定量核磁共振氫譜測(cè)定新藥替格瑞洛

張芬芬，沈文斌，徐開(kāi)兵，楊 明

定量核磁共振氫譜測(cè)定新藥替格瑞洛

張芬芬1，沈文斌2，徐開(kāi)兵1，楊 明1*

1. 東華大學(xué) 分析測(cè)試中心，上海 201620；2. 中國(guó)藥科大學(xué) 藥物研究院，江蘇 南京 210009

本文建立了基于核磁共振氫譜（1H NMR）測(cè)定新藥替格瑞洛絕對(duì)含量的方法．采用Bruker Avance 300型NMR譜儀，以磺胺多辛為內(nèi)標(biāo)；以替格瑞洛中質(zhì)子信號(hào)H7.14（2H, m）和H7.04（1H, s），磺胺多辛質(zhì)子信號(hào)H8.04（1H, s）、H7.73（2H, d）和H6.54（2H, d）作為定量峰；以氘代甲醇（CD3OD）為溶劑進(jìn)行測(cè)定．測(cè)定條件為：探頭溫度為308 K，譜寬為3 511.5 Hz，中心頻率為1 470.6 Hz，脈沖翻轉(zhuǎn)角為30?，延遲時(shí)間為10 s，采樣次數(shù)為16，線寬因子為0.3 Hz．在此實(shí)驗(yàn)條件下，替格瑞洛樣品與內(nèi)標(biāo)磺胺多辛的定量峰分離良好，實(shí)驗(yàn)結(jié)果精密度較高、重復(fù)性較好、線性范圍較寬，其線性擬合方程為：=1.053- 0.081（=0.996，=5）．最終測(cè)得樣品中替格瑞洛含量為99.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（）為0.20%．該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、快速，適用于替格瑞洛樣品的絕對(duì)含量測(cè)定．

核磁共振氫譜；替格瑞洛；含量測(cè)定

引 言

替格瑞洛[ticagrelor圖1(a)]，化學(xué)名為(1S,2S,3R,5S)-3-[7-[(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)環(huán)丙氨基]-5-(硫丙基)-3H-[1,2,3]三唑[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-(2-羥基乙氧基)環(huán)戊烷-1,2-二醇，是由英國(guó)阿斯利康公司研制開(kāi)發(fā)的一種新的治療急性冠狀動(dòng)脈綜合征的藥物[1]，其通過(guò)防止血液中血小板形成結(jié)塊來(lái)預(yù)防血栓，進(jìn)而減少心血管事件的發(fā)生．2011年7月20日，美國(guó)食品及藥物管理局（Food and Drug Administration，F(xiàn)DA）正式批準(zhǔn)替格瑞洛上市．目前，《中國(guó)藥典》2015年版及最新版的《美國(guó)藥典》、《歐洲藥典》、《日本藥局方》均未收載替格瑞洛的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)．作為創(chuàng)新藥，目前報(bào)道較多的是替格瑞洛的藥理作用及療效[2-7]，其檢測(cè)方法也有少量報(bào)道，如高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）及液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectroscopy，LC/MS/MS）[8]．雖然光譜法準(zhǔn)確可靠，但需特定的對(duì)照品才能完成定量測(cè)定[9,10]．目前，還未見(jiàn)使用核磁共振（Nuclear Magnetic Resonance，NMR）技術(shù)對(duì)其含量進(jìn)行測(cè)定的報(bào)道．

定量核磁共振法（Quantitative NMR，QNMR）基于各化學(xué)環(huán)境中質(zhì)子吸收峰的面積與質(zhì)子數(shù)呈正比，不需特定的對(duì)照品、快速準(zhǔn)確、特異性強(qiáng)，特別適合無(wú)對(duì)照品的新藥的含量測(cè)定．核磁共振氫譜（1H NMR）因具有較高的檢測(cè)靈敏度，廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥[11]、化學(xué)[12]及化工[13]等領(lǐng)域，已被收載于《中國(guó)藥典》2015版．本文以磺胺多辛，化學(xué)名為4-(對(duì)氨基苯磺酰氨基)-5,6-二甲氧基嘧啶[圖1(b)]為內(nèi)標(biāo)，根據(jù)作者所在課題組的經(jīng)驗(yàn)[14]建立了基于1H NMR測(cè)定替格瑞洛原料藥絕對(duì)含量的方法，研究了溶劑、內(nèi)標(biāo)物及NMR實(shí)驗(yàn)參數(shù)對(duì)測(cè)量結(jié)果的影響，為該物質(zhì)的含量測(cè)定提供了一種新思路．

圖1 (a)替格瑞洛和(b)磺胺多辛的化學(xué)結(jié)構(gòu)（字母標(biāo)記處的質(zhì)子信號(hào)為所選定量峰）

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Bruker Avance 300型超導(dǎo)NMR譜儀，配備QNP探頭；分析用電子天平（Mettler Toledo，AB265-S，感量0.01 mg）；真空干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）．替格瑞洛待測(cè)樣品（揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司提供）；磺胺多辛內(nèi)標(biāo)（批號(hào)40918，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為98.0%，中國(guó)食品藥品檢定研究院提供）；氘代甲醇（CD3OD，99.8%氘代，Sigma-Aldrich公司）．

1.2 樣品制備

分別精密稱(chēng)取一定量的磺胺多辛及替格瑞洛待測(cè)樣品，置于同一離心管，加入0.5 mL的CD3OD，振蕩溶解、渦旋混勻，轉(zhuǎn)移至5 mm NMR樣品管中。

1.3 NMR實(shí)驗(yàn)和譜圖處理

通過(guò)分析溶劑、NMR實(shí)驗(yàn)參數(shù)，包括延遲時(shí)間（1）、采樣次數(shù)（）、脈沖翻轉(zhuǎn)角（），及圖譜處理技術(shù)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響（后文將給出具體的實(shí)驗(yàn)參數(shù)及其對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響分析），本文最終確定的NMR檢測(cè)方案為以CD3OD為溶劑，以磺胺多辛為內(nèi)標(biāo)，測(cè)試條件如下：譜寬為3 511.5 Hz（譜儀對(duì)應(yīng)的質(zhì)子共振頻率為300.1 MHz時(shí)）、中心頻率為1 470.6 Hz（譜儀對(duì)應(yīng)的質(zhì)子共振頻率為300.1 MHz時(shí)）、30?、時(shí)間域數(shù)據(jù)點(diǎn)為32 k，測(cè)定溫度為308 K，延遲時(shí)間為10 s，為16．每份樣品平行測(cè)定5次，取平均值．采用線寬因子為0.3 Hz的窗函數(shù)對(duì)原始的自由感應(yīng)衰減（Free Induction Decay，F(xiàn)ID）信號(hào)進(jìn)行傅里葉變換得到頻域譜，然后對(duì)譜圖進(jìn)行手動(dòng)相位和基線校正，以及化學(xué)位移定標(biāo)處理．

1.4 替格瑞洛含量的測(cè)定

采用(1)式計(jì)算待測(cè)樣品替格瑞洛樣品的含量：

I為替格瑞洛待測(cè)樣品定量峰的積分面積，IS為磺胺多辛內(nèi)標(biāo)定量峰的積分面積；N和IS分別為替格瑞洛待測(cè)樣品和磺胺多辛內(nèi)標(biāo)定量峰包含的質(zhì)子數(shù)（N= 3，IS= 5）；M和IS分別為替格瑞洛和磺胺多辛的相對(duì)分子質(zhì)量（M= 522.57，IS= 310.33）；m和IS分別為替格瑞洛待測(cè)樣品和磺胺多辛內(nèi)標(biāo)的稱(chēng)樣量；P和IS分別為替格瑞洛和磺胺多辛內(nèi)標(biāo)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（IS= 98.0%）．

2 結(jié)果與討論

2.1 實(shí)驗(yàn)條件的確定

2.1.1 溶劑的選擇

合適的溶劑除了對(duì)樣品和內(nèi)標(biāo)均有良好的溶解性外，其殘留的信號(hào)峰應(yīng)不干擾所分析樣品的信號(hào)峰．替格瑞洛在氯仿、二甲亞砜及甲醇中溶解較好，在水中微溶．但經(jīng)過(guò)試驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)當(dāng)溶劑為氯仿和二甲亞砜時(shí)，替格瑞洛某些質(zhì)子的NMR信號(hào)呈現(xiàn)為兩組峰，影響定量的準(zhǔn)確性；而當(dāng)溶劑為CD3OD時(shí)，上述現(xiàn)象會(huì)隨著探頭溫度的升高而消失．而且內(nèi)標(biāo)磺胺多辛在甲醇中也較易溶解．因此本文最終確定溶劑為CD3OD、測(cè)試溫度為308 K．

2.1.2 NMR實(shí)驗(yàn)參數(shù)的選擇

2.1.2.11的選擇

在QNMR實(shí)驗(yàn)中，1必須設(shè)定的足夠長(zhǎng)（≥51）[15]，才能使原子核完全弛豫，進(jìn)而確保被積分的信號(hào)強(qiáng)度與原子核數(shù)目呈正比．為考量1對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，針對(duì)同一待測(cè)樣品，我們分別將1設(shè)置為2 s、5 s、10 s、20 s和40 s．結(jié)果表明，當(dāng)1≥10 s后，待測(cè)樣品及內(nèi)標(biāo)的定量峰的積分面積不再變化．為同時(shí)滿(mǎn)足1≥51，且節(jié)省采樣時(shí)間，本文選擇1為10 s．

2.1.2.2的選擇

的大小直接影響NMR信號(hào)的信噪比（Signal to Noise Ratio，/）：越大，信噪比越高，定量越準(zhǔn)確；反之，則會(huì)影響定量的準(zhǔn)確性．對(duì)于QNMR，一般要求/≥ 250[16]．但越大，采樣時(shí)間也越長(zhǎng)．為考量對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，針對(duì)同一待測(cè)樣品，我們分別將設(shè)定為2、4、8、16、32和64．結(jié)果表明，當(dāng)≥16時(shí)，待測(cè)樣品及內(nèi)標(biāo)NMR定量峰的信噪比已滿(mǎn)足定量分析的要求，為節(jié)省采樣時(shí)間，本文選擇為16．

2.1.2.3的選擇

為考量對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，針對(duì)同一待測(cè)樣品，我們對(duì)設(shè)置為10?~90?范圍，間隔為10?，對(duì)樣品與內(nèi)標(biāo)定量峰的積分面積之比進(jìn)行了分析。結(jié)果顯示，當(dāng)≥ 20?時(shí)，樣品與內(nèi)標(biāo)定量峰的積分面積之比已無(wú)明顯變化，定量峰信噪比滿(mǎn)足定量要求．當(dāng)= 30?時(shí)，實(shí)驗(yàn)條件穩(wěn)定，所需延遲時(shí)間較少，故選擇= 30?作為實(shí)驗(yàn)的脈沖角度．

2.1.3 圖譜處理技術(shù)

NMR圖譜的正確處理可以提高定量結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度．采集到樣品的自由感應(yīng)衰減（Free Induction Decay，F(xiàn)ID）信號(hào)后，需首先利用傅里葉變換將時(shí)域譜變換為頻域譜。較大的線寬因子可以提高信號(hào)的信噪比，但是也會(huì)使得臨近信號(hào)分辨率下降[15]．綜合考慮，本文采用線寬因子為0.3 Hz的窗函數(shù)對(duì)原始的FID信號(hào)進(jìn)行傅里葉變換得到頻域譜．然后，對(duì)NMR圖譜的后處理包括相位和基線校正、化學(xué)位移定標(biāo)，以及定量峰積分．相位和基線校正的質(zhì)量會(huì)顯著影響積分面積，進(jìn)而影響定量的準(zhǔn)確性．在 QNMR 實(shí)驗(yàn)中，最理想的相位校正方式是經(jīng)驗(yàn)豐富的操作者進(jìn)行手動(dòng)相位校正．基線校正有多種方法，包括多項(xiàng)式函數(shù)法、sine 函數(shù)法、指數(shù)函數(shù)法、三次樣條差值法、分段校正法等．其中多項(xiàng)式函數(shù)法易于操作、直觀簡(jiǎn)單，應(yīng)用較多；而且手動(dòng)校正的效果明顯優(yōu)于自動(dòng)校正．正確進(jìn)行相位和基線校正、準(zhǔn)確進(jìn)行化學(xué)位移定標(biāo)之后，即可對(duì)所選的定量峰進(jìn)行積分．一般而言，為使積分面積的準(zhǔn)確度達(dá)到99%，積分范圍應(yīng)為峰寬的32倍[17]．本文嚴(yán)格按照?qǐng)D譜處理技術(shù)的要求對(duì)NMR圖譜進(jìn)行處理，以得到準(zhǔn)確的結(jié)果．

2.1.4 內(nèi)標(biāo)及定量峰的選擇

理想的內(nèi)標(biāo)應(yīng)滿(mǎn)足以下條件：內(nèi)標(biāo)的定量峰與待測(cè)樣品的定量峰分離良好，易溶于測(cè)試溶劑，不與待測(cè)樣品相互作用，分子量與待測(cè)樣品接近，等等．替格瑞洛的1H NMR譜圖（圖2）顯示其在高場(chǎng)區(qū)H0.5~5.5和低場(chǎng)區(qū)H6.8~7.7信號(hào)較為密集，因此，可選擇在低場(chǎng)區(qū)（H5.5~6.8和H7.7~8.5）出現(xiàn)信號(hào)的物質(zhì)作為內(nèi)標(biāo)．綜合考慮NMR圖譜特征、所用溶劑，參照文獻(xiàn)[18]以及本課題組的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)：磺胺多辛在H5.5~6.8和H7.7~8.5 區(qū)域峰型簡(jiǎn)單、與樣品信號(hào)無(wú)重疊；性質(zhì)穩(wěn)定；分子量較大，與替格瑞洛分子量之比約為1:2；作為內(nèi)標(biāo)物稱(chēng)樣量與樣品稱(chēng)樣量近似，可減少稱(chēng)樣量誤差；溶解性良好．因此，本文選擇磺胺多辛作為內(nèi)標(biāo)物．而鹽酸吉西他濱在甲醇中溶解性較差，不宜作為內(nèi)標(biāo)．

待測(cè)樣品及內(nèi)標(biāo)的定量峰均應(yīng)選擇不受其他信號(hào)干擾的孤立峰．若化合物中多個(gè)信號(hào)均符合上述條件，最好采用其積分面積之和，以減小誤差．處于不同化學(xué)環(huán)境的質(zhì)子的NMR弛豫時(shí)間不同，在 QNMR 實(shí)驗(yàn)中，待測(cè)樣品和內(nèi)標(biāo)最好選擇處于相似化學(xué)環(huán)境的質(zhì)子作為定量峰．由圖2可知，替格瑞洛位于H7.14和H7.04的信號(hào)盡管裂分為多重峰，但是仍相對(duì)獨(dú)立，而且與磺胺多辛位于H8.04、H7.73和H6.54的信號(hào)均無(wú)重合，因此本文選定H7.14（2H, m）和H7.04（1H, s）為替格瑞洛待測(cè)樣品的定量峰，H8.04（1H, s）、H7.73（2H, d）和H6.54（2H, d）為磺胺多辛內(nèi)標(biāo)的定量峰．為驗(yàn)證選用替格瑞洛中多重質(zhì)子峰做定量的影響，我們進(jìn)一步做了19F NMR定量實(shí)驗(yàn)，其測(cè)定結(jié)果為替格瑞洛含量是99.3%。在95%的置信水平時(shí)，結(jié)果與1H NMR結(jié)果相比較沒(méi)有顯著性差異．

2.2 替格瑞洛待測(cè)樣品的含量測(cè)定

通過(guò)上述分析，本文最終確定的NMR實(shí)驗(yàn)條件如1.3節(jié)所述．替格瑞洛待測(cè)樣品1H NMR譜中位于H7.14（2H, m）和H7.04（1H, s）的信號(hào)作為其定量峰，磺胺多辛內(nèi)標(biāo)1H NMR譜中位于H8.04（1H, s）、H7.73（2H, d）和H6.54（2H, d）的信號(hào)作為其定量峰．并按照(1)式計(jì)算待測(cè)樣品中替格瑞洛的含量：I為替格瑞洛待測(cè)樣品的1H NMR譜中位于H7.14和H7.04的信號(hào)的積分面積之和，IS為磺胺多辛內(nèi)標(biāo)1H NMR譜中位于H8.04、H7.73和H6.54的信號(hào)的積分面積之和；N和IS分別為替格瑞洛待測(cè)樣品和磺胺多辛內(nèi)標(biāo)定量峰包含的質(zhì)子數(shù)（N= 3，IS= 5）．

測(cè)定供試品的結(jié)果如表1所示，以磺胺多辛為內(nèi)標(biāo)，含量均值為99.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（Relative Standard Deviation，）為0.20%．

表1 替格瑞洛含量測(cè)定結(jié)果

目前，國(guó)際上尚未發(fā)布關(guān)于NMR定量分析方法建立與驗(yàn)證的相關(guān)技術(shù)規(guī)范，參照人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)（International Conference on Harmonization，ICH）[19]的指導(dǎo)原則和相關(guān)文獻(xiàn)[20]，我們對(duì)該方法的線性范圍、精密度、穩(wěn)定性和耐用性進(jìn)行了驗(yàn)證．

2.2.1 線性范圍的測(cè)定

保持內(nèi)標(biāo)質(zhì)量不變，使替格瑞洛待測(cè)樣品與磺胺多辛內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的量之比在0.8:1~1.2:1范圍內(nèi)變化，精密稱(chēng)取內(nèi)標(biāo)和替格瑞洛樣品適量于離心管中．按照1.2節(jié)所述配制5份系列溶液，依據(jù)1.3節(jié)所述進(jìn)行NMR實(shí)驗(yàn)和譜圖處理，以替格瑞洛待測(cè)樣品與磺胺多辛內(nèi)標(biāo)的物質(zhì)的量比為橫坐標(biāo)，其單位質(zhì)子數(shù)的積分面積（定量峰積分面積之和除以所用定量質(zhì)子數(shù)）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為：=1.053- 0.081（= 0.996，=5），表明在替格瑞洛待測(cè)樣品與磺胺多辛內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的量之比在0.8:1~1.2:1范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好（具體結(jié)果見(jiàn)表2）．

表2 線性范圍測(cè)定

2.2.2 精密度實(shí)驗(yàn)

精密稱(chēng)取磺胺多辛內(nèi)標(biāo)和替格瑞洛待測(cè)樣品適量于離心管中，平行制備6份樣品，按照1.3節(jié)所述于不同天進(jìn)行1H NMR實(shí)驗(yàn)和譜圖處理，每份樣品平行測(cè)定5次，按照(1)式計(jì)算替格瑞洛含量，考察該方法的日內(nèi)精密度及日間精密度．結(jié)果表明，第一天和第二天測(cè)得替格瑞洛含量分別為99.1%、99.4%，分別為0.08%、0.10%（=6）；不同天測(cè)得樣品中替格瑞洛含量平均值為99.2%，為0.17%（=6），表明該方法的日內(nèi)及日間精密度均良好，具體結(jié)果見(jiàn)表3．

表3 日內(nèi)及日間精密度的測(cè)定

2.2.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取同一待測(cè)樣品溶液分別在一天內(nèi)的第0、6、12和24 h進(jìn)行NMR實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示待測(cè)樣品中替格瑞洛與磺胺多辛內(nèi)標(biāo)的峰面積之比的為0.09%（=4）．表明待測(cè)樣品的CD3OD溶液室溫放置24 h穩(wěn)定．

2.2.4 耐用性實(shí)驗(yàn)

耐用性系指當(dāng)測(cè)試條件有微小變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度．本文主要考察采樣次數(shù)、溫度及內(nèi)標(biāo)的量變化對(duì)該實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，按1.2節(jié)所述配制樣品，在采樣次數(shù)為12、16、20，測(cè)試溫度為308 K、313 K，內(nèi)標(biāo)稱(chēng)樣量變化范圍小于1 mg實(shí)驗(yàn)條件下分別采集1H NMR譜圖．結(jié)果表明，在采樣次數(shù)為12~20范圍內(nèi)變化時(shí)，采樣次數(shù)對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響較小，待測(cè)樣品中替格瑞洛含量測(cè)定值的為0.20%；測(cè)試溫度在308~313 K的范圍變化時(shí)，待測(cè)樣品中替格瑞洛含量測(cè)定值的為0.16%；當(dāng)內(nèi)標(biāo)稱(chēng)樣量在(5.9±1) mg范圍內(nèi)變化時(shí)，待測(cè)樣品中替格瑞洛含量測(cè)定值的為0.19%：表明該方法耐用性較好．

3 結(jié)論

各國(guó)藥典尚未收載新藥替格瑞洛含量測(cè)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，而且相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道也較少，故對(duì)其研究具有重要意義．本文基于1H NMR技術(shù)，以磺胺多辛為內(nèi)標(biāo)、CD3OD為溶劑，直接稱(chēng)量法配制待測(cè)樣品溶液，在理想的實(shí)驗(yàn)條件下，選擇1H NMR譜中位于H7.14和H7.04的信號(hào)為替格瑞洛定量峰，位于H8.04、H7.73和H6.54的信號(hào)為磺胺多辛內(nèi)標(biāo)的定量峰，測(cè)得待測(cè)樣品中替格瑞洛含量為99.4%（= 0.20%）．雖然在本文所采用的原料藥及內(nèi)標(biāo)質(zhì)量較大（均為毫克級(jí)），但是提高NMR譜儀磁場(chǎng)強(qiáng)度或者采用超低溫探頭等方法均可以大大降低所需的樣品量．本文所建立的方法操作簡(jiǎn)便、快速準(zhǔn)確、不破壞樣品，為替格瑞洛研發(fā)過(guò)程中的含量測(cè)定提供了一種新的手段，也為其質(zhì)量控制研究提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)．

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A Proton Nuclear Magnetic Resonance Method for Quantitative Analysis of Ticagrelor

-1，-2，1，1*

1. Research Center for Analysis and Measurement, Donghua University, Shanghai 201620, China; 2. Pharmaceutical Research Institute, China Pharmaceutical University, Nanjing 210009, China

A novel proton nuclear magnetic resonance (1H NMR) method for determining the absolute content of ticagrelor was proposed. The ideal spectra were obtained on a Bruker Avance-300 spectrometer with deuterated methanol (CD3OD) as the solvent and sulfadoxin as the internal standard. The ticagrelor signals atH7.14 (2H, m) andH7.04 (1H, s), as well as those of sulfadoxin atH8.04 (1H, s),H7.73 (2H, d) andH6.54 (2H, d), were selected for quantitative analysis. The detection conditions were as following: probe temperature 308 K, spectrum width 3 511.5 Hz, center frequency 1 470.6 Hz, pulse angle30?, delay time (1) 10 s, number of scans 16 and line broadening 0.3 Hz. The signals from ticagrelor and internal standard sulfadoxin showed good separation, precision, reproducibility, and wide linearity ranges with=1.053-0.081 (=0.996,=5). The content of ticagrelor was estimated to be 99.4% (=0.20%). This method was proven simple, accurate and rapid.

proton nuclear magnetic resonance (1H NMR), ticagrelor, content determination

O657.61；O482.53

A

10.11938/cjmr20192705

2019-01-03;

2019-04-08

* Tel: 021-67792192, E-mail: yangming@dhu.edu.cn.