸結(jié)為對(duì)機(jī)體組織和其他非靶向微生物群的影響，它們能夠具有通過(guò)表達(dá)毒性基因或通過(guò)在細(xì)菌之間轉(zhuǎn)導(dǎo)DNA來(lái)改變細(xì)菌靶點(diǎn)的能力，以及誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的潛力[49]。另一個(gè)有關(guān)噬菌體療法的安全性和有效性的重要問(wèn)題是機(jī)體組織對(duì)噬菌體治療的免疫反應(yīng)，這包括適應(yīng)性和先天免疫反應(yīng)[50]，但并沒(méi)有關(guān)于噬菌體治療引起過(guò)敏反應(yīng)的報(bào)道[49,51]。此外，噬菌體在生產(chǎn)過(guò)程中還有可能產(chǎn)生內(nèi)毒素，可以通過(guò)過(guò)濾純化得到噬菌體純?nèi)芤?。噬菌體是具有高度特異性的病毒，對(duì)正常的腸道菌群影響極小，因?yàn)樗鼈兺ǔＶ涣呀庖环N細(xì)菌的少數(shù)菌株[52]。迄今噬菌體治療已進(jìn)行了少量的I，II期臨床試驗(yàn)，Vandenheuvel等[53]在一篇綜述文章中指出，噬菌體療法并沒(méi)有帶來(lái)明顯的不良反應(yīng)。所以，噬菌體治療的安全性得到了有利的證明。

噬菌體治療的實(shí)施還面臨著另一個(gè)嚴(yán)峻的問(wèn)題，即噬菌體制劑的生產(chǎn)過(guò)程，因?yàn)橄啾瓤股叵嚓P(guān)產(chǎn)品的監(jiān)管規(guī)則而言，對(duì)噬菌體制劑的要求似乎更嚴(yán)格[54]。Goman等[55]的研究表明，對(duì)抗生素產(chǎn)生強(qiáng)耐藥性的細(xì)菌，噬菌體能夠通過(guò)裂解宿主菌而有效的抑制其生長(zhǎng)。由于耐甲氧西林和萬(wàn)古霉素的金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)的出現(xiàn)，使抗生素治療效果越來(lái)越差，幸運(yùn)的是，不斷有新的臨床證據(jù)支持噬菌體療法用于對(duì)抗人類(lèi)嚴(yán)重的金黃色葡萄球菌感染是安全有效的[40]，如噬菌體φ812，它能夠以沙門(mén)氏菌為宿主菌進(jìn)行裂解[56]。目前，抗生素的濫用已導(dǎo)致其療效越來(lái)越差，而新的抗菌藥物研發(fā)緩慢，因此，對(duì)噬菌體治療相關(guān)產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)顯得尤為重要[57-58]。

2.4 噬菌體療法的相關(guān)研究

噬菌體作為細(xì)菌的“寄生蟲(chóng)”，在動(dòng)植物的安全與健康中發(fā)揮著重要的作用。金黃色葡萄球菌是奶牛感染乳腺炎的主要病原菌之一，牛乳腺炎給奶農(nóng)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。Ganaie等[59]使用SAJK-IND和MSP兩種噬菌體的混合液顯著抑制了金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)，為奶牛牛乳腺炎的治療帶來(lái)了希望。導(dǎo)致食源性疾病感染和爆發(fā)的主要原因是沙門(mén)氏菌污染新鮮農(nóng)產(chǎn)品，Bai等[60]利用噬菌體雞尾酒(BSPM4,BSP101和BSP22A)作為天然的抗菌劑控制食源性病原體。Abedon等人通過(guò)小鼠感染亞胺硫霉素建立耐藥敗血癥模型，結(jié)果表明在小鼠中即使延遲給藥3 h，腹腔內(nèi)注射噬菌體[46]都可以挽救小鼠的敗血癥[61]。此外，Watanabe等[62]指出噬菌體療法可以顯著降低銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)引起的小鼠腸源性膿毒癥的發(fā)病率。在小鼠模型中，應(yīng)用噬菌體滴眼液，通過(guò)去除銅綠假單胞菌治療銅綠假單胞菌性角膜炎，效果顯著[63]。在小鼠燒傷模型中，噬菌體的局部應(yīng)用已被證明是治療肺炎克雷伯菌(Klebsiellapneumoniae)感染的有效方法[64]。類(lèi)似結(jié)果也出現(xiàn)在革蘭陽(yáng)性菌的研究中，例如噬菌體療法對(duì)小鼠糞便中萬(wàn)古霉素耐藥屎腸球菌(Enterococcusfaecium)[65]、糞腸球菌(Enterococcusfaecalis)的敗血癥模型也表現(xiàn)出較好的治療效果[66]。同樣，噬菌體治療金黃色葡萄球菌(包括耐甲氧西林金黃色葡萄球菌)的研究表明，動(dòng)物模型在感染和預(yù)防膿腫形成方面顯示出積極的效果[67]，防治敗血癥和慢性骨髓炎也有顯著的作用[68-70]。噬菌體療法在動(dòng)、植物的細(xì)菌性疾病中已得到廣泛的應(yīng)用，表1列出最近噬菌體在治療各類(lèi)細(xì)菌病中取得的研究進(jìn)展。

表1 噬菌體療法在各種病原菌中的應(yīng)用

2.5 噬菌體療法在美洲幼蟲(chóng)腐臭病防治中的應(yīng)用

美洲幼蟲(chóng)腐臭病是蜜蜂中最嚴(yán)重的細(xì)菌病之一，防止病原菌P.larvae的感染是治療這一病害的關(guān)鍵[3]。目前，利用噬菌體治療美洲幼蟲(chóng)腐臭病取得了較大的進(jìn)展，已分離的部分噬菌體對(duì)幼蟲(chóng)芽胞桿菌具有一定的裂解能力[79]。Brady等[80]于野外分離了59株P(guān).larvae，用實(shí)驗(yàn)室分離的39株噬菌體去侵染這些P.larvae，選擇3株裂解能力最強(qiáng)的噬菌體混合并在蜂箱中進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明，噬菌體混合液能夠預(yù)防并治療美洲幼蟲(chóng)腐臭病，困擾大家多年的AFB問(wèn)題終于得到了初步的解決。這也是繼抗生素之后最有效的治療美洲幼蟲(chóng)腐臭病的手段，也是安全性最高、對(duì)蜜蜂傷害最小的治療方法。在噬菌體治療未引入AFB的治療與預(yù)防之前，只能使用傳統(tǒng)的抗生素進(jìn)行治療，隨著細(xì)菌耐藥性的增加，治療效果不斷降低，已不能有效地控制AFB的傳染及擴(kuò)散；此外，抗生素對(duì)蜜蜂危害極其嚴(yán)重，會(huì)導(dǎo)致蜜蜂腸道菌群紊亂，致使蜜蜂群勢(shì)不斷下降[10]。因此，噬菌體在AFB中的應(yīng)用具有重要意義，不僅能夠控制該細(xì)菌病的擴(kuò)散與爆發(fā)，還能從根本上解決耐藥性問(wèn)題；同時(shí)，對(duì)蜜蜂中其他細(xì)菌病的預(yù)防及控制也有重要的指導(dǎo)意義，例如蜜蜂中的副傷寒疾病也有了新的防控方法[81]。歐洲幼蟲(chóng)腐臭病是我國(guó)東方蜜蜂中最嚴(yán)重的細(xì)菌病，發(fā)病比較普遍，而西方蜂種較少發(fā)生[82]，目前還沒(méi)有噬菌體療法在歐洲幼蟲(chóng)腐臭病中應(yīng)用的報(bào)道，由于噬菌體療法的安全性及高效性，采用噬菌體療法治療各類(lèi)蜜蜂細(xì)菌病將是一個(gè)新的研究方向。

3 展 望

噬菌體作為傳統(tǒng)抗生素的替代品，用于預(yù)防或治療美洲幼蟲(chóng)腐臭病已經(jīng)得到了證實(shí)[80]。為替代抗生素，廣泛使用噬菌體治療AFB打下了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。越來(lái)越多的報(bào)道證明了噬菌體療法具有特異性強(qiáng)、抑菌效果顯著的特點(diǎn)，然而在蜜蜂及其他重要經(jīng)濟(jì)昆蟲(chóng)中的應(yīng)用研究還比較少，研究較多的主要集中在哺乳動(dòng)物中病原菌的防治與應(yīng)用上。Brady等[80]在蜜蜂AFB的預(yù)防和治療研究中，采用噬菌體療法大大推進(jìn)了這一技術(shù)在傳粉昆蟲(chóng)中的應(yīng)用，并為今后的害蟲(chóng)防治提供了新的思路。但目前這一技術(shù)還停留在實(shí)驗(yàn)室階段，要在全球養(yǎng)蜂行業(yè)中得到推廣還需要克服一些技術(shù)上的難題。

Brady等[80]將噬菌體混合液直接加入蜜蜂的飼喂盒中，以達(dá)到預(yù)防及治療的目的。由于噬菌體本身也是蛋白質(zhì)，隨著時(shí)間的推移，其裂解活性、濃度都會(huì)有所下降，而噬菌體的滴度只有達(dá)到108，才能達(dá)到最好的裂解效果[46]。所以噬菌體的保存方法、包裝、運(yùn)輸條件，以及給藥劑型都需要重新設(shè)計(jì)，以達(dá)到噬菌體治療的最大效率[44]。噬菌體侵入宿主細(xì)胞后，會(huì)表達(dá)出裂解酶，裂解細(xì)菌細(xì)胞壁，尤其對(duì)革蘭陽(yáng)性菌的裂解效果最佳。P.larvae是革蘭陽(yáng)性菌，但目前未見(jiàn)噬菌體裂解酶預(yù)防及治療AFB的文獻(xiàn)報(bào)道，但很多研究已證實(shí)了裂解酶的裂解效果，如噬菌體LKA1尾尖的特異性多糖裂解酶可降低假單胞菌的毒性[83]。因此，可以利用工程菌表達(dá)出對(duì)P.larvae有裂解活性的裂解酶，不僅抑菌效果顯著，其儲(chǔ)存方式和使用方法也簡(jiǎn)單方便，這也將是一個(gè)新的治療領(lǐng)域與研究方向。

噬菌體治療受到廣泛關(guān)注的另一個(gè)原因是其高度的特異性，與廣譜殺菌的抗生素相比，它僅僅只針對(duì)其裂解的病原菌，對(duì)腸道內(nèi)的益生菌并沒(méi)有危害。當(dāng)蜂場(chǎng)感染AFB時(shí)，抗生素不能有效治愈，必須燒掉蜂箱，以防止繼續(xù)擴(kuò)散。這給蜂農(nóng)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，替代傳統(tǒng)抗生素的技術(shù)急需盡快研發(fā)。噬菌體作為抗生素最好的替代品，在蜜蜂AFB中的使用已經(jīng)初見(jiàn)成效，但其裂解譜較窄，使用的方法復(fù)雜。此外，其儲(chǔ)存及其運(yùn)輸方式還需要深入研究。在蜜蜂中，還有許多其他危害蜜蜂的病原菌，也同樣可以篩選出相對(duì)應(yīng)的噬菌體進(jìn)行治療。

隨著抗生素療效的不斷降低及導(dǎo)致的副作用越來(lái)越多，人們對(duì)噬菌體療法又產(chǎn)生了濃厚的興趣[84]。利用噬菌體對(duì)病原菌高度專(zhuān)一的裂解性，不僅可以有效地控制病原菌帶來(lái)的危害，還降低了使用風(fēng)險(xiǎn)。但大多噬菌體的研究都是關(guān)于治療動(dòng)物的病原體，如靜脈注射SH-Ab15519噬菌體成功治療Acinetobacterbaumannii導(dǎo)致的小鼠肺部感染[85]，Jończyk等[86]利用噬菌體成功治療Propionibacteriumacnes引起的痤瘡，此外，Jamal 等和 Leskinen 等成功利用噬菌體裂解了銅綠假單胞桿菌[87]和金黃色葡萄球[88]菌。這些研究顯示出噬菌體療法治療病原菌的優(yōu)勢(shì)，但其在昆蟲(chóng)中，特別是在重要的經(jīng)濟(jì)昆蟲(chóng)蜜蜂中的應(yīng)用并不多見(jiàn)。雖然Brady等[80]應(yīng)用噬菌體成功預(yù)防和治療了AFB，但在噬菌體制劑，保存時(shí)間、用法用量等方面并沒(méi)有進(jìn)行深入研究，還無(wú)法在蜜蜂養(yǎng)殖的實(shí)際中應(yīng)用。因此在今后的研究中，這些將成為研究的重點(diǎn)。隨著研究的深入，噬菌體療法作為高效、專(zhuān)一的抗生素替代品會(huì)有廣闊的應(yīng)用前景。